1、S 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1944-2007 动物及其制品中细菌耐药性的测定纸片扩散法Detection of antimicrobial resistance of the bacteria in animal and animal pr咄Icts一Disk diffusion testing 2007-08-06发布2008-03-01实施，;!幸专lIi.毛jLEZi注中华人民共和国发布阳明/国家质量监督检验检疫总局. _._ 目H昌S:-.I/T 1944-2007 本标准的附录A、附录B、附录C为规范性附录，附录D和附录E为资料性附录。本标准由国家认证认可监督
2、管理委员会提出并归口。本标准起草单位z中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人g韩伟、顾鸣、肖云民、江恙琪。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。1 范围动物及其制品中细菌耐药性的测定纸片扩散法本标准规定了动物及其制品中细囱耐药性的纸片扩散检测方法。S:I/T 1944-2007 本标准适用于动物及其制品中分离的大肠杆菌、沙门氏茵和金黄色葡萄球菌耐药性的检测，其他动物源性细菌的耐药性测定可参考使用本标准。2 规范性引用文件3.3 中介interrnediate(I) 被测细菌对常规剂量的抗生素的反应率较敏感菌株低，其生长繁殖可被高于常规剂量的抗生素浓度抑制。3.4 耐药resi
3、slantCR) 被测细雨的生长繁殖不能被常规剂量的抗生素所抑削。3.5 纸片扩散法disk dirrusion lesting 也称Kindy-l3auerCKBl法，是一种定性药物敏感性试验方法。将含一定盘的抗菌药物的纸片贴在己te:种一定是的待il!细菌的琼脂平板上，经培养后，可在纸片周围出现抑菌环，以通过测量其大小来判SN/T 1944-2007 定该细菌对该药物的敏感性，是细商耐药性检测与监测中最常用的方法。4 样品的采集按GB/T4789. 1规定执行。5 测定方法5. 1 方法原理将于燥的含有一定浓度抗菌药物的滤纸片贴在已接种一定量的待测细菌的琼脂平板上。经培养后，由于抗菌药物向
4、桥养基的扩散，抑制一定距离范围内细菌的生长，可在纸片周围出现无细菌生长区，称抑菌环。测量抑菌环的大小，即可判定该细茵对某种药物的敏感程度。5.2 试剂和材料5.2. 1 培养基和试剂耐药性测定用的培养基和试剂见附录A。缓冲蛋白陈水(BPWl按照GB/T4789.28配制.5.2.2 质控菌株大肠杆菌(Escherichiaco!i lATCC 259220 大肠杆菌(EscherichiacolilATCC 35 218(仅用于内M胶/内股股酶抑制剂复合药物的质m。金黄色葡萄球商(Sta户hylococcusaureus l A TCC 25 923。5.2.3 灭菌棉拭子及纱布。5.2.4
5、定性滤纸:ll径6.00 mm6. 35 mm;厚度0.7mm-O. 8 mm;!(.t.片质量大于6.0mg。5.2.5 各种抗生素标准品及相应溶剂2标准品的保存应符合其贮存条件，青霉素类抗生素应现自己现用。5.2.6 商品化抗生素药物纸片，药物含量与CLS1标准一致。5.3 仪器和设备5.3. 1 培养箱:35C土1C。5.3.2 恒温摇床:35 C:!: 1 oc 0 5.3.3 烤箱:120C。5.3.4 高压灭菌锅:121C士1C。5.3.5 pH计z精度土O.10 5.3.6 冰箱:0.C4.C;一18C以下。5.3.7 打孔器2孔径6.00 mm6. 35 mm。5.3.8 微加
6、样器:10L.20L.5.3.9 微生物实验室通用玻漓器皿、移液管、培养皿等。5.3. 10 冷冻干煤机。5.3. 11 McFlarland标准比浊管或比浊仪。5.3. 12 L棒。,5.3. 13 银子，解剖刀。5.3. 14 药敏纸片分配器，6孔或8孔。5.3. 15 游标卡尺g精度0.1mm。5.3. 16 半自动或自动抑自环读取仪。5.4 样品制备5.4. 1 动物朋体将灭菌棉拭子或纱布用缓冲蛋白陈水(BPWl湿润，在动物同体的适当部位进行擦拭采样，放入100 mL缓冲蛋白陈水(BPWl中;或用灭菌解剖刀和假子切取适当面积的约2mm厚的组织或皮肤样本，放入100mL缓冲蛋白陈水(BP
7、W)中。5.4.2 肉及制品SN/T 1944-2007 以无菌操作，称取剪碎后的样品25g.放入装有225mL缓冲蛋白陈水抱美哇26-32 25-34 苯略目林18-24 头抱眼用28-34 24-33 替卡西林24-30 头抱替坦28-34 17-23 青霉素G26-37 头抱西丁23-29 23-29 茶夫西林16-22 头抱唾珩29-35 25-31 阿英西林/头抱嗖Jlii30-36 27-35 18-24 28-36 17-22 克拉维酸头于包尼西25-29 22-28 氨节西林/头抱他院25-32 16-20 19-24 29-37 13-19 舒巴坦拉氧头抱28-35 18-2
8、4 可E拉西林/氯碳头泡23-29 23-31 24-30 27-36 24-30 他哑巴坦头抱克盹23-27 替F西林J头抱地尼24-28 25-34 25-29 29-37 21-25 克拉维酸头抱泊月号23-28 19-25 头抱呐!琳21-27 29-35 11 头抱丙烯21-27 27-33 10 SN/T 1944-2007 表C.1 (续)抑菌环直径Imm抑前环j径/mm抗生素大肠杆菌金黄色抗生素大肠杆菌金黄色名称ATCC 葡萄球菌大肠杆菌名利ATCC 葡萄球菌大肠忏茵ATCC 35218 ATCC 35218 25922 ATCC 25923 25922 ATCC 25923
9、头抱孟多26-32 26-34 吉米t星29-36 27-33 头抱他美24-29 滔美沙皇27-33 23-29 头泡布烯27-35 诺氟沙星28-35 17-18 亚胶培南26-32 氧氟沙星29-33 24-28 美洛培南28-34 29-37 依诺沙星28-36 22-28 氨曲南28-36 格帕沙星28-36 26-31 庆大霉素19-26 19-27 词帕沙星30-38 27-33 阿未卡星19-26 20-26 氟洛i沙星28-34 21-27 卡那霉素17-25 19-26 察院酸22-28 奈替来里22-30 22-31 奎奴fJ汀/21-28 妥布霉素18-26 19-29
10、 达福普汀链霉素12-20 4-22 甲氧带氨暗院24-32 24-32 阿奇霉素21-26 /磺胶甲昭岐克拉霉素26-32 甲氧节氨暗院21-28 19-26 红霉素22-30 氯霉素21-27 19-26 地红霉素18-26 映哺妥因20-25 18-22 四环素18-25 24-30 磷霉素22-30 25-33 多囚环素18-24 23-29 利榻平8-10 26-34 米诺环素19-25 25-30 万古霉素17-21 环丙沙星30-40 22-30 替拉考丁15-21 左氧沙星29-37 25-30 克林霉素24-30 加替沙星30-37 27-33 泰利霉素24-30 英西沙星2
11、8-35 28-35 利奈瞠胶25-32 西诺沙皇26-32 注z本表内容摘自美国临床和实验室标准研究所(CLSI)(抗生素敏感性试验纸片扩散法操作标准和美国临床和实验室标准研究所(CLSD!抗生素敏感试验标准儿11 SN/T 1944-2007 附录D(资料性附录细菌耐药性检测中推荐挑选的抗生素分组表D.1细茵耐药性检测中推荐挑选的抗生素分组分组肠奸商H(除沙门氏菌外)沙门氏因属葡萄球囱属氨莘西林在1节目林苯嗖西林头m琳、头抱哩吩哇诺阴类常规试验的药物青霉素G甲氧辛氨暗院f庆大霉素E贯院甲日军略阿米卡It氮霉素i 阿青霉素或克拉霉素或红霉京阿莫林/，克拉维晴在头f在n;J氨吨飞飞马百守宿守丢
12、户=企告Ti 归阻2乎阳啊头也!也咬MWMVZEZV 替卡西林/克li!UY I g.,fj t寻头抱孟多、头抱尼翌日抖的! 松克林霉素选择试验的药物理?可二利奈嗖胶头泡芙略、f12眼酬9、他替挝、J 泰平IJ霉素手缸西ri 头抱略院、民抱略弘品手也斟松环丙沙豆、左氧沙里/ 万古霉在美洛西林、明白替卡西卢甲氧节氨降百昵/磺胶甲日军略甲氧节于知!哇/峨甲II;氨在南氧、毒f县7;、电在4 院/ f时氯霉素环丙沙皇、左氧沙旦、氧量U星、了卡部主素j 加替沙旦、莫两沙旦肘才飞J叫主如是，卢?.，./映附妥肉补充试验的药物授主F西林泊美沙皇、诺氟沙里f再美沙旦、诺氮沙墨、氧主t沙皇磺胶异IIt.吨加替
13、沙里氯碳头抱哄附妥因辈奴普汀/达桶普汀E遣胶异P:J3I1_坐甲氧乍氨晓咬/1肢甲目主哇注1，例一小框内药物的解释约果和l临床效力很相似.每个小框中只选作种药物111做试验。注2，本表内容摘自美国临床和实验室标准研究所(CLS1)(抗生素敏感性试验纸片扩散法操作标准B和美国临床和实验室标准研究所(CLSm抗生素敏感试验标准儿12 S:-I/T 1944-2007 附录E(资料性附录)产超广谱p-内酷胶酶的大肠杆菌和耐甲氧西林德金黄色葡萄球菌的测定与判定E.1 产超广谱p.内酷胶酶CESBL)的大肠杆菌的测定操作按纸片扩散法的规定进行。纸片含药量和抑茵环直径判定标准见表E.1.表E.1大肠杆菌中
14、ESBLs检测的筛选和确证试验质量控制z抑茵环直径!mm方法抗生素纸片吉药量/判定标准.A串4是;1;雷4自民萄备注(Ig/月大肠杆因因1.n1L，.mmi ATCC 0060: ATCC 25922 头抱泊2号10 运179.-16 2328 头抱他咙30 2532 之r710-18/- 筛选氨曲南主马衍/3-47 选择使用1种以上30 2836 试验药物纸片头泡哩的30 /;27 1二./17-25 2935 头抱曲松30 / Z5j/1624 2935 头J包他院30 头子臼他院/克| 头抱他院/克头抱他院/克H包他吭/拉维m-头袍的院拉维酸-头抱t拉维E主-头抱他咬30/10 确证克拉
15、维n2:?:5 ?币凶民2 饲时使用4种药物试验头抱哩肝头于包喔的/克纸片，头抱哩肘/拉维股头抱Z皇后3 克拉维酸;2 和实验室标准研究所E.2 耐甲氧西林的金黄色冒萄球击。，JA)药的量测和抑操作按纸片扩散法的规也行。纸片含因环直径判标准见表E_2。抗生素纸片古药盘/(问/片)判主1证ii.正/抑菌环宜径/-质1il控制:仰商环直径/mm备注m口1金黄色葡萄球陌ATCC苯附1西林12 1824 头抱西丁30 豆192329 纸片注2本表内容摘自美国临床和实验空标准研究所(CLS)!抗生素敏感性试验纸片扩散法操作标准和美国临床和实验室标准研究所(CL51)(抗生素敏感试驰标准儿13 SN/T 1944-2007 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准动物及其制品中细菌耐药性的测定纸片扩散法SN/T 19442007 导中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045网址电话，6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷祷开本880X1230 1/16 印张1.25 字数26千字2007年11月第一版2007年11月第一次印刷印数1一2o祷书号，155066 .18226 定价12.兀
