1、5 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2216-2008 进出口动物源食品中秋水仙碱残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法Determination of colchicine residues in foodstuffs of animal origin for import and export LC-MS/MS method 2008-11-18发布2009-06-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局SN/2216-2008 剧昌本标准的附录A和附录B均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国浙江出入境检验检疫局、中华人
2、民共和国深圳出人境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人:谢文、丁慧瑛、真君阳、岳振峰、陈笑梅、钱艳。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。I SN/T 2216-2008 进出口动物源食品中秋水仙碱残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法1 范围本标准规定了动物食品中秋水仙喊残留量检测的制样和液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于鱼、鸭肉、牛肉、牛肝、牛肾和牛奶中秩Jk.1111醋睹留骨的检测。2 方法提要3 试剂和材料除另有规定外，所有试制均为3.1 乙脯:高效液相包谱级。3.2 正己皖:高效液相色谱级。3.3 二氯甲皖:高效液相色i曾组3.4 甲醇2高敢液相色谱级。3.5 甲酸:高效
3、液相色谱级。3.6 磷酸二氢纳。3. 7 氢氧化俐。3.8 元水硫酸铀:650 .C灼烧43.9 甲醇水溶液:甲醇-水(4十3.10 0.15%甲酸溶液:移取O.3. 11 磷酸盐缓冲溶液:溶解1pH值J8. O.最后用水稀薄至13.12 秋水仙碱标准品(colchicine 3.13 秋水仙碱标准储备溶液:避光冷冻保存。有效期l个月。，再用Cl8固相萃取小桂净化，液中备用。1 mol!L氢氧化饷溶液调节溶液3.14 标准工作溶液:根据需要用空白样品榕液将标准储备液稀释成适当浓度的秋水仙碱标准洛液。临用前配置。3. 15 无水硫酸铀柱:80mmX40 mm(内径)筒形漏斗，底部垫5mm脱脂棉，
4、再装40mm无水硫酸铀。3.16 固相萃取柱:C18.500 mg.3 mL或相当者:使用前用5mL甲醇和5mL水预洗，保持柱、体湿润。3. 17 有机相微孔滤膜:0.45m.4 仪器和设备4. 1 高效液相色谱-质谱/质谱仪:配有电喷雾离子源。4.2 旋转蒸发器。4.3 粉碎机。SN/T 2216-2008 4.4 均质器。4.5 旋涡混合器。4.6 离心机:4000 r/min。4.7 氮吹仪。4.8 固相萃取装置。5 试样制备与保存5. 1 牛奶:从所取全部样品中取出有代表性样品约250mL，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样于o.C 4 .C保存。5.2 鱼
5、、鸭肉、牛肉、牛肝和牛肾:从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，用粉碎机粉碎，棍合均匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样于18 .C冷冻保存。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。6 测定步珊6.1 提取6. 1. 1 鱼、鸭肉、牛肉、牛肝和牛肾称取2g试样(精确到o.01 g)置于50mL具塞塑料离心管中，加入2mL磷酸盐缓冲溶液(3.11)，加入25mL二氯甲屁，在均质器中以14000r/min均质30s，以4000 r/min离心5min，将上层二氯甲皖提取液过无水硫酸柱，滤液收集于浓缩瓶中，样品残渣再加入20mL二氯甲烧，重
6、复上述操作，合并二氯甲屁提取液，在50.C以下水浴减压浓缩至近干，用4mL正己烧和4mL水依次将残渣转移至10 mL具塞玻璃离心管中，于旋涡混合器上以2000r/min.混匀1min，以2000r/min离心3min.弃去上层正己烧溶液，再加入4mL正己烧，重复上述操作，下层溶液待净化。6.1.2 牛奶称取4g试样(精确到0.01g)置于50mL具塞塑料离心管中，加甲醇至20mL，以4000 r/min离心5min，取10.0mL上清液加水至25mL，加20mL正己皖，于旋涡混合器上以2000 r/min，据匀1 min，以4000r/min离心3min，弃去上层正己烧溶液，下层溶鞭待净化。6
7、.2 净化将下层溶液转移至C18固相萃取柱(3.1肘，再用5mL水洗涤两次，洗涤液过C18固相萃取柱，弃去流出准，再用5mL甲醇水溶液(3.9)洗撮，负压抽干，6mL甲醇洗脱，收集全部洗脱液，在50.C以下水浴陆压浓缩至近干，用2.0mL甲醇-水0+1，体积比)定容，混匀，将榕液通过0.45m由膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。6.3 测定6.3.1 谊相色i曹串联质谱条件a) 色i普柱:Cs柱，150mmX 4.6 mm(内径)，5m或相当者pb) 流动相:乙脯0.15%甲酸水溶液(40+60，体积I:r.); c) 流速:0.4mL/min; d) 进样量:20L;e) 离子惊:电喷雾离于晾
8、pf) 扫描方式:正离子扫描;g) 检测方式:多反应监测;h) 雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均匀高纯氮气;使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达2 SN/T 2216-2008 到检测要求，参考条件参见附录A表A.l;i) 监测离子对(m/z):秋水仙碱400.2/310.2(定量离子)、400.2/326.2、400.2/358. 2。6.3.2 高效液相色i曾-串联质谱测定根据试样中被测样液的含量情况，选取待测物的响应值在仪器线性响应范围内的浓度进行测定，如超出仪器线性响应范围应进行稀释。在上述色谱条件下秋水仙碱的参考保留时间约为4.8min.标准熔液的选择性离子流图参见附B。6.3.3
9、 渣相色谱-串联质谱确证按照液相色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中待测物质的保留时间偏差在土2.5%之内。定量测定时采用标准曲线法。定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表l规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。褒1定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/Yo允许的相对偏差/Yo50 10-20 运1020-50 士20士25士30士506.3.4 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。7 结果计算和表述用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中秋水仙碱残留含量.it算结果需扣除空白值:X一旦旦Y一z
10、 、-F-A ，、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 式中:X一一试样中秋水仙碱的残留量，单位为微克每千克(g/kg); C, -一从标准曲线上得到的秋水仙碱播植割草皮，单位为纳克每毫升(ng/mU;V一-样液最终定容体秧，单位为毫升(mU;m 最终样液代表的试样质量，单位为克(g).8 测定低限(LOQ)和回收率8. 1 测定低限(LOQ)方法测定低限为1.0问/kg.8.2 回收率在不同添加浓度回收率数据见表2.表2秋水仙铺在不同基质申回收率范围基质添加浓度/(g/kg)回收率/%1. 0 70.4
11、-98.7 鱼5. 0 70.8-100.8 10.0 70.3-106.。1. 0 74.0-97.4 鸭肉5.0 74.0-97.5 10.0 75.2 - 103.6 3 SN/T 2216-2008 表2(续)基质添加浓度/(f1g/kg) 回收率/%1. 0 71.6-99.3 牛肉5.0 73.8-102.8 10.0 71.6-103.。1. 0 70.4-109.。牛肝5.0 73.3-102.2 10.0 73.7-101.。1. 0 70.2-98.3 牛骨一一.一一一-70.3-98.1 70.0-102.。78.4-105.。牛奶70.9-102.3 75.4-103.
12、。4 -附录A(资料性附录)API 4000 LC-MS/MS系统电喷雾离子源参考条件。监测离子对及电压参数:a) 电喷雾电压(1曰:4800V J b) 雾化气压力(GSl):289.59kPa(42 psi); c) 气帘气压力(CUP):172.375 kPa(25 psi); d) 辅助气流速(GS2):310. 275 kPa(45 psi); e) 离子源温度(TEM):540 o 碰撞气(CAD):34. 475 g) 去簇电压(DP):90 V; h) 碰撞室出口电压(CXP): i) 离子对、碰撞能量(CE)见表A.I待测物秋水仙碱a为定量离子对。SN/T 2216-2008
13、 碰撞能量(CE)!V38 35 31 1) 非商业性声明:附录A所列参数是在API4000质谱仪完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器。5 SN/T 2216-2008 附景B(资料性附录秋水仙醺标准晶选择性离子流圄4.92 0.5 1. 0 4l!辑川叫旷J斟旷s豁旷仍F仰川02勾均?归叭仰0飞叩lF26叫9咛?86气2乌9吨?3 阳2俨坷5吁吁!1.，14叫4句3叫m川2巧?忖怡咛?缰叩6阳!.J，.g，3卢严355.381. 5 2. 0 2. 5 3. 0 3. 5 4.0 4.5 5. 0 Ilmin a) 4.21
14、328.2 3.00312吨d-573川3.91.064.324叫.434.790.5 1. 0 1. 5 2.0 2. 5 3.0 3.5 4.0 4. 5 5.0 Imin b) 4930 4.93 3Oj 400.21310.2 2000 l0， 。吨1础620.871.131.20咱MOll-55l1382.016=2间.142.242.502.圈682.7431附13，d画A;-l6331吗.163.924.17 4 时lt-5647年.L5185.45 。.5 L 0 1. 5 2. 0 2. 5 3. 0 3. 5 4. 0 4. 5 5. 0 Imin c) 圈B.l秋水仙暗(1ng/mL)标准晶的选择性离子流圄6
