1、YC/T 166-2003 前言本标准是参照ISO/CD15677和美国公职分析化学家协会(AOAC)(分析方法手册)(第十四版)中3.148-3.150制定的。在参照ISO/CD15677的同时，考虑到国内烟草行业对总氮含量的测定方法，尽量在可溶性氮的测定步骤上与YC/T33保持致，因此亦参考了AOAC(分析方法手册。本标准由国家烟草专卖局提出。本标准由全国烟草标准化技术委员会CTC144)归口。本标准起草单位g国家烟草质量监督检验中心。本标准主要起草人王芳、张艳革、李萍、杨进。1 范围烟草和烟草制品总蛋白质含量的测定本标准规定了克达尔法测定烟草及烟草制品中蛋白质氮的方法。本标准适用于烟草和
2、烟草制品。2 规范性引用文件YC/T 166-2003 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 5606. 1卷烟抽样YC/T 5 烟草成批取样的一般原则YC/T 31 烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法3 原理用乙酸沉淀烟草样品中的蛋臼质氮，然后在浓硫酸及催化剂作用下转化为硫酸钱。强碱蒸馆释放出氨，用标准酸液接收。反滴定。4 试剂所有试剂均应为分析纯级，水应为蒸馆水
3、或至少同等纯度的水。4.1 铸粒。4.2 浓硫酸，d= 1. 84 g/mL(该试剂可引起严重烧伤)。4.3 红色氧化柔。4.4 硫酸梆。4.5 氢氧化纳硫代硫酸纳溶液:将500g氢氧化销和40g硫代硫酸销(Na2乌O，.5H，O)溶于水，稀释至1L4.6 乙酸，质量分数为0.5%。4.7 硫酸镀溶液.0.1mol/L, 4.8 硫酸标准滴定溶液.c(0.5H2SO, )=0.1 mol/L。4.9 氢氧化纳标准滴定溶液.c(NaOH)=0.1 mol/L , 4.10 甲基红指示剂.0.1%。5 仪器设备5.1 分析天平，精确至0.0002g，5.2 抽滤装置，直径120mm布氏漏斗，真空抽
4、滤装置。5.3 蒸馆装置.500mL克氏烧瓶，连接头.45球冷凝管和300mL锥形瓶。5.4 锥形瓶.300mL 5.5 克氏烧瓶.500mL YC!T 166-2003 5.6 移液管，25mL 5.7 滴定管，50mL(O. 1 mL刻度。5.8 量筒，25mL,100 mL, 250 mL, 5.9 定量滤纸，无氮。6 分析步骤6.1 抽样6. 1. 1 烟叶按YC/T5抽取烟叶作为实验室样品。6. 1. 2 卷烟按GB/T5606. 1抽取卷烟作为实验室样品。6.2 试样的制备按YC/T31制备试样。6.3 测定次数每个试样应平行测定两次。6.4 水分含量的测定按YC/T31测定试样的
5、水分含量。6.5 萃取称取约1.5 g(精确至0.0002g)试料置于300mL锥形瓶(5.4)内，加入75mL乙酸溶液(4.的，加热保持沸腾15min，迅速用定量滤纸(5.9)在真空抽滤装置(5.2)内进行抽滤，并用乙酸溶液冲洗锥形瓶和沉淀物至滤液元色。然后转移滤纸和沉淀于克氏烧瓶(5.5)中。6.6 消化向克氏烧瓶中加入0.7g红色氧化隶(4.3)，lOg硫酸伺(4.4)及25mL浓硫酸(4.2)，混合均匀。将克氏烧瓶移入通风橱内，斜置于定氮架上，瓶颈与水平面成450600夹角。缓慢加热，待泡沫停止，溶液滋清后，再继续煮沸1h。冷却，用约50mL70 mL水冲洗瓶颈。6.7 蒸馆向克氏瓶中
6、加入约200mL水，加镑粒(4.1)三颗，沿瓶壁小心加入氢氧化销一硫代硫酸销溶液(4.5)90 mL, 立即连接于蒸馆装置上，用内有25mL硫酸标准滴定溶液(4.8)和34滴指示剂(4.10)的锥形瓶(5.4)作接收器。冷凝管末端应浸入酸液中。蒸馆直到馆出液体积达150mL, 注g氢氧化纳-硫代硫酸纳溶液应小心加人，以避免温度迅速升高而失去氨。蒸馆过程中三角瓶中液体应保持红色。否则，应减少称样量重新消化蒸馆。蒸馆结束，移开镀形瓶，以免倒吸，用水冲洗冷凝管末端。6.8 商定用氢氧化纳标准滴定溶液(4.的滴定馆出液至指示剂颜色由红色变为无色即为终点。6.9 测试6.9.1 空白试剂测试用等量的茂糖
7、替代样品测试，重复6.6，6.7和6.8，该滴定的终点应是有效的零点，并对滴定(6.8)进行校正。如果误差较小，对样品测试值加以修正。如果误差较大，应查找哪一种试剂引入了氮或者设备的某位置消耗了氢氧化销。纠正错误并重复测试。注2假设任何不吉氮的有机化合物，带有吉氮的或派生氮的试剂也可能被使用，会引起同样的反应。YCjT 166-2003 6.9.2 仪器校验测试6.9.2.1 蒸锢装置的测试加人10mL硫酸镀溶液(4.7)于蒸馆瓶中，然后继续6.7和6.8操作。结果偏低，是由于蒸恼不完全或仪器可能有渗漏。纠正错误并重复测试。注:在蒸馆仪器第一次使用和以后，应定时执行这种校验测试.6.9.2.2
8、 方法的测试测定已知氮含量0.5g的有机氮化合物的混合物，如色氨基酸、赖氨酸、丙氨酸、亮氨酸等和0.5g 的无有机氮化合物(煎糖或葡萄糖)进行6.6、6.7和6.8操作。结果偏低，应是6.9.2.1的原因，或由于消化期间产物的丢失，消化不充分(如加热温度不合适或催化剂质量太差)。注，在实验室第次采用这种方法时进行该校验。7 结果的计算与表述7.1 蛋白质含量的计算方法样品的蛋白质含量P以干燥样品的百分比表述，由式(1)得出z (V, - Vo ) X c, - V, X C2J X 14 P = 6.25 X L , . o. ,-, . . , :. . . . X 100 %( 1 ) m X (1 - W) X 1 000 式中g6.25 蛋白质中氮的转换系数，Vo-空白滴定消耗硫酸标准溶液的体积，单位为毫升(mL);V，-硫酸标准溶液的体积，单位为毫升(mL);V2一滴定耗用的氢氧化纳标准溶液的体积，单位为毫升(mL);C, 硫酸标准溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L); C2 氢氧化销标准溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L); m 烟草样品质量，单位为克(g); W 烟草样品的水分百分含量，%。7.2 结果的表述以两次平行测定的平均值作为测定结果，精确至0.01%。7.3 精密度两次平行结果绝对值之差不应大于0.20%。
