1、中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验产气芙膜梭菌检验Microbiol。glcalexamination of food hygiene Examination of Clostridium perfringens 1 主题内容与适用范围本标准规定了产气爽膜梭菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中产气英膜梭菌的检验。2 引用标准GB 4789. 28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3. 1 均质器。3. 2 显微镜。3. 3 温箱，36士1。3. 4 水浴。3. 5 厌氧培养装置z常温催化除氧式或碱性焦性没石子酸除氧式。3-6 吸管，lmL,lOmLo3. 7
2、 试管。3. 8平皿。3.9接种环或接种针。4 培弊基和试11114. 1 鹿肉培养基，GB4789. 28中4.67 0 4.2亚硫酸盐多粘菌素磺胶嗜睫琼脂（SPS),GB 4789. 28中4.690 4. 3 液体硫乙醇酸盐培养基（FT),GB 4789. 28中4.70。4. 4 动力硝酸盐培养基，GB4789. 28中4.72。4.5 含铁牛奶培养基，GB4789. 28中4.7104-6 卵黄琼脂培养基，GB4789. 28中4.68。4.7 0.1%蛋白陈水稀释f!J:GB 4789. 28中4.8604.8硝酸盐还原试弗l,GB 4789. 28中3.17 0 4. 9革兰氏染
3、色液：GB4789. 28中2.Zo 中华人民共和国卫生部19940318批准GB 4789. 13-94 代替GB4 789. 13 84 1994-09-01实施207 GB 4 7 8 9. 1 3 94 5检验程序产气英膜梭菌检验程序如下s检样25g(mLJ检样225mLO.！%蛋白陈水稀膺剂6操作步骤6. 1 活菌汁数培养6. 1. 1 按无菌操作称取食品检样25g(mL）放入均质器，加o.1%蛋白陈水稀释剂225ml，低速搅动1 2 min，使之均质化，作为1 10稀释液。6. 1. 2 以上述1 10稀释的均质液按1mL加0.1%蛋白陈稀释剂9mL做成102 10 6的系列稀释液
4、。6. 1. 3 吸取各稀释液lmL分别放入2个灭菌平皿内。每个平皿浇注约50的SPS琼脂1520ml, 仔细转动平皿，使稀释液和琼脂充分混匀。6. 1. 4 上述琼脂平板凝固后，倒置于厌氧培养装置内，于36士1培养24h。208 GB 4789.13 94 6. 1. 5选取长有30300个黑色菌落的平板计数黑色菌落数。6.2 确证试验6. 2. 1 由平板上任取10个黑色菌落，分别按种FT培养基，于36士1培养1824h。6.2.2 用上述培养液涂片，革兰氏染色镜检。产气爽膜梭菌为革兰氏阳性粗大杆菌，其耐热株可能形成卵形芽抱，位于菌体中央或近端，其宽度一般不大于菌体。6. 2. 3 用接种
5、环针）穿刺接种动力硝酸盐培养基，于36士1培养24h，观察接种线的生长情况，判断有无动力。然后，滴加甲荼胶液和对氨基苯磺酸液各0.5 mL，观察硝酸盐是否被还原。产气英膜梭菌无动力，能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。6. 2.4 取生长旺盛的FT培养液lmL接种于含铁牛乳培养基，在46水浴中培养2h后观察有无“暴烈发酵”现象，Sh内不发酵者为阴性。产气英膜梭菌发酵乳糖，凝固酷蛋白并大量产气，呈“暴烈l发酵”现象，但培养基不变黑。6. 2. 5用接种环取FT培养液点种于卵黄琼脂乎板（每张平板至少可接种10点，于36土1厌氧培养24 h，观察接种点的变化。产气英膜梭菌产生卵磷脂酶，分解卵黄中的卵磷脂，接种点的底部及周围形成乳白色的混浊带。6.3 菌数计算根据黑色菌落的计数（6.1. 5）和确证试验的结果（6.2），计算每克（毫升食品检样的含菌数。例如：10.稀释液的平板长有黑色菌落100个，而供做确证试验的10个菌落中有7个被确证为产气英膜梭菌，则每克（毫升食品检样所含产气英膜梭菌数为2100 o. 7 10 = 7 105 附加说明z本标准由卫生部卫生监督司提出本标准由卫生部兰州生物制品研究所负责起草。本标准主要起草人王成怀。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。209
