1、中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验Microbiological examination of food hygiene Examination。fBacillus cereus 1 主题内容与适用范围本标准规定了蜡样芽胞杆菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中蜡样芽胞杆菌的检验。2 引用标准GB 4789. 2食品卫生微生物学检验菌落总数测定GB 4789. 28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3. 1 温箱，36士l。3.2 普通冰箱。3. 3 显微镜。3. 4 恒温水浴46土l。3.5天平。3.6 电炉。3. 7 吸管，1mL,10 m
2、Lo 3. 8载玻片。3.9均质器或乳钵。3. 10 L型涂布棒。3. 11 灭菌刀，剪，镀子。3. 12 三角瓶z容量500mL。4培养基和试J4. 1 肉浸液肉汤培养基，GB4789. 28中4.10 4.2酶蛋白琼脂培养基，GB4789. 28中4.65。4. 3动力硝酸盐培养基，GB4789. 28中4.720 4.4 缓冲葡萄糖蛋白陈水，GB4789. 28中3.4. 4. 5 血琼脂培养基，GB4789. 28中4.6。4. 6 3%过氧化氢溶液。4. 7 甲茶胶乙酸溶液。中华人民共和国卫生部199403 18批准210 GB 4789. 14 94 代替GB4789.14 84
3、1994 09-01实施GB 4789. 14-94 4.8对氨基苯磺酸乙酸溶液。4.9革兰氏染色液，GB4789. 28中2.2。4. 10甘露醇卵黄多粘菌素（MYP）琼脂培养基，GB4789. 28中4.64.4. 11 0. 5 %碱性复红染色液，GB4789. 28中2.8。4. 12木糖明胶培养基：GB4789. 28中4.66。5检验程序蜡样芽胞杆菌检验程序如下6 操作步骤6. 1 菌数测定选择性培养基（菌数测定）MYP 36士1巳I12 20h 菌数计算检样25g(mL）加225mL生理盐水做成1010. 的稀释液37，1824h 生t主且菌蓓观事报告选择性培养基分离培挥MYP
4、36土1l12 2oh 营养琼脂培养基以无菌操作将检样25g(mL）（按GB4789. 2测定），用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成lQI 10 5的稀释液。取各稀释液0.1mL，接种在两个选择性培养基一甘露醇卵黄多粘菌素（MYP）琼脂培养基上，用J，形棒涂布于整个表面，置36土1温箱培养1220h后选取适当菌落数的平板进行汁数，蜡样芽胞杆菌在此培养基上的菌落为粉红色（表示不发酵甘露醇，周围有粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶。计算后，从中挑取5个此种菌落做证实试验。根据证实为蜡样芽胞杆菌的菌落数计算出该平板上的菌落数，然后乘其稀释倍数，即得每克（或毫升）样品中所含蜡祥芽胞杆菌数，例如MYP平板的可疑
5、茵落为25个，取5个鉴定，证实为4个，乘上稀释倍数（如10），再乘上1g （或mL）检样数（取的是0.1 mL样）贝Ll为225 x 4/51010二2106.2分离培养取检样或稀释液划线分离培养于选择性培养基（MYP）上，置31c培养122oh,1JE取可疑的蜡样芽胞杆茵茵落（见6.1）接种于肉汤和营养琼腊做成纯培养，然后做证实试验。6. 3证实试验211 GB 4 78 9. 14 94 6. 3. 1 形态观察本菌为革兰氏阳性大杆菌，宽度在1m或1m以上，芽胞呈卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。6.3.2培养特性本菌在肉汤中生长混浊，常微有菌膜或壁环，振摇易乳化g在普通琼脂
6、平板上生成的菌落不透明、表面粗糙、似毛玻璃状或融蜡状，边缘不齐。6. 3. 3 生化性状及生化分型6.3.3.1 生化性状本菌有动力$能产生卵磷脂酶和酷蛋白酶，过氧化氢酶试验阳性，溶血；不发酵甘露醇和木糖g常能液化明胶和使硝酸盐还原g在厌氧条件下能发酵葡萄糖。6.3.3.2 生化分型蜡样芽胞杆菌可根据对拧橡酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、VP反应、明胶液化性状的试验，将该离分成不同的型别，见表lo表1蜡样芽胞杆菌生化分型生化试验型别拧橡酸盐利用硝酸盐还原淀粉水解V-P反应明胶液化I 十+ + + + 2 + + + + 3 十+ + + 4 + + + 5 + 十6 十+ + + 7 + +
7、+ 8 + + + 9 + + 10 + + + II + + + 十12 + + + 13 + 14 + + 15 + + + 6. 3. 4 与类似菌鉴别本菌与其他类似菌的鉴别见表2o表2蜡样芽胞杆菌与其他类似菌的鉴别项目巨大芽胞杆菌蜡祥芽胞杆菌苏云金芽胞杆菌革状芽胞杆菌炭瘟芽胞杆菌过氧化氢酶十+ + 十十动力士 士硝酸盐还原十+ + 十212 GB 4 7 8 9. 1 4 - 94 续表2项目巨大芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌苏E金芽胞杆菌草状芽胞杆菌炭瘟芽胞杆菌酶蛋白分解士十士士平卵黄反应十十十十葡萄糖利用（厌氧）十+ + 十甘露醇十木糖士溶血斗+ 丰丰已知致病菌特性产生肠毒素对昆虫致病假根样
8、生对动物和人致病的内毒素结晶注+90%100%的菌株阳性；90%100%的菌株阴性，士大多数菌株阳性s二在大多数菌株阴性。本菌在生化性状上与苏云菌芽胞杆菌极为相似，但后者可籍细胞内产生蛋白质毒素结晶加以鉴别。其检查方法如下取营养琼脂上纯培养物少许，加少量蒸馈水涂于玻片上，待自然干燥后用弱火焰固定，加甲醇于玻片上，半分钟后倾去甲醇，置火焰上干燥，然后滴加0.5%碱性复红液，并用酒精灯加热至徽见蒸气维持1.5 min，移去酒精灯，将玻片放置半分钟，倾去染液，置洁净自来水充分漂洗，晾干，镜检，在油浸镜下检查有无游离芽胞和深染的似菱形的红色结晶小体（如未形成游离芽胞，培养物应放室温再保存12d后再检查），如有即为苏云金芽胞杆菌，蜡样芽胞杆菌检查为阴性。附加说明z本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人白竟玉。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。213
