1、ICS 59.040 B 45 GB 中华人民共和国国家标准GB/T 10288-2003 代替GB/T10288- 1988,GB/ T 10289- 1988 羽绒羽毛检验方法Testing methods for down and feather 2003-10-22发布2004-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检菇总局中华人民共和国国家标准羽绒羽毛检验方法G8/ T 10288- 2003 导中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售 开
2、本880X 1230 1/ 16 印张174字数34千字2004年2月第一版2004年2月第一次印刷印数1-3000* 书号:155066 -20210 定价13.00元网址版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533. - 目。吕GB/T 10288-2003 本标准是对GB/T10288-1988(出口羽毛检验方法、GB/T10289-1988(出口水洗羽毛检验方法的修订。本标准与GB/T10288一1988、GB/T10289一1988相比，主要变化如下:一一将原料羽毛和水洗羽毛检验方法合二为一，并去掉出口二字，定名为羽绒羽毛检验方法h一二除采用GB/T17685-2003(羽绒
3、羽毛中的术语和定义外，还增加部分术语和定义，如抽样批、试样等;一二抽样数量和样品处理方法基本采用了国际羽毛局简称IDFB)的方法;组成成分检验基本采用IDFB方法，即不用小样除灰机、竹筛、拣样盘，而是采用分拣箱，杂质检验采用手检方法;一一鹅鸭毛绒的种类鉴定也基本果用IDFB方法，该方法与我国现行方法比较接近;一一耗氧量检验方法的修订基本与IDFB方法和欧洲方法接近;-一一改进了透明度仪器的结构。本标准自生效之日起，同时代替GB/T10288-1988和GBjT10289-1988。本标准的附录A为规范性附录。本标准由对外贸易经济合作部提出。本标准起草单位:中国食品土畜进出口商会、中华供销合作总
4、社、国家质量监督检验检疫总局、浙江出入境检验检疫局、山东出入境检验检疫局、上海出入境检验检疫局、南京出入境检验检疫局。本标准主要起草人:王永、王华雄、李玉样、顾鸣、侯玉峰、张志彪、游中民。GB/T 10288- 2003 羽绒羽毛检验方法1 范围本标准规定了羽绒羽毛的定义、检验抽样方案、检验项目、检验方法和结果计算。本标准适用于各种品种、规格的羽绒羽毛及其制品填充料的检验。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡
5、是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/ T 6682- 1992 分析实验室用水规格和试验方法GB/ T 17685- 2003 羽绒羽毛3 术语和定义GB/T 17685-2003确立的以及下列术语和定义适用于本标准。3.1 抽样批lot 一批出自同一个供货商的相同品种和规格的羽绒羽毛或制成品的填充料。3.2 实验室样晶laboratory sample 从一批货物中抽取的、用于实验室检测的代表性样品。3.3 试样test sample 从实验室样品中抽取的、满足单个检测项目所需的样品。3.4 组成成分composition analysis 羽毛绒样品中包含的各种成分如绒子、
6、毛片、损伤毛等。3. 5 原始滤液initial extract 按规定的条件从蛋白陈生理盐水处理的试样中获得的滤液。3.6 十进制稀释decimal dilutions 从原始滤液开始的一系列10倍连续递增稀释。3. 7 菌落形成单位colony 阳rmingunits , CFU 在一块选择性琼脂上，通过一个单一细菌的扩增生成的上百万个同种细菌所形成的菌落。该菌落肉眼可见，并根据细菌种属、所用琼脂及培养条件的不同而具有不同的形状(如透镜状、放射状等)。GB/ T 10288-2003 4 仪器设备与试剂4. 1 仪器设备4. 1. 1 玻璃器皿:烧杯，规格:150 mL、250mL、100
7、0 mL、2000mL;平皿，规格:直径95mm;载玻片，规格:25mmX 75 mm; 10 mL吸管;150mL称量瓶;索氏抽提器;抽提烧瓶;1000 mL带盖广口瓶z量筒，规格:100mL、1000 mL;玻璃棒。4. 1. 2 塑料袋、布袋或其他容器:抽取水分检验样品时，应使用清洁、完好的塑料袋、布袋或其他容器密封的容器。4. 1. 3 大拌样盘尺寸z长180cmX宽90cm，底面离地面高度60cm，边框高25cm。4. 1. 4 分拣箱尺寸z底部60cmX40 cm，前面高25cm，后面高40cm。箱的顶部为玻璃，箱子应有充足的外部照明。4. 1. 5 拣样盘尺寸:边框高10cm，直
8、径80cm。4. 1. 6 慑子。4. 1. 7 分析天平精确度0.1mg或普通托盘天平，最大称量1000 g，精确度0.1g。4. 1.8 15 cm尺子。4. 1. 9 投影仪或显微镜(40X以上)。4. 1. 10 水平振荡器频率150次/min，振荡幅度40mm，可定时。-4. 1. 11 微量滴定管器每格刻度0.02mL。4. 1. 12 可加盖密封的广口塑料瓶，容量2000mL。4. 1. 13 标准筛孔径0.1mm(150目)。4. 1. 14 秒表。4. 1. 15 磁力搅拌器。4. 1. 16 透明度计600mm和大于600mm各一套(见图1)。4. 1. 17 蓬松度仪z防
9、静电有机玻璃圆桶，高60cm，内径为24.5cmo桶壁两对面有两排刻度。桶内有一圆形铝质压板，直径24cm，质量为68.4g。4. 1. 18 前处理箱:木头或其他材料制，内部尺寸50cm X 50 cm X 50 cm，箱底为;板，上为活络门，四周绷以金属或塑料纱网，使之能通风。4. 1. 19 多孔水浴锅。4. 1. 20 旋转蒸发器。4. 1.21 干燥器。4.1.22 用中性滤纸和脱脂棉线做成的纸筒，其大小刚好能放入抽提器内。4.1.23 八篮烘箱。4. 1.24 通风干燥箱温度可调至(105土2)OC。4. 1. 25 恒温培养箱。4.1.26 瑞塌钳。4. 1. 27 恒温恒湿室或
10、恒温恒湿箱可调至温度(20士2)OC，相对湿度(65土2)OC。4.2试J4.2.1 蒸馆水符合GB/T6682-1992规定的三级水。4.2.2 硫酸3mol/L。4.2. 3 高健酸饵溶液0.1mol/L o 4.2.4 无水乙酷(分析纯。2 1 mm l一一带刻度圆简32一一容器;3一一能使容器升高和降低的轨道;4一一位于圆桶底部带十字线的小圆片55一一黑色双十字线。GB/ T 10288- 2003 2 固1透明度计3 GB/T 10288-2003 5 抽样5. 1 抽样方式在尚未打包的临时包中抽取，或包装完全的条件下抽取，也可以从羽绒制品中抽取。5. 2 抽样数量5. 2. 1 单
11、件质量500g以上制品的抽样数量羽毛羽绒单件质量500g及以上的包、袋、箱及羽绒制品的抽样数量见表1。表1货物数量/取样数量XX3单个质量/g样品总质量/g箱、包、件;:. 二zl 1 135 405 2-8 2 70 420 9-25 3 45 405 26-90 5 30 450 91 - 280 7 20 420 281 -500 9 20 540 501- 1 200 11 20 660 1 201-3 200 15 15 675 3201- 10 000 19 15 855 5.2. 2 填充量500g/件(条)以下的制晶的抽样数量填充量500g/件(条)以下的羽绒羽毛填充的制品的抽
12、样数量见表2。表2货物数量/单独样品的单个样品总质量/g件、条取样数量XX3质量/g(实验室样品数量二主二注1 l 70 210 2-25 2 35 210 26 - 280 3 25 225 28 1-500 5 15 225 501-1 200 7 10 210 1200以上9 10 270 5. 3 抽样要求按5.2规定的数量随机抽取有代表性的样品。从包装的上、中、下位置，各抓取一把羽毛(绒)置于样袋中。如为羽绒制品，则至少从三个部位拆开，从每个口子各抓起一把置于样袋中。但枕芯、靠垫等较小而且中间无分隔的制品允许只拆开一个口子。5.4 样品的处理5. 4. 1 匀样和缩样将所取样品全部置
13、于大拌样盘中，逐把铺匀、逐层铺平，用四角对分法反复缩至200gC样品原已在此范围内的，不必缩样)，然后从中抽取试样。剩余样品用作留样。4 GB/T 10288- 2003 5. 4.2 检测项目所需的试样数量各检测项目所需的试样数量见表3。表3检测项目单个试样质量/g试样个数含绒二30%二注43，两个用于检测，一个备用成分含绒30%二63，两个用于检测，一个备用分析纯毛片二303，两个用于检测，一个备用耗氧量10 2 透明度10 2 含绒二三30%23 2 残脂率含绒30%45 2 蓬松度28.4 含绒二三30%二二502 水分含绒30%二1002 气味10 2 将各项目试样分别抽出，按表3要
14、求的数量分别置于250mL烧杯中称取质量，做好标记，用平皿盖好待检。5.5 留样在通风、干燥、防虫的条件下至少保存半年，样品应注明标签，水洗和未水洗分开放置。5. 6 水分检测样晶用于水分含量检测的样品按5.3的要求，与其他检测项目的实验室样品同时抽取，每批货物抽取20 g，并放在可密封的容器中密封。6 检验6. 1 检验项目检验项目包括:组成成分(毛片、陆禽毛、损伤毛、长毛片、异色毛绒、绒子、绒丝、羽丝、杂质)，鹅、鸭毛绒种类鉴定，蓬松度，耗氧量，透明度，残脂率，气味，水分含量，微生物检验。6.2 组成成分检验6.2. 1 初步分拣按以下步骤进行。将七个250mL烧杯分别标上A、B、C、D、
15、E、F、G，放入分拣箱，将一个成分分析试样放入分拣箱中，用慑子和手指按如下方法挑拣出各种成分。将毛片上的附着物除去，完整的水禽羽毛置于烧杯A中，水禽损伤毛置于烧杯B中，陆禽羽毛、陆禽损伤毛和陆禽羽丝一起置于烧杯C中，绒子、绒丝和羽丝的混合物置于烧杯D中，长毛片置于烧杯E中，杂质置于烧杯F中。白毛绒中异色毛绒的分拣:在进行初步分拣时，将异色毛绒(包括异色绒子、水禽毛、水禽损伤毛、陆禽毛及其损伤毛、羽丝和绒丝)一并拣出，置于烧杯G中，称取烧杯内容物质量后(精确到0.1mg)，将各种异色毛绒分别放回各自的成分中，例如将异色绒放入盛放绒子和绒丝与羽丝的混合物的烧杯中烧杯D)。分别称取各烧杯内容物的质量
16、，精确到0.1mgo 6. 2.2 第二步分拣按以下步骤进行。将烧杯D的内容物在拌样盘中混匀，从三个部位抽取总质量0.2000 g以上的代表性样品。将五GB/T 10288- 2003 个烧杯分别标上H、LJ、K和L.放于分拣箱内。将上述样品置于分拣箱中，用手和慑子将样品分成:绒子、绒丝、羽丝、杂质和其他成分，分别放置于烧杯H、I，J、K和L中。分拣方法:用慑子取出绒子，上下轻轻抖动五次，然后用慑子小心地挑出绒子上缠绕的羽丝或夹杂的其他成分，不要拣出缠绕在绒子上的绒丝，而只需去除抖松的绒丝。如在取出羽丝或其他成分时拉断了一根绒丝，则将这根绒丝放入绒子成分烧杯H)中。分别称取各烧杯内容物的质量，
17、精确到0.1mg。6.2.3 按6.2.3.1和6.2.3.2对初步分拣和第二步分拣进行计算。6.2. 3. 1 初步分拣将烧杯A、B、C、D、E和F的内容物的质量相加，按式。)得出总的分析后试样质量(ml): ml =A+B十C+D+E+F式中:ml一-一分析后试样总质量，单位为克(g);A一一-水禽羽毛质量，单位为克(g); B一一水禽损伤毛质量，单位为克(g);C一一陆禽羽毛及其羽丝质量，单位为克(g);D一-一绒子、绒丝和羽丝的混合物质量，单位为克(g);E一一长毛片质量，单位为克(g);F一一-杂质质量，单位为克(g)。分别计算初步分拣所得的各种成分占总分析后试样的百分比，例如:式中
18、:水禽羽毛含量z生x100% m l 异色毛绒含量=旦x100% tl m一一异色毛绒的质量，单位为克(g)。6.2. 3.2 第二步分拣将烧杯H、I、J、K和L的内容物相加得出第二步的分析后试样总质量(叫): m 2 = H + I + J + K + L 式中:m2二-第二步的分析样总质量，单位为克(g);H一绒子质量，单位为克(g); I一一绒丝质量，单位为克(g); J一一羽丝质量，单位为克(g);k 杂质质量，单位为克(g); L其他成分质量，单位为克(g)。.( 1 ) . ( 2 ) .( 3 ) ( 4 ) 分别计算第二步分拣后所得的各种成分占总分析后试样的百分比。结果计算见式
19、(5)式(9): 6 D . H 绒子含量=一一x100% m l m2 D . 1 . n/ 绒丝含量=一x-X 100 % m) m 2 D J 羽丝含量=一一X100% ml 72 D K. . .n/ 杂质含量二一一X100% ml m2 . ( 5 ) ( 6 ) .( 7 ) .( 8 ) GB/T 10288-2003 其他成分含量=旦土x100% t m2 ( 9 ) 其中杂质含量应加入初步分拣所得的杂质含量，而成为总的杂质含量。其他成分应再分成水禽羽毛、水禽损伤毛、陆禽羽毛及其损伤毛，分别称量后计算各自的含量，然后将其分别与初步分拣所得的各种成分相加，得出各种成分总的含量。6
20、.2.4 如果样品为不需检测绒子含量的纯毛片，则只需进行初步分拣即可计算结果，但试样质量为30 g，且在拣样盘中分拣。如果该毛片有长度限制(如6cm , 7 cm ,8 cm等)，则超过该限制的毛片算作长毛片。6.2.5 按6.2. 16. 2. 3的步骤对第二个成分分析试样进行检验并计算结果。两个试样的结果有误差时，如果绒子含量注30%的试样的误差不超过2%、绒子含量30%的试样的误差不超过1.5%，则以两个结果的平均值为最终结果。误差大于上述范围时，应对第三个试样进行检验，以两个较接近的结果的平均值作为最终结果，保留两位小数。6. 3 鹅、鸭毛绒种类鉴定6.3.1 将6.2.2烧杯H中的绒
21、子置于检样盘内，海匀铺平，随机多点抽取O.1 g以上的试样。6.3.2 将6.2.1烧杯A中的毛片混匀平摊在检样盘内，随机多点抽取1.0g以上的试样。初步分拣所得毛片少于1.0 g，则全部将其作为试样进行检验。绒子含量大于等于90%的样品，可以不检毛片。6.3.3 将两个250mL烧杯分别标上ALB1。用慑子取出绒子、毛片，分别整理，将绒子或毛片上粘着的绒丝等物去净，分别放在投影仪或显微镜下按6.3.4规定的方法观察鉴定，将确定的鸭毛(绒)、鹅毛(绒)分别置于烧杯A1，B1中，将无法区分毛(绒)归入B1中，分别称取烧杯内容物质量，精确到0.1mg. 6. 3.4 观察鉴定方法如下:6. 3.
22、4. 1 鸭毛(绒)用投影仪或显微镜观察时，可见绒子和羽毛根部的羽枝远端有三角形的棱节，与鹅毛(绒)的棱节相比，较大。棱节间距离较小，约与棱节的大小相等(见图2)。6.3.4.2 鹅毛(绒)观察其显微结构，棱节较小，并从羽枝的中部开始出现。棱节间距离较大，数倍于棱节的大小(见图2)。6.3.4.3 鸡毛在投影仪或显微镜下观察，其羽枝上均匀分布一系列小结节或膨胀突起，使其外观呈竹节状。小结节或膨胀突起分布于几乎整根羽枝。鸡毛归入陆禽毛。6.3. 4. 4 鸽子毛在投影仪或显微镜下观察，其羽枝上均匀分布一系列棱节，棱节问距离较大，数倍于棱节的大小。棱节分布于几乎整根羽枝。鸽子毛归入陆禽毛。6.3.
23、4.5 无法区分毛(绒)在投影仪或显微镜下观察，无明显棱节，无法区分其属于鹅毛(绒、鸭毛(绒)或其他毛(绒)。6. 3.5 鹅毛(绒)中鸭毛(绒)含量的计算结果见式(10): A 鸭毛(绒)含量=一一一一-x 100% . ( 10 ) Al+Bl 式中zA1-一鸭毛(绒)质量，单位为克Cg); Bl -鹅毛(绒)质量，单位为克Cg)。6.3.6 按6.3. 16. 3. 5的步骤对第二个试样进行检验并计算结果，将两个试样的结果的平均值作为最终结果，保留两位小数。7 GB/T 10288-2003 6.4 蓬松度测定6.4.1 样品处理鸭毛绒羽枝菱纺相对较大，菱结间距离较小如l状赘生物圈2鹅、
24、鸭毛绒显微结构示意图鹅毛钱羽枝菱结相对技小，菱结间距离较大从实验室样品中抽取一个约30g试样，放入八篮烘箱中在(70土2)OC温度下烘干45min，然后将样品用手逐把抖入前处理箱中，使其蓬松。在温度(20士2)OC、空气相对湿度(65土2)%的环境中恢复24h 以上。6.4. 2 测定将经蓬松处理后的样品称取28.4g，抖入蓬松仪内，用玻璃棒搅拌均匀并铺平后，盖上金属压板，让压板轻轻压于样品上自然下落，下降停止后静止1min，记录筒壁两侧刻度数。同一试样重复测试三次，以三次结果的六个数值的平均值为最终结果，保留两位小数。6.4.3 常数换算本标准规定了蓬松度的单位(cm)，它与立方英寸的换算常
25、数为28.77。例如:蓬松仪上的读数为8 GB/T 10288-2003 450 in3，相当于高度为15.64cm。6. 5 耗氧量的测定6. 5. 1 从实验室样品中取一个10.0g的羽毛绒试样放入2000 mL塑料广口瓶，加入1000 mL蒸锢水，加盖密封后水平放入振荡器振荡30min。振荡方向为从瓶底至瓶口(见图3)。振荡方向圈3塑料广口瓶的振荡方向6.5. 2 将塑料广口瓶之内容物用孔径0.1mm的标准筛过滤(勿压榨过洁、物)，所得滤液收集于2000 mL烧杯中。6.5.3 在一个250mL烧杯中加入100mL蒸馆水作为空白对照样，加入3mL 3 mol!L硫酸，将烧杯放于磁力搅拌器
26、上，打开搅拌器。用微量滴定管(器)逐滴滴入0.1mol/L高镜酸伺溶液，直至杯中、液体呈粉红色，并持续1min不褪色(用秒表计时)，记录所消耗的高锺酸饵溶液的毫升数(A)。6.5.4 用量筒量取100mL滤液，加入另一个250mL烧杯中，加入3mol/L的硫酸3mL后按6.5.3所述方法用0.1mol/L高锺酸饵溶液滴定，最后记录所消耗的高锚酸掷榕液的毫升数(B)。6.5.5 按6.5.1-6.5.3的步骤对第二个试样进行测定。6. 5.6 结果计算见式(11): 耗氧量=( B-A) X 80 ( 11 ) 式中:A一一滴定100mL蒸俑水所消耗的高锚酸饵溶液的体积，单位为毫升(mL);B一
27、一滴定100mL样液所消耗的高锚酸饵溶液的体积，单位为毫升(mL)。结果以氧mg/100g产品表达，取两次测定的平均值，保留一位小数。6.6 透明度的测定6.6. 1 样液制备:同6.5. 16. 5.2的步骤。也可直接采用为耗氧量测定所制备的样液，反之亦然。6.6.2 将制备好的样液倒入透明度计的容器中，慢慢升高容器位置，使样液通过软管进入带刻度圆筒，并使液面逐渐升高。从圆筒顶部向下观察底部的黑色双十字线，直至其消失，再略向下移动容器，使双十字线重新出现，并刚好能看清楚，记录此时液面在圆筒上的刻度，即为该样品的透明度。6. 6.3 按6.6.1-6. 6. 2规定的步骤对第二个样品进行测定。
28、最终结果取两次测定的平均值的整数，单位用毫米。6.6.4 用600mm的透明度计，如果样品透明度高于600mm，则用大于600mm的透明度计。6.6.5 应避免在直射阳光下测定。光惊强度应为6001x以上。6. 7 残脂率测定(索氏抽提法)6.7. 1 按表3要求，准确称取羽毛绒试样两个，分别放于250mL烧杯中，在(105士2).C干燥箱中烘干2 h。6.7.2 将干燥的试样分别放入两个滤纸筒，然后分别放入两个预先洗净烘干的抽提器中。在另一个抽提器中放入一个空滤纸筒作为空白对照。6.7.3 把抽提器按顺序安装好，接好冷凝水。6.7.4 在每个预先洗净烘干并称量过的球形瓶中各加人120时，的无
29、水乙酶，将其放入水温控制在50.C的水浴锅中，接上抽提器，掌握乙酷每小时回流5-6次，总共回流20次以上。6.7.5 取下球形瓶，用旋转蒸发器回收乙醋。然后将留有抽提脂类的三个球瓶放入lOS.C烘箱中烘至恒重，取出置于干燥器内，冷却30min，分别称取质量。6.7.6 结果计算见式(12): 9 GB/T 10288-2003 A-B 残脂率=c一x100% 式中zA一一己恒重的带残脂的球瓶质量减去原空瓶质量，单位为克(g);B一一抽提后对照球瓶质量减去原空瓶质量，单位为克(g); C一一羽毛绒试样质量，单位为克(g)。将两个试样的残脂率结果平均，作为样品的残脂率结果，保留两位小数。6.8 气
30、昧测定(定温干式噢瓣法)6.8. 1 将取来的样品混匀，缩分为两份，松散放入无气昧密封容器内一天待用。6. 8. 2 将1000mL带盖广口瓶用蒸锢水清洗干净，烘干冷却待用。.( 12 ) 6.8. 3 从两份松散放一天的羽毛绒样品中各称取10g，分别放入两个巳处理过的广口瓶内，盖上瓶盖。6.8.4 将试样瓶放入恒温箱内，用50.C温度烘1h，取出冷却至室温。6.8. 5 在元异味环境中开启瓶盖，嗅辨气味，用文字叙述气味等级强度。6.8. 6 气味等级强度分为四级，见表4。表4强度等级程度。元气味1 极微弱2 弱3 明显6.8.7 将两个试样的气味强度等级平均作为该样品的气味等级。6.9 水分
31、含量测定描述无任何异味不易觉察稍能觉察极易觉察6. 9. 1 按表3规定的数量将水分检测样品从密封容器中取出，迅速均匀地分别放于八篮烘箱的两个吊篮内，移入烘箱，用烘箱所附天平逐一称取试样质量，精确至0.01g并记录。6.9.2 调节烘箱温度控制在(105土2).C，每隔30min称量一次试样质量，如此反复称量，直至相邻两次质量相差不大于试样总量的0.1%时，即为恒重。6.9.3 结果计算见式(13): A - B 水分含量=一王一x100 % . ( 13 ) 式中:A一一原试样质量，单位为克(g);B.，-一烘干后的试样质量，单位为克(g)。计算出两个试样测定结果的平均值作为最终结果，保留两
32、位小数。7 微生物检验微生物的检验方法见附录A。10 A.1 抽样附录A规范性附景)微生物检验方法A. 1. 1 抽样数量及抽样方法按第5章操作。GB/T 10288- 2003 A. 1.2 试样制备t从混合样品中取出代表性样品，不小于25g作为试样，装入无菌塑料袋或类似容器内，加封后标明标记。A. 1.3 抽样要求=抽样时应戴无菌手套，并将样品放在无菌容器肉，避免采样时的污染。试样室温保存，运输时不得外露。试样在24h内检验。A.2 设备和材料A. 2. 1 天平:感量为0.0001 g。A.2. 2 振荡器z往复式。A.2.3 干热灭菌箱:(50士l)OC(200士l)OC。A.2.4
33、高压蒸汽灭菌锅:(121士l)OC。A.2. 5 冰箱:普通冰箱。A.2.6 可调恒温箱:(30土l)OC;(37土1)oC。A.2.7 平皿，直径为90mm。A.2.8 吸管，容量为1mL, 10 mL。A.2.9 三角烧瓶z容量为250mL、500mL。A.2.10 玻璃珠z直径为3mm。A.2. 11 试管:18 mmX 180 mm。A. 2. 12 水浴锅:(46士l)OC、(43土1)c。A.2. 13 显微镜:1 500X。A.2.14 硝酸纤维素膜:孔径0.45m。A.2.15 赛氏滤器:1 000 mL或类似规格的滤器。A.2.16 带塞广口玻璃瓶或塑料瓶:2000 mL。A
34、. 2. 17 无菌塑料袋z宽30cm，长50cm。A.2.18 无菌医用纱布。A.2.19 厌氧培养罐及其附件。A.2.20 L型涂布棒。A.2.21 酸度计或pH试纸。A.3 培养基和试剂A. 3. 1 0. 1 %灭菌的蛋白膜生理盐水成分:蛋白陈1g、氯化铀8.5g、蒸馆水1000 mL。制备:将这些成分溶解在1000 mL蒸馆水中，调pH7.0，然后在高压锅内经(121士l)OC消毒15 min。A.3.2 标准平板计数琼脂成分:酵母浸膏2.5 g、膜陈5g、葡萄糖1g、琼脂15gO 11 GB/T 10288一2003制备:将上述成分加入1000 mL蒸馆水中，加温至完全溶解，分装玻
35、璃瓶，然后在(121土1).C消毒15 min。A. 3. 3 Slanetz和Bartley氏培养基成分:膜蛋白际20g、酵母浸膏5g、葡萄糖2g、磷酸氢二纳.2H20 4 g、叠氮铀0.4g、氯化四氮哇o. 1 g、琼脂10g. 制备:将上述成分加入1000 mL蒸馆水，加热至完全潜解后(应避免长时间加热)调pH7.2.倒入皮氏培养皿使其凝固。A. 3. 4 Mueller-Kauffmann氏四硫磺酸纳肉汤成分:膜蛋白豚7g、大豆陈2.3g、氯化制2.3g、碳酸钙25g、硫代硫酸铀40.7g、牛胆汁4.75g。制备:将上述成分加入1000 mL蒸馆水，加热溶解，用前冷却至45.C以下，加
36、入19mL腆溶液和9.5 mL 1%的亮绿溶液，充分混匀后倒入消毒的试管或锥形瓶中。A. 3. 5 确溶液成分:腆20g、腆化饵25g、蒸馆水100mL。制备:先将腆化销溶解在5mL蒸馆水中，然后加入腆，充分搅拌至腆完全溶解，定容至100mL。A. 3. 6 亮绿溶液成分:亮绿(CL42040亮绿)0.1 g、蒸馆水100mL。制备:将亮绿加入蒸锢水中，加温并不断搅拌至完全溶解，将其放入棕色瓶中避光保存。A. 3. 7 亮绿琼脂培养基成分:膜蛋白陈10g、酵母漫膏3g、氯化锅5g、乳糖10g、煎糖10g、酣红0.08g、亮绿(CL42040-亮绿1)0.0125 g、琼脂12g。制备:将上述成
37、分加入1000 mL蒸锢水中，加热至完全溶解，调pH6.9，然后在(121土l).C高压锅中消毒15min。A. 3. 8 亚研酸铁多黯菌素B培养基成分:膜蛋白脏、15g、酵母浸膏10g、拧橡酸铁镀0.5g、亚硫酸纳1g、琼脂16g。制备:将上述成分加入1000 mL蒸馆水中，溶解后4.C保存。使用时取100mL溶解的培养基，冷却至50-C后，加入0.2mL的0.001%多黠菌素B硫酸盐溶液和0.5mL的0.01%硫酸新霉素溶液，再用赛氏洁、器过洁、除菌。A. 3. 9 三糖铁琼脂成分:蛋白陈20g、牛肉膏5g、乳糖10g、荒草糖10g、葡萄糖1g、氯化铀5g、硫酸亚铁镀0.2g、琼脂12 g
38、、酣红0.025g。制备:将除琼脂和酣红以外的各成分榕解于1000 mL蒸馆水中，校正pH。加入琼脂井加热洛化，加入0.2%盼虹，水熔液12.5mL，摇匀。在(121士1).C高压消毒15min。A. 3.10 尿素琼脂成分:蛋白陈1g、氯化铀5g、葡萄糖1g、磷酸二氢饵2g、0.4%酣红溶液3mL、琼脂20g、20%尿素溶液100mL。制备:将除尿素和琼脂以外的成分加入1000mL蒸锢水中，校正pH值，加入琼脂井加热溶化，在(121士1).C高压消毒15min.玲至(5055).C，加入经过洁、除菌的尿素溶液，使其终浓度为2%，最终pH为7.2土0.1.A. 3.1 1 氨基酸脱捶酶试验培养
39、基成分:蛋白陈5g、酵母浸膏3g、葡萄糖1g、1.6%澳甲酣紫-乙晖溶液1mL、L-氨基酸或DL-氨基酸0.5g/ 100 mL或1g/ 100 mL。制备:将氨基酸以外的成分加入1000 mL蒸馆水，加热溶解后，分装每瓶100mL，分别加入各种氨基酸(赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸).L-氨基酸按0.5%加入，DL-氨基酸按1%加入。再校正pH至6.8.GB/T 10288-2003 对照培养基不加氨基酸。分装灭菌小试管内，每管0.5mL，上面滴加一层液体石蜡，1lS.C高压消毒10 min. 建议使用商品化复合性培养基和试剂。A. 4 检验项目a) 嗜温性需氧菌含量;b) 粪便链球菌含量;c) 还
40、原亚硫酸盐梭状芽抱杆菌含量;d) 沙门氏菌。A. 5 检验程序检验程序见图A.1所示。(30:t1) C. (24- 48) h 亚硫酸还原菌计数(37土1)c .厌氧主音养(24-48) h 图A.l羽绒羽毛微生物检验程序图13 GB/T 10288- 2003 A.6 操作步骤A.6. 1 试样前处理用一次性手套从实验室样品中无菌取出两个各12g的试样，并分别称量，精确到0.1g;将每个试样分别放入装有玻璃珠的烧杯中，应避免试样损失，每个烧杯各加入1200 mL O. 1%的蛋白陈生理盐水，室温机械搅动3h;通过消毒纱布过滤溶液，然后将两个原始滤液在无菌条件下混合，即为原始滤液。取200m
41、L澄清的原始滤液，用作细菌菌落计数、粪便链球菌和亚硫酸还原梭状芽抱杆菌检验。另取2000 mL澄清原始滤液，用赛氏滤器或类似规格的滤器，经孔径o.45m无菌过滤膜再过滤后，将膜取下放入抄门氏菌增菌液中，作沙门氏菌检验。A. 6.2 嗜温性需氧菌计数A. 6. 2.1 用1mL元菌吸管吸取上述原始捷、液，沿管壁慢慢注入含有9mL稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释被)，振摇试管，混合均匀;另取一支1mL无菌吸管，按上述操作顺序，做10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即更换一支吸管，稀释到9个梯度以上。A.6.2. 2 在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平
42、皿内，每个稀释度做两个平皿。A. 6. 2. 3 稀释液移入平皿后，应及时将凉至(46土l)OC的菌落计数用培养基可放置(46士l)OC水浴锅内保温注入平皿约15mL，小心转动平皿使试样与培养基充分混匀。A. 6. 2. 4 待琼脂凝固后，倒置平皿于(30士l)OC恒温箱内培养(72士3)h取出，计数平板内菌落数目，菌落数乘以稀释倍数，即得每克试样所含细菌总数。A.6.2.5 菌落计数方法:做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时借助于放大镜检查，以防遗漏。在计数出各平板菌落数后，求出同一稀释度两个平板菌落的平均数。A.6.2.6 菌落计数的报告:选取菌落数在30300之间的平板作为菌落计数标准
43、。每一稀释度采用两个平板菌落的平均数，如两个平板其中一个有较大蔓延菌落生长时，则不宜采用，而应以无蔓延菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，如蔓延菌落不到平板的一半，而另一半菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全平板菌落数，平皿内如有链状菌落生长时菌落间无明显界限)，若仅有一条链，可视为一个菌落，如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。A. 6. 2. 6. 1 稀释度的选择:应选择平均菌落数在30300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。如有两个稀释度，其生长的菌落数均在30300之间，视二者之比如何来决定，如其比值小于2，应报告其平均数:如大于2，则报告其中较小的数字。如
44、所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。如所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。A.6.2.6.2 结果报告:菌落在100以内时，按其实有数报告;大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以数字修约的规则计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。结果表示:cfu/g。A. 6.3 粪链球菌
45、计鼓A. 6.3.1 取上述原始滤液1mL，涂布两个预先制备好的无菌Slanetz/Bartely培养基表面，倒置培养平皿，于(30:f:2)OC培养24h48 h。A.6.3.2 计数黑色和暗棕色小菌落，且镜检为革兰氏染色阳性球菌;抗血清鉴定属于D群。A.6.3.3 当菌落数较少时，用0.45m膜过滤100mL检样，并将膜放在SlanetzjBartely培养基上，平皿置(30:f:2)oC培养24h48 h，计数暗棕色小菌落。14 A. 6. 3. 4 结果计算:两个平皿菌落的总数乘以试样稀释倍数。A. 6. 3. 5 结果表示:cfu/g。A.6.4 亚硫酸还原棱状芽抱杆菌的计数A. 6
46、. 4.1 取上述原始滤液5mL，置于75.C水洛处理10min。GB/T 10288-2003 A. 6. 4.2 取处理后的原始滤液1mL做10倍递增稀释，在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。A. 6. 4. 3 及时将凉至(46士1).C的亚硫酸铁-多粘菌素B琼脂培养基可放置(46土1)C水浴锅内保温注入平皿约15mL，小心转动平皿使试样与培养基充分混匀。待凝固后，再用5mL相同培养基覆盖表层。A. 6. 4. 4 倒置培养皿，用厌氧罐或类似方法在37C厌氧培养48人A. 6. 4. 5 计数黑色和暗棕色菌落，且镜检观察芽抱体
47、。A. 6. 4. 6 证实试验z镜检为革兰氏阳性梭状芽抱杆菌，过氧化氢酶试验阴性。过氧化氢酶试验方法如下:取干净载玻片，在上面滴一滴新鲜配制的3%过氧化氢溶液，挑取一环培养的试验菌，在过氧化氢溶液中混匀，若有气泡产生则为过氧化氢酶试验阳性，无气泡产生者为阴性。A. 6. 4. 7 结果计算:平皿菌落数乘以试样稀释倍数。A.6.4. 8 结果表示:cfu/g。A.6.5 沙门氏菌检测A. 6. 5.1 选择性增菌培养z按6.1试样处理的滤器过滤膜，取下接种于100mL TTB肉汤中，(43:i 2).C水浴培养15h18儿A. 6. 5.2 接种一环增菌肉汤培养物于亮绿琼脂培养基上，置37C培
48、养24h，以无色、半透明、红色环固的菌落为可疑，用生化或血清学试验进一步验证。A.6.5.3 鉴定培养:从分离平皿培养基上，挑取五个被认为可疑菌落，如一个平皿上典型或可疑菌落少于5h，可将全部典型或可疑菌落供进行鉴定。A. 6. 5.4 生化鉴定z将从6.5.3培养基上挑选的可疑菌落，接种在A.6. 5. 4. lA. 6. 5. 4. 3培养基上，进行生化反应观察;或者应用微生物鉴定仪器进行沙门氏菌生化鉴定。A. 6. 5.4. 1 三糖铁培养基2在琼脂斜面上划线和穿刺，在(36士1).C培养24h。培养基变化见表A.1.表A.l三糖铁培养基变化表培养基部位培养基变化坊、脂斜固黄色乳糖和煎糖
49、阳性红色或不变色事L糖和1-糖阴性底端黄色葡萄糖阳性琼脂深层红色或不变色葡萄糖阴性穿刺黑色形成硫化氢气泡或裂缝葡萄糖产气典型沙门氏菌培养基，斜面显红色，底端显黄色，有气体产生，有90%形成硫化氢，琼脂变黑。当分离到乳糖阳性沙门氏菌时，主糖铁斜面是黄色的，因而证实沙门氏菌，不应仅仅限于三糖铁培养的结果。A. 6. 5. 4. 2 尿素琼脂培养基:在琼脂表面划线，在(36士l).C培养24h，应不时检查，如反应是阳性，尿素极快的释放氨，它使酣红的颜色变成玫瑰红色一桃红色，以后再变成深粉红色，反应常在2h24 h 之间出现。通常，沙门氏菌反应为阴性。A.6. 5.4.3 赖氨酸脱竣反应培养基:将培养物刚好接种在液体表面之下，在(36士1).C培养18h 24 h，观察
