1、中华人民共和国国家括准工业循环冷却水中粘液形平皿计数法的测定Industrial circulating cooling water Examination of bacteria formed deposits Standard of pJate count 1 主题内容与适用范围本标准规定了工业循环冷却水中粘液形成菌的测定方法。GB/T 14643.1-93 本标准适用于工业循环冷却水中悬浮的粘泥中的异养菌的测定。也适用于工业循环冷却水中沉积的粘泥中异养菌的视定，还适用于原水，生活用水及其他水中粘液异养菌的测定，2 引用标准GB 603 化学试剂试验方法所用制剂及制品的制备。GB 6682
2、 分析实验室用水规格和试验方法3 方法提要本法采用25号浮游生物网收集循环冷却水中的粘泥，所得的粘泥用石英砂充分研磨使细胞分散，再利用平皿计数技术在29土1.C培养72h来测定粘泥中的异养菌总数。4 试剂和材料本试验测定方法中，除特殊规定外，应使用分析纯试剂和符合GB6682中三级水规格的水。4. 1 牛肉膏z生化试剂，4.2 蛋白豚.生化试JflJ; 4. 3 拭化纳(GB1266); 4.4 琼脂:生物试剂;4. 5 氢氧化锅(GB629) ，40g/L洛液34.6 盐酸(GB622)溶液;1+11，4. 7 乙醇(GB678)溶液75%(V!V); 4.8 牛皮纸;4.9 医用脱脂棉;4
3、. 10 )军用脱脂纱布s4. 11 石英砂，210150ID.国家技术监督局1993-08-06批准1994-07-01实施. () 1 5 仪器和设备5. 1 25号浮游生物网，5. 2 量窝，25mL，5.3 量霄:500rnL; 5.4 转子流盖章计$5. 5 瓷研钵g5.6 元菌箱(雯)豆立起净工作台;5. 7 蒸汽压力灭葱器;5.8 生化培养箱;GB/T 14643. 1-93 5. 9 电热干燥箱5温度可控制在60Z80土ZC，5.10 刻度吸管:1mL;5. 11 刻度吸管5mL;5.12 磨曰:1角瓶dOOmL;5. 13 容量瓶，1OOOmL; 5. 14 培养EE:如Om
4、m;5.15 三角瓶，500mL，5.16 搪瓷数杯，10告OmL6 试验前的准备6.1 培养基的制备称攻下功j试弗IJ, 牛肉沓3.0g, 蛋白月在10.0g, 氯化纳5.0g, 琼黯15.0g. 将t述试JM加水约950mL，在电沪上加热滚解后，趁热周四层运用激黯纱布过滤子搪瓷重量杯中，并用热水补充至1000mL。用氮氧化纳溶液(4.5)或盐酸溶液(4.的调节pH假至7.Z士2.并分装在500mL三角瓶中，每瓶分装量不超过其总容量的2/3。塞上棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用蒸汽压力灭菌器121士1C灭茵ISmino6.2 元商草草释水的领备6.2.1 生理盐水的配和tl，称取8.50g氯化铺
5、洛解在1000mL水中，混匀。6.2.2 将生理盐水(6.2.1)分装在IOOmL膝口三角瓶中，每个三角瓶塞子和瓶口问插入一小纸片，塞紧瓶塞.每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎以防污染，用蒸汽B力灭菌器121士1C灭菌15mino6.3 到度吸管的灭葛6. 3. 1 将流净并烘干活的吸管粗端塞上E!f用脱B穗，棉花吉重要适宜，长度大约1015mm.棉花不宣露在口外.多余的棉花可以用火焰烧掉。6. 3. 2 每交刻度吸管用1条约4050mm宽的牛皮纸条，以45.左右角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，极端F百多余的纸条折叠rr缮，不使散开，标上量度，辛苦干支扎成一来，置电热干燥箱中，于160士2C灭部
6、2ho6.4 培养脱的灭菌将洗净并烘干后的培养肌10个左右接在一起，用牛皮纸卷成一筒，设电热干燥箱中，于160士2C灭离2ho3QZ GB/T 14643.1-93 6.5 石英砂灭商将洗净烘干后的石英砂装入哥哥口三角瓶中，按(6.2.2)包扎、灾窟。7 ;如l定步骤7.1 辛辛品的采集7. 1. 1 采集粘泥袋里呈觅下图。, i 转子流量计.2一浮游生物商，3-Jl1X-IO截止拇，4-X43暂-10草塞阂，5一量筒7.1.2 调节采样装置中阀门，使冷却水的流速控制在O.8m/s tr.右，水流量在1m/h左右，然黯关主浮游生物网旋塞阀，过滤1m水，7.1.3 关闭水阀，取下浮游生物闷，打开
7、旋塞阀，将粘泥收集在500mL量筒内，用自来水冲洗滤闷，洗澡液也收集在500mL量街肉，沉淀30min后倾tIi上层清液。将剩余浊液转移交25mL量街内，静止30mm.记录沉淀泌的粘泥体积。以mL/旷表示循环冷却水中的粘泥量，粘泥最(v)按式(1)计算av=安. . . . . . . . . ( 1 ) 式中tVz兹在苦中粘泥体积，mL;v，一通过浮游生物网过挂靠的循环水蠢，m307.1.4 用无前吸管移去25mL:!鼓筒内的上清液，将量筒内的粘泥或部分粘泥(7.1.3)转移至洗净并烘于后瓷研钵中，加入约2g灭过酶的石英砂(6.们，充分研磨后转移至lOOOmL洗净并烘干后的容量瓶中.ffl无
8、葱稀释水草毒辈辈至J度，充分混匀，并立即进行测定。7.2 元菌幸自(室灾菌把试验所用的无菌稀释水，无菌培养皿、无窗吸管等用品放入无菌箱窒内，打开紫外线灯灭菌30mi日。7.3 水样的稀释和接种7. 3. 1 粘泥水样(7.1.4)放入灭过茵的无蔼辈革釜)(7.2)中，立罢手用75%(v/v)乙醇溶液浸泡始运用脱脂棉球擦手，点燃无菌箱室)内的酒精灯。7.3. 2. 7. 3. 7的操作应在元菌箱(室)内的火焰区进行。:;03 GB/T 14643.1-93 7.3.2 选择适宜的稀释度，应使最后一个稀释度接种后王fJJ主上空沃的葛落数小子300个。在空白稀费水样瓶(6.2)上标上稀释度数。7.
9、3.3 用10倍稀释法稀释水棒，即用5mL无菌吸管(6.3)吸取5mL水样(7.1.4)注入iJj45mL空白稀辛辛水中手5分摇匀，此时稀释度为16367.3.4 另取一支5mL无商吸管吸取5mL稀释度为10-(7)样注入iJJ第二个稀稀水中，充分摇匀，此时稀稀度为102.依次类推.至需要害的稀辛辛度为止。7. 3. 5 将不同稀释度的水样分别接种到无菌培养皿(6.4)中，每个稀稀度重复接种3-5皿，每肌接种lmL.接种对左手手撑托位培养E茧，大拇指和食指辈辈轻将培养殖盖挺起，使右手中的吸管恰好插入，吸管与培养皿j高成45角相接，移开吸管时吸管不宜再被JJj培养皿，接种时间不宜超过如，每接一个
10、稀释度更换-交无楼吸管。7.3.6 另取一组培养皿不接水样，作为空白。7.3.7 将灭过蕾费3培养基(6.1)冷却至45:l:1C.按(7.3.5)掀开辈辈养lll1.盖章，将培养基灌入培养茸茸内，每lll1.应灌15吨-20mL.灌皿时不要使培养基直接灌在水样上，灌皿后要将融化的培养基和血中水祥彻底混合，小心勿使混合液溅到培养皿的边缘。测定一个水样从接种到尊自腿不得超过20mn.7.4 培养待培养皿中培养基(7.3.7)困化后.fjJ量平皿，在生化培养箱中29士1(:培养72h.8 计数与报告8.1 培养之后，取出培养鼠，若空翻培养跑出现草草落，表明测定过程中有污染，本次测定无效。8. 2
11、选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，立即进行计数，求得平均菌落数，并修约成二位有效数字见表j9iJl)。8. 3 若有二个稀释度，其生长菌落数均在30-300之间，则视二者之比债来决定，若其比值小T2.应报告宾平均数s若大于2则报告其中较小的数字兑表伊U2及领i份。8.4 若所有稀释度的平均菌落数均大于300.则应选择稀释度最高的培养皿计数(见表例4).8.5 若所有稀释度的平均离落数均小子30.则应选择稀事季度最低的培养lllI.计数(觅表伊U5). 8.6 若所有稀释度均无菌落生沃，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之见表例。8.7 若所将稀蒋度的平均德落数均不在30-300之间，其中一
12、部分大于300而另一部分小子30时，则选择最接近30或300的培养皿计数见表倒7)。8.8 以个/mL表示循环冷却水中粘液形成茵的数量(X)按式(2)计算=X X1XIOGO 一一- F V, X 1 000 000 =土立二LUHH-HH-mend-m.(2 ) F. V,Xl 000 式，tx，一一按(8.2)方法计数得出的培养皿主11史的平均菌落数，个，V一一按(7.1.3)计算的粘泥量.，mL/m3;V唱一按(7.1.4)测定时所取的粘泥体积，mL;5(H 是户一按(7.1.4)测定玲，所取粘君在体积(V，)与黯泥总体积(V，)之比懂事f一一计数细的祥晶稀释度数。GB/T 14643.
13、1 93 例表例稀释度及菌落数两稀释度菌帖液形成菌总数报告方式段10 10-2 10-3 落数之比个/mL个/mLi 164 20 16400 1.6XI0 2 295 46 1. 6 37750 3.8Xl0 3 271 60 2. 2 27 100 2. 7X 10 4 650。如it3叫313 313 000 3.1XIO 5 27 11 5 270 Z.7XI0 6 。IXIO 10 7 306 12 30600 3.IXI0 糖密度9. 1 由于微生物能以单独个体，双双成对、链状、成簇或一阁团等形式存夜，而且没有单独一种培养基能满足一个水样中所有细菌的生理要求。所以，由此法所得的菌落数可能要低于其正常存在的活细胞的数吕，9.2 标准平双t数的正确度随着平行摔怒钓鱼曾主喜怒增捕，当使愚5个孚行瓢，每盛放lmL祥占主苦苦测定结果的置信度为95%。附加说明z本标准EIl中华人民共和困化学工业部提出。本标准由化学工业部天津化工研究院归口。本标准出离京大学和离京中山水处理公司负责起草。本标准2主要起草人蒋派排、了美芳、怨:在宽、曾路军罢。503
