1、GB/T 173341998 前 言 本标准于 1998年4月2 0日首次发布。 本标准由中华人民共和国卫生部提出。 本标准起草单位: 河北省卫生防疫站、 天津市食品卫生监督检验所、 山西省食品卫生监测所。 本标准主要起草人:韩会欣、贾丽华、常凤启、王萌国、高唯勤。 本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院负责解释。 中华人民共和国国家标准 食品中游离棉酚的测定 Determination of gossypol in food GB/T 173341998 1 范围 本标准规定了用液相色谱法测定食品中游离棉酚的含量。 本标准适用于植物油或以棉籽饼为原料的其他 食品中游离棉酚的测定,
2、最低检出量为 5 ng,最低检出浓度 5 mg/kg。 2 原理 植物油中的游离棉酚经无水乙醇提取,经 C18柱将棉酚与样品中杂质分开,在 235 nm 处测定。 水溶性样品中的游离棉酚经无水乙醚提取,浓 缩至干,再加入乙醇溶解,用 C18柱将棉酚与样品中杂质分开, 在 235 nm 处测定。 根据色谱峰的保留时间定性,外标法峰高定量。 3 试剂 本标准所用试剂凡未指定者,均为分析纯(A.R) ,水为石英亚沸蒸馏水。 31 磷酸。 32 无水乙醇。 33 无水乙醚。 34 普通氮气。 35 甲醇:经 0.5m 滤膜过滤。 36 棉酚标准储备液:精密称取 0.1000 g 棉酚纯品,用无水乙醚溶
3、解,并定容至 100 mL,此溶液相当于每毫升含棉酚 1.0 mg。 37 棉酚应用液:取 1 mg/mL 棉酚储备 液 5.0 mL 于 100 mL 容量瓶中,用无水乙醇定容至刻度,此溶液相当于每毫升含棉酚 50 g。 38 磷酸水:取 300 mL 水,加 6.0 mL 磷酸,混匀,经 0.5m 滤膜过滤。 4 仪器 41 SY-5060 液相色谱仪(带 UV-100 紫外检测器) 。 42 KD-浓缩仪。 43 离心机:3000 r/min。 中华人民共和国卫生部 1998 04 20 批准 1999 01 01 实施 中华人民共和国卫生部 批准 实施GB/T 173341998 44
4、 100L 微量注射器。 45 Micropark- C18(250 mm-6mm)不锈钢色谱柱。 5 分析步骤 5 1 色谱条件: 柱温 40; 流动相, 甲醇磷酸水=8515; 测定波长 235 nm;流量 1.0 mL/min;纸速 0.25 mm/min,衰减:1;灵敏度:0.02 AUFS;进样 10L。 52 试料制备 521 植物油:取油样 1.000 g,加入 5 mL 无水乙醇,剧烈振摇 2 min,静置分层(或冰箱过夜) ,取上清液过滤,离心,上清液即为试料,10L 进液相色谱。 5 2 2 水溶性样品; 吸取样品 10.0 mL于离心试管中, 加入 10 mL 无水乙醚,
5、振摇 2 min,静置 5 min,取上层乙醚层 5 mL,用氮气吹干,用 1.0 mL 无水乙醇定容,过滤膜,即为试料,取 10L 进液相色谱仪。 53 测定 531 标准曲线制备:准确吸取 1.00,2 .00,5.00,8.00 mL 的 50g/mL的棉酚标准液于 10.0 mL 容量瓶 中,用无水乙醇稀释至刻度,此溶液相应于 5,10,25,40g/mL 的标准系列,进样 10L ,作 050g/mL 的标准系列,根据响应值绘制标准曲线。 5 3 2 色谱分析: 取 10L 样品溶液注入液相色谱仪, 记录色谱峰的保留时间和峰高,根据保留时间确定游离棉酚,根据峰高,从标准曲线上查出游离棉酚含量。 6 计算结果 见式(1) 。 mAX=5 ( 1) 式中: X样品中棉酚的含量,mg/kg; m样品质量,g; A测定试料中棉酚的含量,g/mL; 5折合所用无水乙醇的体积,mL; 7 精密度和允许误差 重复测定变异系数(相对标准差)小于 6%;两次平行测定相对允许误差绝对值小于 10%;平行测定结果用算术平均值表示。 中华人民共和国卫生部 1998 04 20 批准 1999 01 01 实施