1、ICS 13300；1302040A 80 冒中华人民共和国国家标准GBT 21796-200820080512发布化学 口口口活性污泥呼吸抑制试验Chemicals-Activated sludge，respiration inhibition test2008-09-0 1实施丰瞀徽鬻瓣警矬瞥星发布中国国家标准化管理委员会况19刖 昌GBT 2 1796-2008本标准等同采用经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则No209(1984年)活性污泥呼吸抑制试验(英文版)。本标准做了下列编辑性修改：将计量单位改为我国法定计量单位。本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SACTC 2
2、51)提出并归口。本标准负责起草单位：环境保护部化学品登记中心。本标准参加起草单位：环境保护部南京环境科学研究所、中国检验检疫科学研究院、广东省微生物研究所。本标准主要起草人：刘纯新、卢玲、沈英娃、刘济宁、周军英、陈会明、梅承芳。化学品活性污泥呼吸抑制试验GBT 21796-20081范围本标准规定了化学品活性污泥呼吸抑制试验的方法概述、试验准备、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。本标准适用于大多数水溶性、低挥发性、易滞留于水体的物质；不适用于在氧作用下可能发生磷酸化而分解的物质。对于水溶性有限的受试物，可能无法测定半效应浓度。本标准提供一种快速筛选方法，鉴定哪些物质可能对污水处理厂的
3、好氧微生物产生不利影响，并为生物降解试验提供相应的无抑制受试物浓度。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。21呼吸速率respiration rate单位时间内污泥或污水中好氧微生物消耗的氧气量，通常以每小时每升污泥或污水消耗的氧气毫克数表示mg(Lh)。22半数效应浓度median effective concentration，EC50与对照组比较，引起微生物呼吸速率下降50的受试物浓度。3受试物信息a)结构式；b)纯度；c)水中溶解度；d)蒸汽压。4方法概述41原理在活性污泥中加入一定量的合成污水，接触30 rain或3 h，测定好氧微生物呼吸速率。在相同的条件下，测定试验系统中加入不
4、同浓度受试物后同一活性污泥的呼吸速率。用占两个对照组呼吸速率均值的百分数表示特定浓度受试物的抑制效应。由不同浓度的测定结果计算出EC s。值。42参比物本标准推荐3，5-二氯苯酚作为参比物。43注意事项活性污泥可能含有潜在致病生物，应小心处理。5试验准备51仪器和设备a)测定装置，见图1(包括磁力搅拌器，平底烧瓶)；b)曝气装置；1GBT 21796-2008c)pH计；d氧电极。氧电极平底烧瓶搅拌碰于注：该装置为非标准装置，但需确保试液装满烧瓶顶部，电极探头与烧瓶瓶颈紧密相配，隔绝瓶外空气。图1测定装置52微生物接种液采用主要处理生活污水的污水处理厂的活性污泥作为接种物。污泥取回实验室后用自
5、来水冲洗，离心，倒出上清液。重复操作3次。取少量洗过的污泥称重、干燥，计算出试验所需污泥的量(湿重)。配制浓度为4 gL+04 gL的活性污泥混合悬浮液。若采集的活性污泥当天不使用，应在每升上述活性污泥中加入50 mL合成污水，在202下曝气培养，使用前测定pH，必要时用碳酸氢钠溶液调节pH值至60-80，并测定混合液中悬浮物含量。53试验用水曝气除氯的自来水。54合成污水配制分别称取16 g蛋白胨、11 g牛肉膏、3 g尿素、07 g NaCl、04 g CaCl。2H。O、02 g MgSO。7HzO和28 gKzHPOt，用水溶解，定容至1 L。6试验程序61受试物贮备液若受试物水溶解度
6、大于1 gL，则称取05 g，用蒸馏水溶解并定容至1 L，得05 gL的贮备液。否则，将受试物直接加入试验容器中，或者用有机溶剂配置贮备液。若使用有机溶剂，则该溶剂应对微生物无明显的吸呼抑制或促进作用。此外，需增加含活性污泥和溶剂但不含受试物的对照。62参比物配制用10 raL的1 molL NaOH溶解05 g 3，5-二氯苯酚，用蒸馏水稀释到约30 mL，边振荡边加入05 motL H：SOt直到刚刚出现沉淀，大约需要H。sn4 mL，最后用蒸馏水稀释到1 L，pH值为78。63试验操作受试物和参比物的3 h接触试验可按下述步骤进行：准备一定数量的烧杯(如1 L的烧杯)。试验开始时(o时刻
7、)把16 raL合成污水加试验用水至300 mL，再加200 mL微生物接种液，混合为500 mL，倒人第一个烧杯中，为对照组1(c，)。在20*(22条件下，用洁静无油空气以05 Lrain1 Lmin的速度曝气培养。在15 rain时(15 rain的时间间隔是任意选定的)，在16 mL合成污水中加入100 mL受试物贮备液，再加水至300 mL，然后再加200 mL微生物接种液，充分混合为500 mL。混合液倒人第二个烧杯曝2GBT 217962008气培养。随后，每隔15 rain按此法制各试验液，受试物溶液用量根据浓度设计选定，从而得到一系列不同浓度的受试物试验液。受试物至少设置5个
8、浓度组，参比物最少设置3个浓度。最后制备对照组2(Cz)。3 h后，把C。试验液倒人测定装置，测定10 min的呼吸速率，也可直接在烧杯中测量。同法测定其他处理液及c。每批微生物接种液，都要按同样的方法用参比物溶液检验其活性。如果试验周期为30 rain，试验体系可根据情况作相应改动。7质量保证与质量控制两组空白对照呼吸速率差不高于15。参比物3，5-二氯苯酚3 h的Ecs。为5 mgL30 mgL。8数据与报告81数据处理可以根据记录仪所画的曲线在65 mgL和25 mgL之间计算呼吸速率，如果呼吸速率低，可根据10 rain以上的耗氧量计算，测定呼吸速率的呼吸作用曲线部分应为线性。根据溶解
9、氧测定值计算呼吸速率，为了计算受试物的抑制效应，将呼吸速率以两组空白对照呼吸速率的百分比形式表达。见下式：R一1一Rq兰+LRc1002式中：R受试物呼吸抑制率，；足受试物受试浓度的耗氧速率，单位为毫克每升小时Emg(Lh)，以Oz计；R。，对照组1(c。)的耗氧速率，单位为毫克每升小时-rag(L“)，以0。计；R。对照组2(C：)的耗氧速率，单位为毫克每升小时Emg(Lh)，以0z计j。按上述公式计算每一试验浓度的抑制百分率，在对数一正态(或对数一概率)纸上绘制抑制百分率对浓度的曲线，计算出EG。EC；。值的95置信限可用标准程序计算求得。鉴于结果的可变性，推荐用量级大小表示试验结果，例如
10、小于1 mgL，1 mgL10 mgL，10 mgL100mgL等。82结果报告试验报告应包括以下内容：a)受试物：化学特性鉴别数据。b)试验条件：接种物：状态和取样地点，浓度和预处理方式；试验周期与温度；受试物和参比物的ECs。；非生物耗氧量(若存在)。c)结果：测量数据；呼吸抑制曲线和ECs。计算方法；EC5。(有条件，提供95置信限)、ECz。和ECs。所有观测结果以及任何偏离本方法并可能影响试验结果的情况。d)结果讨论。GBT 21796-2008参考文献r1 International Standard ISoTC 147SC 5WC l，N53 NoD(1981)Ez2 BBroecker and RZahn，Water Research 11，165(1977)E33 DBrown。HRHitz and LSchaefer，Chemosphere 10，245(1981)E43 ETDA(Ecological and Toxicological Association of Dyestuffs Manufacturing Industries)Es BRobra，WasserAbwasser 117，80(1976)E6 wSchefer，Textilveredlung 6，247(1977)
