1、GB/T 4789. 11-2003 78 前言本标准对GB/T4789. 11-1994(食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验进行修订。本标准与GB/T4789. 11-1994相比主要修改如下z按照GB/T1. 1-2000对标准文本的格式和文字进行修改。修改并规范原标准中的设备和材料。本标准自实施之日起.GB/T4789. 11-1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位:北京市卫生防疫站、中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准主要起草人:X1J以贤、冉陆、付萍、姚景会。本标准于1984年首次发布.1994年第一次修订，本次为第二次修订。GB/T 47
2、89. 11-2003 1 范围食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。本标准适用于各类食品和食物中毒样品中溶血性链球菌的检验。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 4789. 28-2003 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 设备和材料3. 1 冰箱，OC4C。3.2 恒温培养箱，36C+1C。3.3 恒
3、温水浴锅236士1C。3.4 显微镜，lOX100X。3.5 均质器或灭菌乳钵。3.6 离心机，4000r/min. 3. 7 架盘药物天平，0g500 g.精确至0.5g. 3.8 灭菌试管，10mmX100 mm、16mmX160 mm。3.9 灭菌吸管，1mL(具0.01mL刻度)、5mL、10mL(具0.1mL要rJ度)。3. 10 灭菌锥形瓶，100mL。3. 11 灭菌培养皿2直径90mmo 3. 12 灭菌棉签、慑子等。4 培养基和试剂4. 1 葡萄糖肉浸液肉汤2按GB/T4789.28-2003中4.1规定。在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。4.2 肉浸液肉汤z按GB/T4789.
4、 28-2003中4.1规定。4.3 匹克氏肉汤z按GB/T4789. 28-2003中4.62规定。4.4 血琼脂平板z按GB/T4789.28-2003中4.6规定。4.5 人血浆。4.6 0.25%氯化钙。4.7 0.85 %灭菌生理盐水。4.8 杆菌肤药敏纸片(含0.04单位)。5 检验程序检验程序见图1。79 GB/T 4789. 11-2003 L 撞样25 g(mL)+225 mL灭菌生理盐水葡萄糖肉浸檀肉汤也F36C土1C或匹克民肉面乞去h36C土1I 24h I革兰民提色I咔剖i ?J/.I主J| 醒丰血| 告!-报圈16 操作步骤6. 1 样晶处理按元菌操作称取食品检样25
5、日(mL).加入225mL灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。6.2 培养将上述混悬液吸取5mL.接种于50mL葡萄糖肉浸液肉汤，或直接:lW线接种于血平板。如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经36C土lC培养24h.接种血平板，置36C土1C培养24h. 挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肤敏感试验。6.3 形态与染色本菌呈球形或卵圆形，直径。.5mlm.链状排列，链长短不一，短者4个8个细胞组成，长者20个30个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关;液体培养中易呈长链P在团体培养基中常呈短链，不形成芽抱，无鞭毛，
6、不能运动。6.4 培养特性该菌营养要求较高，在普通培养基土生长不良，在加有血液、血清培养基中生长较好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或颗粒状沉淀。血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表团光滑，有乳光，直径约O.5 mmO. 75 mm.为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有2mm-4 mm 界限分明、元色透明的溶血圈。6.5 链激酶试验致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶(HP溶纤维蛋白酶).此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后海解纤维蛋白。吸取草酸梆血浆。.2mL. :t.lU O. 8 mL灭商生理盐水，混匀，再加入18h24 h、36c士1C培养的链
7、球菌培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL(如氯化钙已潮解，可适当加大至O.3%0. 35%).振荡摇匀，置于36C土1C水浴中10min，血浆混合物自行凝固凝固程度至试管倒置，内容物不流动).然后观察凝固块重新完全溶解的时间，完全港解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。GB/T 4789. 11-2003 草酸佣人血浆配jfj!J，草酸何0.01g放入灭菌小试管中，再加人5mL人血，混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸御人血浆。6.6 杆菌肤敏感试验挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上，用灭菌银子夹取每片含有0.04单位的杆菌肤纸片，放于上述平板上，于36C土1C培养18h-24 h.如有抑菌带出现即为阳性，同时用已知阳性菌株作为对照。81
