1、ICS 0710030C 53中华人民共和国a园国家标准2008-1 1-21发布食品卫生微生物学检验粪大肠菌群计数Microbiological examination of food hy舀eneEnumeration of faecaJ coliforms2009-03-01实施丰翟戮窭发布中国国家标准化管理委员会微19刖 舌本标准修改采用了美国食品药品管理局(FDA)细菌学分析手册第4章大肠杆菌和大肠菌群计数(2002年)(Bacterlolo舀cal AnalyticalManual，Chapter 4：Enumeration of盯heri(hia coli andthe COli
2、form bacteria，2002)。本标准与FDA方法的主要差别是：将样品制备时取样量50 g(或50 mI。)修改为25 g(或25 mI)；一将【，ST培养温度3j1修改为36l；将EC培养温度455o2(般食品)和445o2(贝类)统一为445o2。本标准的附录A和附录B为规范性附录。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准由中华人民共和国卫生部负责解释。本标准负责起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准参与起草单位：江苏省疾病预防控制中心、中华人民共和国内蒙古出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、上：海市疾病预防控制中心。本标准主要起草人：刘秀梅
3、、袁宝君、刘中学、卢行安、刘弘、陈敏、田静。食品卫生微生物学检验粪大肠菌群计数GBT 4789 3920081范围本标准规定了食品中粪大肠菌群计数的方法。本标准适用于各类食品中粪大肠菌群的计数。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。21粪大肠菌群faecal coliform一群在445培养24 h48 h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌群来自人和温血动物粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：31恒温培养箱：361。32冰箱：25。33恒温水浴箱：4454-
4、02。34天平：感量01 g。35均质器。36振荡器。37无菌吸管：1 mI。(具001 mI。刻度)、1 0mI。(具01 mL刻度)或微量移液器及吸头。38无菌锥形瓶：容量500 ml。39无菌培养皿：直径90 mm。310 pH计或pH比色管或精密pH试纸。4培养基及试剂41 月桂基硫酸盐胰蛋白胨(1auryl sulfate tryptose，LST)肉汤：见第A】章。42 EC肉汤(Ecoli broth)：见第A2章。43无菌生理盐水：称取85 g氯化钠溶于l 000 mI。蒸馏水中，121高压灭菌1 5 min。44 1 molI。氢氧化钠(NaOH)：称取40 g氢氧化钠溶于1
5、 000 mI，蒸馏水中。45 1 moll。盐酸(HCl)：移取浓盐酸90 mI。，用蒸馏水稀释至1 000 mL。5检验程序粪大肠菌群检验程序见图1。GBT 4789392008图1 粪大肠菌群MPN计数法检验程序6操作步骤61样品的稀释611 固体和半固体样品：称取25 g样品，置盛有225 mI，磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8 000 rrnin10 000 rrain均质l min2 rain，制成1：10样品匀液，或置225 IllI，稀释液的无菌均质袋中，用拍打式均质器拍打l Ilin2 rain，制成1：10的样品匀液。612液体样品：以无菌吸管吸取样品25 mI。置
6、盛有225 mI。磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。613样品匀液的pH值应在6575之间，必要时分别用1 molI。氧氧化钠(NaOH)或1 molL盐酸(HC)调节。614用1 ml。无菌吸管或微量移液器吸取l：lo样品匀液l mI，沿管壁缓缓注人盛有9 mI磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用1支1 mI无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1：joo的样品匀液。615根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1
7、mI无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过1 5 min。62初发酵试验每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液)，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(IST)肉汤，每管接种l mI(如接种量需要超过l mI，则用双料LST肉汤)，361培养24 h2 h观察倒管内是否有气泡产生，如未产气则继续培养至48 h2 h。记录在9GBT 478939200824 h和48 h内产气的LST肉汤管数。未产气者为粪大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。63复发酵试验用接种环从所有48 hi2 h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于45EC
8、肉汤管中。将所有接种的EC肉汤管放人带盖的445-F02恒温水浴箱内，水浴的水面应高于肉汤培养基液面，培养24 h2 h，记录EC肉汤管的产气情况。产气管为粪大肠菌群阳性，不产气为粪大肠菌群阴性。64粪大肠菌群MPN计数的报告根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查粪大肠菌群最可能数(MPN)检索表(见附录B)，报告每克(或毫升)粪大肠菌群的MPN值。GBT 4789392008A1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤A11成分胰蛋白胨或胰酪胨氯化钠乳糖磷酸氢二钾(K：HPO。)磷酸二氢钾(KH。PO；)月桂基磺酸钠蒸馏水pH 6802A12制法将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。菌1 5 min。
9、A2 EC肉汤A21成分胰蛋白胨或胰酪胨3号胆盐或混合胆盐乳糖磷酸氢二钾(K：HPO。)磷酸二氢钾(KH。PO。)氯化钠蒸馏水pH 6901A22制法将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。菌15 min。附录A(规范性附录)培养基和试剂200 g50 g50 g275 g275 gO1 g1 000 mL分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL，121高压灭200 g15 g50 g40 g15 g50 g1 000 mI分装到有玻璃小倒管的试管中，每管8 mL，1 21高压灭附录B(规范性附录)粪大肠菌群最可能数(MPN)表每克(或毫升)检样中粪大肠菌群最可能数(MPN)的检索见表B1。表B
10、1 粪大肠菌群最可能数(MPN)检索表GBT 4789392008阳性管数 95置信区间 阳性管数 95置信区间MPN MPN0 10 0 01 0 001 下限 上限 0 10 0 01 0 001 下限 上限0 0 0 1100 420 注l：本表采用3个稀释度Fo 1 g(或0 l mI，)、00l g(或001 m【)和0 001 g(或0 001 mL)，每个稀释度接种3管。注2：表内所列检样量如改用1 g(或1 n1 c)、0【g(或0 1 mf。)和00I g(或0 oI rn。)时，表内数字应相应降低10倍；如改用0 01 g(或0 01 ml。)、0 001 g(或0 001 m【，)、0 000 1 g(或0 000 1 mI。)时，则表内数字应相应增高10倍，其余类推。
