1、ICS 6718010B 47 a宦中华人民共和国国家标准GBT 21 1642007蜂王浆中链霉素、双氢链霉素残留量测定液相色谱法Determination of streptomycin、dihydrostreptomycln residues in royal jellyLiquid chromatography method2007-10-31发布 2008040 1实施宰瞀髁紫瓣警矬瞥星发布中国国家标准化管理委员会促111刖 吾GBT 211642007本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检
2、疫局、中国兽医药品监察所。本标准主要起草人：陈惠兰、吴斌、赵增运、沈崇钰、丁涛、黄娟、朱成晶、徐锦忠、蒋原、陶宏锦、朱馨乐。蜂王浆中链霉素、双氢链霉素残留量测定液相色谱法GBT 21 16420071范围本标准规定了蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留的液相色谱一柱后衍生化荧光测定方法。本标准适用于蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量的铡定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标
3、准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682 1992，neq ISO 3696：1987)3方法提要蜂王浆样品中链霉素和双氢链霉素用庚烷磺酸钠一磷酸钠混合提取液提取，提取液用c，s固相萃取柱净化，甲醇洗脱，旋转蒸发至干，用001 molL庚烷磺酸钠溶液溶解定容，样品溶液经高效液相色谱一柱后衍生，荧光检测器检测，外标法定量。4试剂和材料41甲醇；色谱纯。42水：应符合GBT 6682规定的一级水。43乙腈：色谱纯。44氢氧化钠：分析纯。45三氯甲烷：分析纯。46 12一萘醌一4一磺酸钠：色谱纯。47叔丁基甲基醚：色谱纯。48正己烷：分析纯。49庚烷磺酸钠：色谱纯。410磷
4、酸钠：分析纯。411磷酸：分析纯。412链霉素和双氢链霉素标准物质：纯度99。413 C。固相萃取柱：500 mg，3 mL。使用前用5 mL甲酵10 mL水预洗并保持柱俸湿润。414庚烷磺酸钠一磷酸钠混合提取液：称取1010 g庚烷磺酸钠、410 g磷酸钠，溶于1 000 mL水中，用磷酸(411)调溶液pH 33。415叔丁基甲基醚一正己烷溶液：取10 mL正己烷、40 mL叔丁基甲基醚，混匀。4。16庚烷磺酸钠溶液：o01 motL。称取202 g庚烷磺酸钠，溶于1 000 mL水中，用磷酸(411)调pH33。417氢氧化钠溶液：02 molL。称取8 g氢氧化钠(44)，溶于1 00
5、0 mL水中，过045,am的滤膜，抽滤脱气。】GBT 211642007418 1，2-萘醌一4一磺酸钠溶液：06 mmolL。称取0078 g 1，2一萘醌一4一磺酸钠(46)，用500 mL水溶解，过045 pm的滤膜，抽滤脱气。419链霉素和双氢链霉素标准储备溶液：010 mgmL。准确称取适量的链霉素和双氢链霉素标准品，用水溶解定容，配制成010 mgmL的标准储备液。储备液贮存在4C冰箱中，保存期一年。420链霉素和双氢链霉素标准工作溶液：根据试验需要，用庚烷磺酸钠溶液(416)稀释标准储备液(419)，配成适当浓度的标准工作溶液，现用现配。5仪器51 高效液相色谱仪配柱后衍生装置
6、和荧光检测器，Pekering双通道柱后衍生装置或相当者。52旋涡混匀器。53固相萃取装置。54旋转蒸发器。55离心机。56真空泵：真空度应达到80 kPa。57 pH计：测量精度土002。58具塞离心管：50 mL。59移液管：200 mL、100 mL、1o mL。510滤膜过滤器：045 pm，水相。6试样的制备与保存61试样的制备将样品解冻搅拌均匀，分出05 kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并标明标记。62试样保存将试样于一18以下保存。7测定步骤71提取称取5 g试样，精确到001 g，置于50 mL离心管中。准确加入200 mL提取液(414)，10 mL三氯甲烷(4
7、5)，在混匀器上混合2 mln，混匀后于2 000 rmin下离心5 rain，上清液待净化。72净化将储液器装在预洗好的C。固相萃取柱(413)上。准确移取100 mL上清液(71)于储液器中，使溶液以15mLmin的流速通过c。固相萃取柱。用10mL水淋洗c-s固相萃取柱，在真空泵70 kPa的负压下，负压抽干5 rain，再用4 mL叔丁基甲醚一正己烷混合溶液(415)淋洗固相萃取柱，负压抽干5 rain，弃去全部淋洗液。用10 mL甲醇以15 mLmin的流速洗脱链霉素和双氢链霉素于50 mL离心管中，用旋转蒸发器于45C水浴上将其减压蒸发至干。准确加入11 0mL庚烷磺酸钠溶液(41
8、6)溶解残渣，溶液过045 pm的滤膜，供液相色谱测定。73测定731液相色谱条件a)色谱柱：Kromasil C8 5 pm，250 minx46 mm(内径)，或相当者；b)流动相：001 molL庚烷磺酸钠(416)+乙腈(77+23)；c)流速：10 mLmin；d)柱温：45；e)迸样量：100 pL；2GBT 211642007f)荧光检测器：激发波长263 nrll，发射波长447 nm。732柱后衍生化条件a)柱后衍生剂1：06mmolL1，2一萘醌一4一磺酸钠(418)，流速03mLmin；b)柱后衍生剂2：02molL氢氧化钠(417)，流速03mLmin；c)衍生温度：5
9、0。733色谱测定根据样品溶液中链霉素和双氢链霉素的残留量，选择峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样品溶液中链霉素和双氢链霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。对标准工作溶液和样品溶液等体积参插进样进行测定，在上述色谱条件下，链霉素的保留时间约为342 rain，双氢链霉素的保留时间约为356 rain。链霉素和双氢链霉素标准物质的色谱图见图A1。74空白试验除不加入试样外，均按上述步骤进行。8结果计算结果用色谱数据处理机或按式(1)计算，计算结果需扣除空白值x一冬三坐 。m式中：x试样中链霉素(双氢链霉素)的含量，单位为毫克每千克(mgkg)；A样液中链霉素(双氢链霉素)的峰面积；c
10、标准工作溶液中链霉素(双氢链霉索)浓度，单位为微克每毫升(pgmL)；v样液定容体积，单位为毫舟(mL)；A。标准溶液中链霉素(双氢链霉素)的峰面积；m最终样液代表的试样质量，单位为克(g)。9检测低限、回收率91检测低限蜂王浆中链霉素的检测低限为0020 mgkg，双氢链霉素的检测低限为0080 mgkg。92回收率蜂王浆中链霉素在添加水平0020 mgkg0100 mgkg，其回收率范围为874930；双氢链霉素在添加水平0080 mgkg0400 mgkg，其回收率范围为804909。GBT 21 1642007附录A(资料性附录)标准物质色谱图0 5 10 15 20 25 30 3图A1 链霉素和双氢链霉素标准物质液相色谱图
