1、ICS 67120X 04 雪宜中华人民共和国国家标准GBT 2131 12007动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法同 效液相色谱串联质谱法Determination of residues of nitrofuran metabolites iU foodstuffs ofanimal origin-HPLC-MSMS method2007-10-29发布 2008-040 1实施丰瞀徽鬻瓣瞥矬赞星发布中国国家标准化管理委员会促19刖 罱GBT 2131 12007本标准的附录A、附录B、附录c均为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草
2、单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出入境检验检疫局。本标准主要起草人：彭涛、李晓娟、国伟、孙利、林黎明、于静、邱月明、储晓刚、唐英章。动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法高效液相色谱串联质谱法GBT 2131120071范围本标准规定了动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物3一氨基一2一恶唑酮(3一amino一2一oxalidinone，AOZ)、5-吗啉甲基一3一氨基一2-恶唑烷基酮(5-morpholinomethyl一3一amino一2一oxalidinone，AMOZ)、卜氨基一乙内酰脲(1一amino-hydantoin，AHD)和氨基脲(semicarbazi
3、de，SEM)残留量的高效液相色谱串联质谱测定方法。本标准适用于肌肉、内脏、鱼、虾、蛋、奶、蜂蜜和肠衣中硝基呋喃类药物代谢物3一氨基一2一恶唑酮、5一吗啉甲基一3一氨基一2一恶唑浣基酮、l-氨基一乙内酰脲和氨基繇残留量的定性砖证积定量测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而。鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注13期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682-1992，neq ISO
4、 3696：1987)3原理样品经盐酸水解，邻硝基苯甲醛过夜衍生，词pH值7，4后，用乙酸乙酯提取，正己烷净化。分析物采用高效液相色谱串联质谱定性检测，采用稳定同位素内标法进行定量测定。4试剂和材料除非另有说盟，所有试剂均为分析纯，水为GBT 6689规定的一级水。41 甲醇：高效液相色谱级。42乙腈：高效液相色谱级。43乙酸乙酯；高效液相色谱级。44正己烷：高效渡相色谱级。45浓盐酸。46氢氧化钠。47甲酸：高效液相色谱级。48邻硝基苯甲醛。49三水磷酸钾。410乙酸铵。411 02 molL盐酸溶液：准确量取17 mL浓盐酸(45)，用水定容至1 L。412 20 molL氢氧化钠溶液：准
5、确称取80 g氢氧化钠(46)，用水溶解并定容至1 L。413 0I moiL邻硝基苯甲醛溶液：准确称取15 g邻硝基苯甲醛(48)，用罕醇溶解并定容至100mL。414 03 molL磷酸钾溶液：准确称取79893 g三水磷酸钾(49)，用水溶解并定容至1 L。】GBT 213112007415乙腈饱和的正己烷：量取正已烷80mL于100mL分液漏斗中，加入适量乙腈后，剧烈振摇，待分配平衡后，弃去乙腈层即得。416 01甲酸水溶液(含0000 5 molL乙酸铵)：准确量取l mL甲酸(47)和称取0038 6 g乙酸铵(410)于1 L容量瓶中，用水定容至1 L。417 标准物质：3一氨基
6、一2一恶唑酮、5一吗啉甲基一3一氨基一2一恶唑烷基酮、1一氨基一乙内酰脲、氨基脲，纯度99。418内标物质：3一氨基一2一恶唑酮的内标物，D4一AOZ；5-吗啉甲基一3一氨基一2一恶唑烷基酮的内标物，D5一AMOZ；1-氨基一乙内酰脲的内标物，”CAHD；氨基脲的内标物，”C“NSEM，纯度99。419标准储备液：分别准确称取适量标准品(精确至0000 1 g)，用乙腈溶解，配制成浓度为100 mgL的标准储备溶液，一18冷冻避光保存，有效期3个月。420混合中间标准溶液：准确移取标准储备液(419)各1mL于100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为1 mgL的混合中间标准溶液，4。
7、C冷藏避光保存，有效期1个月。421 混合标准工作溶液：准确移取01 mL混合中间标准溶液(420)于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为001 mgL的混合标准工作溶液，4冷藏避光保存，有效期1周。422内标储备液：准确称取适量内标物质(精确至0000 1 g)，用乙腈溶解，配制成浓度为100 mgL的标准储备溶液，一18冷冻避光保存，有效期3个月。423中间内标标准溶液：准确移取1 mL内标储备液(422)于100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为1 mgL的中问内标标准溶液，CC冷藏避光保存，有效期1个月。424混合内标标准溶液：准确移取中问内标标准溶液(423)
8、各01mL于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为001 mgL的混合内标标准溶液，4冷藏避光保存，有效期1周。425微孔滤膜：020 pm，有机相。4，26氮气：纯度99999。427氩气：纯度99999。5仪器和设备51液相色谱串联质谱仪：配备电喷雾离子源(ESI)。52组织捣碎机。53分析天平：感量0000 1 g，001 g。54均质器：10 000 rmin。55振荡器。56恒温箱。57 pH计：测量精度士002pH单位。58离心机：10 000 rrain。59氮吹仪。510旋涡混合器。511容量瓶：l L，100 mL，10 mL。5。12具塞塑料离心管：50 mL。5
9、13刻度试管：10 mL。514移液枪：5 mL，1 mL，100 pL。6试样制备与保存61肌肉、内脏、鱼和虾从原始样品取出有代表性样品约500 g，用组织捣碎机充分捣碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容2GBT 213112007器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于一18(2冷冻避光保存。6。2肠衣从原始样品取出有代表性样品约100 g，用剪刀剪成边长50 2050 1020 10允许的相对偏差 士20 25 土30 土50832定量测定按照内标法进行定量计算。84平行试验按照以上步骤对同一试样进行平行试验测定。85空白试验除不称取试样外，均按照以上步骤进行。9结果计算按式(1)进行计算
10、：。 RC XV“一1F灭了式中：x试样中分析物的含量，单位为微克每千克(zgkg)；R样液中的分析物与内标物峰面积比值；c混合基质标准溶液中分析物的浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)4v一样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；R，混合基质标准溶液中的分析物与内标物峰面积比值m试样的质量，单位为克(g)。注：计算结果需将空白值扣除。10测定低限(LOQ)本方法的测定低限(LOQ)：AOZ、AMOZ、SEM、AHD，均为05 pgkg。1l 回收率和精密度参见表c1。GBT 213112007GBT 213112007附录A(资料性附录)串联质谱条件1毛细管电压：35 kV；离子源温度：120；
11、去溶剂温度：350；锥孔气流：氮气，流速100 Lh；去溶剂气流：氮气，流速600 Lh；碰撞气：氩气，碰撞气压26010 Pa；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测(MRM)，监测条件见表A1。表A1 多反应监测(MRM)的条件母离子 子离子化合物 驻留时间s 锥孔电压V 碰撞能量eV(mz) (mz)262 01 60 13AMOZ 3352911 01 60 9D。一AMOZ 340 296 01 60 9166 6 01 50 8SEM 209192 01 50 8l 3C1 5MSEM Z12 168 O1 50 8104 o1 80 15AHD 249134 o1 80 10
12、”CAHD 25Z 134 o1 80 10104 01 77 14AOZ 23613矿 01 77 10D一AOZ 240 134 01 77 108用于定量。61)所列参数是在Waters QuattroUltimaT“PT质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。附录B(资料性附录)标准样品质量色谱图GBT 213112007：；L一一，处一一一，”l一，一一一二一，疋一一一一一一：”001 2 608335262， 。 八oi，+，+，。，：j。，。，。，。，一乳，一一一一一一一一一止一一一一一一一：“8i【，
13、。，二，。3k。，。一L一一二一止一一，一。：r 。L，：J!L。，：；，一l；|L一一一一二一一一一止一一一一一二_L一一二五一一：l一一一一一三一一一强一一一一一一一二j生一一一一一一一一一一k一一一一一一一一轧一一。一n一一一一一二jL一一一一二一一一一一K二一一一一，二轧一一：一一正一一一一一二iL一一一一疋一一一一二1D5一AMOZ； 5”C AHD；2AMOZ： 6AHD；31 3C15N SEM： 7D|AoZ；4SEM： 8AOZ。注：在选定条件下，AMOz、SEM，AHD、AOz的保留时间分别为603、696、706和739 rain。囤B1 硝基呋哺代谢物HPLC-MSMS
14、质量色谱图7GBr 213112007附录C(资料性附录)添加回收率表c1 8种动物源性食品中硝基呋喃代谢物的添加回收率(H=10)添加浓度 平均测定值 回收率范围 相对标准偏差食品名称 化合物“gkg) (gkg) 05 051 97 o1079 39AOZ 10 098 958100o 21lO 992 9681028 3305 050 9431026 34AMOZ 10 100 9691024 2310 1027 10041053 22鸡肉o5 048 887999 44AHD 10 O98 921t039 4910 1009 9721053 3305 051 9411074 53SEM
15、 1o 10I 9861040 6710 1010 9871057 6905 049 9681012 59AOZ 10 1Ol 9841031 6810 996 9541039 31O5 051 9981052 79AMoZ 1o o99 9601017 5 2】O 1002 9681051 68猪肝05 047 893987 90AHD 10 098 9451019 6110 1011 96O1053 8405 O49 9661007 37SEM 1o 103 10261037 7410 996 9711047 7205 052 9591077 45AOZ 10 098 9471017 34
16、10 998 9531054 43肠衣05 050 948105o 43AMoZ 1o 098 9601026 27lO 979 9621006 208表c1(续)GBT 213112007添加浓度 平均测定值 回收率范围 相对标准偏差食品名称 化合物(tugkg) (tzgkg) o5 o49 8951019 47AHD 1o o97 9231046 5110 lo10 9751051 34肠衣05 052 9621087 54SEM 10 099 9721007 6710 1006 9791062 5405 050 9521054 43AOZ 1 0 099 9451024 3210 10
17、 1l 9671057 400 5 049 9421016 33AMOZ 10 100 96 81021 2110 1014 9831058 34虾05 048 8891019 56AHD 10 097 9301045 4610 1019 9721044 2605 052 10041077 89SEM 10 100 9771038 5310 1017 9781054 52O5 052 9881074 36AOZ 10 100 97O1039 3210 1026 9531068 46O5 050 9441038 34AMoZ 10 100 9661031 2410 1022 10001034 1
18、3鱼 05 048 8851016 50AHD 10 097 9261035 4410 1009 9731038 4705 0 51 9721067 40SEM 1 0 100 97 51039 78lO 999 9761035 5205 050 9551079 89鸡蛋 AOZ 10 099 9591023 5910 1036 9991064 449GBT 213112007表C1(续)添加浓度 平均测定值 回收率范围 相对标准偏差食品名称 化合物(t-gkg) (t,gkg) 05 050 9641056 37AMoZ 10 099 9641017 S310 998 9661044 280
19、5 047 919973 121鸡蛋 AHD 10 097 9261045 10510 g80 9511021 8405 050 9461094 101SEM 10 099 9801025 10910 1020 9821053 8705 052 103O1065 35AOZ 10 100 9661036 2810 1034 10011062 2905 050 9451036 44AMOZ 10 100 9751033 2410 993 9651023 22蜂蜜05 046 89795 0 51AHD 10 098 944102 O 3210 1005 9411052 4005 O52 9721089 53SEM 10 101 9941048 5110 1019 9831060 3005 050 9411056 126AOZ 10 100 9721027 7110 1017 9921067 9905 051 10061056 122AMOZ 10 098 9681010 11510 1007 9721057 121奶粉05 046 883967 115AHD 10 098 9391007 12710 1018 9571057 9505 052 9621086 123SEM 10 102 9971045 12210 1049 10331064 11310
