1、ICS 67。120X 04 囝园中华人民共和国国家标准GBT 213142007动物源性食品中头孢匹林、头孢噻呋残留量检测方法液相色谱一质谱质谱法Determination of cephapirin and ceftiofur residuesin foodstuffs of animal originLCMSMS method20071029发布 2008-04-01实施宰瞀鹊鬻瓣訾糌瞥霎发布中国国家标准化管理委员会“1”刖 昌GBT 213142007本标准附录A、附录B、附录c为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出
2、入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：李一尘、林维宣、唐英章、田苗、彭涛、于灵、隋凯、杨春光、王宏伟。本标准为首次发布。1范围动物源性食品中头孢匹林、头孢噻呋残留量检测方法液相色谱一质谱质谱法GBT 213142007本标准规定了动物源性食品中头孢匹林、头孢噻呋残留量液相色谱一质谱质谱测定和确证方法。本标准适用于动物肌肉、肝脏、肾脏、鸡蛋和牛奶中头孢匹林(cephapirin)、头孢噻呋(ceftiofur)残留量的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，
3、然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682-1992分析实验室用水规格和试验方法(neq ISO 3696：1987)3原理样品中头孢匹林、头孢噻呋残留物用乙腈一水溶液提取，提取液经浓缩后，用缓冲溶液溶解，固相萃取小柱净化，洗脱液经氮气吹干后，用液相色谱一质谱质谱测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GBT 6682-1992规定的一级水。41乙腈：高效液相色谱级。4。2甲醇：高效液相色谱级。43甲酸：高效液相色谱级。44氯化钠。45氢氧化钠。46磷酸二氢钾。47磷酸氢二钾。
4、48 01 molL氢氧化钠：称取4 g氢氧化钠，并用水稀释至1 000 mL。49乙腈+水(15+2，体积比)。410乙腈+水(30+70，体积比)。411 005 molL磷酸盐缓冲溶液(pH=85)：称取87 g磷酸氢二钾，超纯水溶解，稀释至1 000 mL，用磷酸二氢钾调节pH值至85士01。412 0025 molL磷酸盐缓冲溶液(pH=70)：称取34 g磷酸二氢钾，超纯水溶解，稀释至1 000mL，用氢氧化钠调节pH值至7oo1。413 oOl moiL乙酸铵溶液(pH一45)：称取077 g乙酸铵，超纯水溶解，稀释至1 000 mL，用甲酸调节pH值至45士01。414头孢匹林
5、、头孢噻呋标准品：纯度均大于等于95。415头孢匹林、头孢噻呋标准储备溶液：分别称取适量标准品(414)，分别用乙腈水溶液(410)溶解GBT 213142007定容至100 mL，溶液浓度为100 tugmL，置于一18冰箱避光保存，保存期5 d。416头孢匹林、头孢噻呋混合标准中间液：分别吸取适量标准储备液(415)于100 mL容量瓶中，用磷酸盐缓冲溶液(41Z)定容至刻度，配成混合标准中间液。混合标准中间液中头孢匹林、头孢噻呋的浓度分别为100 ngmL、5 000 ngmL。置于一4冰箱避光保存，保存期5 d。417混合标准工作液：精密量取混合标准中间溶液(416)适量，用空白样品基
6、质配制成不同浓度系列的混合标准工作溶液(用时现配)。418固相萃取c，。柱：500 mg，6 mL。使用前用甲醇和水预处理，即先用2 mL甲醇淋洗小柱，然后用1 mL水淋洗小柱。5仪器51液相色谱一质谱质谱仪：配有电喷雾离子源。52旋转蒸发器。53固相萃取装置。54离心机。55均质器。56旋涡混合器。57 pH计。58氮吹仪。6试样制备与保存取代表性样品，用组织捣碎机充分捣碎，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于一18C以下冷冻存放。7检测步骤71提取711肝脏、肾脏、肌肉组织、鸡蛋样品称取约5 g试样(精确到001 g)于50 mL离心管中，加入15 mL乙腈水溶液(4，9)，均质30 s，
7、4 000 rrain离心5 min，上清液转移至50 mL离心管中；另取一离心管，加入10 mL乙腈水溶液(49)，洗涤均质器刀头，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头溶液，在旋涡混合器上振荡1 min，4 000 rmin离心5 rain，上清液合并至50 mL离心管中，重复用10 mL乙腈水溶液(49)洗涤刀头并提取一次，上清液合并至50 mL离心管中，用乙腈水溶液(49)定容至40 mL。准确移取20 mL人100 mL鸡心瓶。712牛奶样品称取10 g样品(精确到001 g)于50 mL离心管中，加入20 mL乙腈(49)，均质提取30 s，4 000 rrain离心5
8、min，上清液转移至50 mL离心管中；另取一离心管，加人10 mL乙腈水溶液(49)，洗涤均质器刀头，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头溶液，在旋涡混合器上振荡1 min，4 000 rmin离心5 rain，上清液合并至50 mL离心管中，重复用10 mL乙腈水溶液(49)洗涤刀头并提取一次，上清液合并至50 mL离心管中，用乙腈水溶液(49)定容至50 mL。准确移取25 mL人100 mL鸡心瓶。将鸡心瓶于旋转蒸发器上(37水浴)蒸发除去乙腈(易起沫样品可加入4 mL饱和氯化钠溶液)。72净化立即向已除去乙腈的鸡心瓶中加入25 mL磷酸盐缓冲溶液(411)，涡旋混匀1 r
9、ain，用01 molL氢氧化钠调节pH值为85，以1 mLmin的速度通过经过预处理的固相萃取柱，先用2 mL磷酸盐缓冲GBT 213142007溶液(411)淋洗2次，再用1 mL超纯水淋洗。用3 mL乙腈洗脱(速度控制在1 mLmin)。将洗脱液于45下氮气吹干，用0025 molL磷酸盐缓冲溶液(412)定容至1 mL，过045 p-m滤膜后，立即用液相色谱一质谱质谱仪测定。73测定731液相色谱条件7311色谱柱：COSMOSIL C18柱，250 mm46 ram(内径)，粒度5 tzm。7312流动相：A组分是001 molL乙酸铵溶液(甲酸调pH至45)；B组分是乙腈。梯度洗脱
10、程序见表1。表1梯度洗脱程序步 骤 时间rain 流速(mLmin) 组分A 组分B1 000 10 980 202 300 10 980 2O3 500 10 900 1004 1500 10 700 3005 2000 10 980 207313流速：10 mLmin。7314进样量：100 tzL。732质谱条件7321离子源：电喷雾离子源。732，2扫描方式：正离子扫描。7323检测方式：多反应监测。7324雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件见附录A。733液相色谱一质谱质谱测定根据试样中被测物的含量情况，选取响应值相近的标
11、准工作液一起进行色谱分析。标准工作液和待测液中头孢匹林、头孢噻呋的响应值均应在仪器线性响应范围内。对标准工作液和样液等体积进行测定。在上述色谱条件下头孢匹林和头孢噻呋的参考保留时间分别约为122 min、130 rain。标准溶液的选择性离子流图见图B1。734 定性测定按照上述条件测定样品和建立标准工作曲线，如果样品中化合物质量色谱峰的保留时间与标准溶液相比在士25的允许偏差之内；待测化合物的定性离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或等于3(SN3)，定量离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或等于10(SIN10)；定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准溶液相比，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可
12、判断样品中存在相应的目标化合物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 50 2050 1020 10允许的相对偏差 20 土25 土30 土50735定量测定按外标法使用标准工作曲线进行定量测定。736空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。GBT 2131420078结果计算与表述用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中头孢匹林、头孢噻呋的残留量，计算结果需扣除空白值： x一嗡等U优XUU式中：x试样中头孢匹林、头孢噻呋残留量，单位为微克每千克(#gkg)；c从标准曲线上得到的头孢匹林、头孢噻呋溶液浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)；v样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；
13、m最终样液代表的试样质量，单位为克(g)。9测定低限与回收率91测定低限(LOQ)头孢匹林为l,ugkg，头孢噻呋为50 tugkg。92回收率见表C1。附录A(资料性附录)质谱质谱测定参考质谱条件”GBT 213142007质谱质谱测定参考质谱条件：a) 电喷雾电压(Is)：5 500 V；b) 雾化气压力(Gsl)：0414 MPa(60 Psi)；c) 气帘气压力(CuR)：0207 MPa(30 Psi)；d) 辅助气压力(GS2)：0621 MPa(90 Psi)；e)离子源温度(TEM)：700；f)头孢匹林、头孢噻呋的定性离子对、定量离子对、去簇电压(DP)、碰撞气能量(cE)及
14、碰撞室出口电压(cxP)见表A1。表A1头孢匹林、头孢噻呋的定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞气能量和碰撞室出口电压定性 定量 去簇电压 碰撞气 碰撞室出口名 称 离子对 离子对 (DP) 能量(cE) 电压(CXP)(mz) (mz) V V V42432921 33 10头孢匹林 4243Z921 5542431520 19 1052392412 25 15头孢噻呋 52392412 6052392101 30 151)所列参数是在APl4000质谱仪完成的，此处列出的实验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同型号的仪器。5GBT 213142007q划氍
15、&。刳疆附录B(资料性附录)头孢匹林、头孢噻呋标准品的定量离子对重构离子色谱图12 25100e59 00e48 00e47 00e46 00e4500e4400e43 00e42 00e4100040 0train 13 04train图B1 头孢匹林、头孢噻呋标准品的定量离子对重构离子色谱图322111l642附录C(资料性附录)添加回收率表C1 头孢匹林、头孢噻呋添加回收率GBT 213142007添加浓度 回收率待测物质严gkg 猪肉 猪肝 猪肾 鸡蛋 牛奶1 861927 6927 85 692906 753911 73390o头孢匹林 10 622806 628716 70591o 725881 794935100 725902 665787 681864 716865 77188650 783852 746823 687859 752913 725908头孢噻呋 500 724870 668817 652931 657909 7618572 ooo 709-837 738882 688807 780868 730922
