1、ICS67.04053备案 号： 浙 江 省 地 方 标 准 DB33DB3/T746-209动物源性食品中 20种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法Detrm inationof20kindsofsulfonam idesantibioticsresiduesinfodsproducinganim loriginLC-MS/Sm ethod209-05-13发布 209-06-13实施浙 江 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布DB33/T746 2009I前 言本标 准附 录 A为资 料性 附录 。本标 准 由浙 江省 水产 标准 化技 术委 员会 提出 并归 口。本标 准起
2、 草单 位： 浙江 省水 产质 量检 测中 心。 本标 准主 要起 草人 ： 张海 琪， 徐晓 林， 王扬 ，郑 重莺 ，施 礼科 ，何 丰。DB33/T746 20091动物源性食品中 20种磺胺类药物残留量的测定液相色谱 -串联质谱法1范围本标 准规 定了 动物 源性 食品 中 20种磺 胺类 药物 残留 量的 液相 色谱 -串联 质谱 的测 定方 法。本标 准适 用于 鱼、 虾 、 蟹 、 猪 肉 、 蜂 蜜等 动物 源性 食品 中磺 胺甲 基嘧 啶、 磺 胺 吡啶 、 磺 胺 甲氧 哒 嗪 、磺胺 对甲 氧嘧 啶、 磺 胺 氯哒 嗪、 磺 胺 甲基 异噁 唑、 磺 胺 二甲 异噁 唑、
3、 磺 胺 甲噻 唑、 磺 胺 嘧啶 、 磺 胺 噻 唑 、磺胺 6甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺胍、磺胺 甲噻 二唑 、磺 胺、 磺胺 喹噁 啉、 磺胺 氯哒 酮残 留量 的检 验， 本标 准各 组分 的定 量限 均为 5.0g/kg。2规范 性引 用文 件 下列 文件 中的 条款 通过 本部 分的 引用 而成 为本 部分 的条 款。凡 是 注日 期的 引用 文件 ，其 随 后所 有 的修改 单 （ 不 包括 勘误 的内 容） 或 修 订版 均不 适用 于本 部分 ， 然 而 ， 鼓 励 根据 本部 分达 成协 议的 各方 研 究是否 可使 用这
4、些文 件的 最新 版本 。凡 是不 注日 期的 引用 文件 ，其 最新 版本 适用 于本 部分 。 GB/T6682分析 实验 室用 水规 格和 试验 方法3原理 样品中残留的磺胺类药物依次用乙腈和二氯甲烷提取，正己烷去脂，液相色谱 -串 联 质 谱 法 测 定 ，外标 法定 量。 4试剂 和材 料4.1水： GB/T6682规定 的一 级水 。4.2甲醇 ：色 谱纯 。4.3乙腈 ：色 谱纯 。4.4二氯 甲烷 ：分 析纯 。4.5正己 烷： 分析 纯。4.6无水 硫酸 钠： 分析 纯。 于 650 灼烧 4h， 冷却 后 ， 贮存 于具 玻璃 塞的 干燥 玻璃 容器 内备 用 。4.7乙酸
5、 ：优 级纯 。4.80.2%乙酸 水溶 液： 移取 0.2m L乙酸 ，加 水定 容至 1L。4.9样品 定容 液： 移取 700m L0.2%乙酸 水溶 液（ 4.8）， 用甲 醇定 容至 1L。4.10磺胺 甲基 嘧啶 、 磺 胺 吡啶 、 磺 胺 甲氧 哒嗪 、 磺 胺 对甲 氧嘧 啶、 磺 胺氯 哒嗪 、 磺 胺 甲基 异噁 唑、 磺胺二 甲异 噁唑 、磺 胺甲 噻唑 、磺 胺嘧 啶、 磺胺 噻唑 、磺 胺 6甲 氧嘧 啶、 磺胺 邻二 甲氧 嘧啶 、磺 胺二甲嘧 啶、 磺 胺苯 吡唑 、 磺 胺 间二 甲氧 嘧啶 、 磺 胺 胍、 磺 胺甲 噻二 唑、 磺 胺、 磺 胺喹 噁啉 、
6、 磺 胺 氯哒 酮 标准物 质： 纯度 95%。4.11标准储备溶液： 100m g/L。准确称取适量的每种磺胺标准物质，用甲醇配成 100m g/L的标准贮备溶 液。 -18 保存 ，保 存期 为三 个月 。5仪器 和设 备5.1液相 色谱 串联 四极 杆质 谱仪 ，配 有电 喷雾 （ ESI）离 子源 。5.2分析 天平 ：感量 0.0001g和 0.01g。DB33/T746 200925.3均质 器。5.4涡旋 混合 器5.5振荡 器。5.6高速 离心 机， 5000r/m in。5.7氮气 吹干 仪。6测定 步骤6.1提取称取 5g均质 试样（ 精确到 0.01g）和 10g经灼 烧
7、无 水硫 酸钠 ，于 具 盖的 聚丙 烯离 心管 中，加入 25m L乙腈 ，用 均质 器于 18000r/m in下均质 1m in， 5000r/m in离心 5m in，吸 取 上清 液转至 50m L容量 瓶 中 。用 25m L二氯 甲烷 重复 提取 一次 ， 振荡 20m in， 5000r/m in离心 5m in， 合 并 上清 液并 用二 氯甲 烷定 容到 50m 。取 10m L提取 液室 温下 氮气 吹干 。用 1m L样品 定容 液（ 4.9）涡 旋溶 解残 渣。6.2净化上述残渣溶解液用 2m L正己烷脱脂，离心 2m in，去除上层正己烷层后，重复脱脂一次。取下层溶
8、液过 0.2 m有机 系 滤膜 供液 相色 谱 -串联 质谱 测定 。6.3测定6.3.1色谱 参考 条件6.3.1.1色谱 柱： C8柱 ， 150m m 4.6m m （ i.d.） ， 5m ，或 相当 者 。6.3.1.2柱温 ： 30 。6.3.1.3进样 量： 20L。6.3.1.4流动 相见表 1。6.3.1.5流速 ： 200L/m in。 表 1液相 色谱 梯度 洗脱 条件6.3.2质谱 条件6.3.2.1离子 源： 电喷 雾离 子源 （ ESI）。6.3.2.2扫描 方式 ：正 离子 扫描 。6.3.2.3检测 方式 ：多 反应 监测 （ MR）。6.3.2.4雾化气（ N
9、EB）、气帘气（ CU）、辅助加热气（ AUX）、碰撞气（ CAD） 均 为 高 纯 氮 气 ；使用 前应 调节 各气 体流 量以 使质 谱灵 敏度 达到 检测 要求 。6.3.2.5喷雾 电压 （ IS）、 去集 簇电 压（ DP）、 碰撞 能（ CE）等 电压 值应 优化 至最 优灵 敏度 。6.3.2.6Q1， Q3均为 单位 分辨 率（ UNIT）。6.3.2.7定性 离子 对、 定量 离子 对见表 2。时间（ min） 甲醇 0.2%乙酸水溶液0 30% 70%10 30 7015 80% 20%20 80 2021 30% 70%30 30 70DB33/T746 20093表 2
10、磺胺 类药 物的 监测 离子 对及 部分 优化 质谱 条件6.3.3标准 曲线 的绘 制取空 白样 品按 照 6.1和 6.2处理 。 用 所 得的 样品 溶液 将磺 胺标 准储 备溶 液 （ 4.11） 逐 级 稀释 得到 的 浓度为 0.005m g/L、 0.01m g/L、 0.02m g/L、 0.05m g/L、 0.2m g/L的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以定 量 离子 峰面 积 为纵 坐标 ， 以 浓 度为 横坐 标作 图， 得 到 标准 曲线 回归 方程 。 20种磺 胺的 样品 二级 质 谱图参 见附 录 A中图 A.1，基 质匹 配加 标样 品的 多反 应监 测（
11、 MR）色 谱图 参见 附录 A中图 A.2。名称 定性离子对 m/z 定量离子对 m/z DP（ V） CE（ V）磺胺甲氧哒嗪 281.0/156.3./8. 281.0/156.3 40 2640 37磺胺对甲氧嘧啶 281.0/156.3./2.4 281.0/156.3 60 2560 25磺胺氯哒嗪 285.1/56.3./08. 285.1/56.3 50 2350 35磺胺喹噁啉 301.3/156.3./92.0 301.3/156.3 45 2445 45磺胺吡啶 250.2/156.3./84. 250.2/156.3 0 250 25磺胺二甲基嘧啶 265.3/156.
12、3./72. 265.3/156.3 50 2350 2磺胺甲噻二唑 271.3/156.2./08.3 271.3/156.2 50 2050 34磺胺二甲氧嘧啶 31.2/156.3./08. 31.2/156.3 50 3170 42磺胺 -6甲氧嘧啶 281.0/156.3./2.4 281.0/156.3 5 2660 26磺胺醋酰 215.4/156.2./08.3 215.4/156.2 40 1845 18磺胺二甲嘧啶 279.0/186.3./5. 279.0/186.3 255 27磺胺噻唑 256.0/156.3./8. 256.0/156.3 60 25 3磺胺胍 21
13、5.2/156.3./08. 215.2/156.3 4 2145 3磺胺邻二甲氧嘧啶 31./156.3./08. 31./156.3 265 35磺胺硝苯 36.0/156.2./294.3 36.0/156.2 52 1952 19磺胺二甲异嘧啶 279.2/14.1./86.3 279.2/14.1 48 340 25磺胺苯吡唑 315.2/156.3./0.4 315.2/156.3 5 305 3磺胺甲基异噁唑 254.1/56.3./47.2 254.1/56.3 5 235 2磺胺嘧啶 251./156.3./8.4 251./156.3 0 350 27磺胺二甲异噁唑 268
14、.3/156.3./.2 268.3/156.3 4 045 23DB33/T746 200946.3.4定量 测定待测 样液 中各 种磺 胺的 响应 值应 在标 准曲 线线 性范 围内 ，超 过 线性 范围 则应 稀释 后再 进样 分析 。 外标法 定量 。 6.3.5定性 判定在相同试验条件下，样品中待测物与同时检测的标准溶液的保留时间偏差在 2.5%之内；且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与标准溶液谱图中定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表3规定 的范 围， 则可 判定 为样 品中 存在 对应 的待 测物 。 表 3定性 确证 时相 对离 子丰 度的 最大 允许 偏差6.4空白
15、试验除不 加试 样外 ，均 按上 述测 定步 骤进 行。7结果 计算 可按 式（ 1）计 算。 计算 结果 需扣 除空 白值 ，结 果保留 3位有 效数 字。(1)mAKvcXs=式中 ： X 试样 中待 测组 分残 留量 ，单 位为 毫克 每千 克（ mg/kg） ；c 标准 工作 溶液 中磺 胺类 药物 浓度 ， 单位 为毫 克每 升（ mg/L） ；A00 试样 溶液 中磺 胺类 药物 的 峰面 积；s 标准 工作 溶液 中磺 胺类 药物 的峰 面积 ；v 试样 定容 体积 ，单 位为 毫升 （ m L）；m 试样 称样 量， 单位 为克 （ g）。K 稀释 倍数 。8方法 检出 限本方
16、 法 20种 磺胺 的 定量 限 均为 5g/kg。9准确 度 在添 加浓 度 5.00g/kg 40.0g/kg浓度 范围 内， 回收 率 在 60% 120%之间 。10允许 差在重 复条 件下 获得 的两 次独 立测 定结 果的 绝对 差值 不得 超过 算术 平均 值的 15%。相对离子丰度（ %） 50 2050 1020 10允许的相对偏差（ ） 20 25 30 50DB33/T746 20095附 录 A(资料 性附 录 )20种磺 胺的 二级 质谱 图图 A.120种磺 胺的 二级 质谱 图DB33/T746 2009620种磺 胺的 多反 应监 测（ MRM）色 谱图图 A.2基质 匹配 加标 20种磺 胺的 样品 多反 应监 测（ MRM）色 谱图_
