1、中华人民共和国铁道行业标准TB/T 2930-1998 铁路生活饮用水中总大肠菌群检测法一半乳糖昔酶滤膜荧光法1998-05-04发布1998-11-01实施中华人民共和国铁道部发布TB/T 2930-1998 前言本标准是依据美国公共卫生协会(APHA)、美国自来水厂协会(AWWA)和美国水污染控制联合会(WPCF)标准化委员会于1992年批准发布的大肠菌群产色底物试验及美国环境保护局批准使用的以MM-ONPG显色反应作为总大肠菌群的自动分析方法原理，经多年研究改进及现场对比试验，在总结同名科研成果的基础上提出的。本标准的附录是标准的附录。本标准由铁道部劳动卫生研究所提出并归口。本标准主要起
2、草单位:南京铁道医学院。本标准参加起草单位:铁道部劳动卫生研究所。本标准主要起草人:林大榕、项龙生、贺冰甜、张辉、汪国雄。本标准委托南京铁道医学院负责解释。1 范围2 引用标准3 定义无芽胞杆菌.每100n 4 基本要求中华人民共和国铁道行业标准铁路生活饮用水中总昔活饮用水标准检验法有的总大肠菌群的数目。TB/ T 2930 - 1998 群进行快速定和结果报告要量监测。矿泉最新版本的可的革兰氏阴性质检验的一般规则、水样的采集和保存以及数据的处理应符合GB 5750规定。4.2 所用计量仪器、设备，使用前应由国家认可的计量部门检定合格。5 原理中华人民共和国铁道部1998-05-04舵准199
3、8-11-01实施四jT2930-1998 水样经微孔滤膜滤过后，将水中细菌截留在滤膜上。其中总大肠菌群具有R一半乳糖昔酶，经3TC、15h培养，能使含吸在衬垫培养基中的产荧光底物4一甲基伞形酣酷-D一半乳糖昔(Ml.GAL)水解，导致荧光物质4一甲基伞形酣释放，在365nm长波紫外灯照射下，滤膜上的菌落呈现出特征性蓝色荧光斑点。6 仪器与设备6.1 高压蒸汽灭菌器。6.2 干热灭菌箱。6.3 恒温箱:36C士lC。6.4 电炉。6.5 冰箱。6.6 撞器。6. 7 抽滤设备。6.B 油膜，孔径。.45阻，直径4.7cmo 6.9 衬垫:纸质或玻璃纤维质，不含抑菌物质，直径4.9cm，两张衬垫
4、可浸吸2.5n榕液。6. 10 培养皿。6.11 元齿慑子。6. 12 天平6.13 长波紫外灯:365nm，功率6W o 7 培鼻基和试剂7.1 MU;AL培养液:成分和制法见附录Ao7.2 脱氯邦tl:称取1.8g硫代硫酸铀溶于100n蒸馆水中，经121C灭菌20min备用。如水样中含氯消毒剂，可按每100n水样加0.1n脱氯剂进行脱氯。7.3 生理盐水:称取8.5g氯化铀溶于1000 n蒸馆水中，经121C灭菌20min备用。8 步骤8.1 准备工作8.1.1 滤膜灭菌将滤膜放入烧杯中，加入蒸馆水，置于沸水浴中煮沸20min灭菌。8.1.2 衬垫灭菌先用高压蒸汽灭菌器经121C灭菌20m
5、in，再置人干热灭菌箱中经105C干燥30mino 8.1.3 培养皿灭菌按常规方法灭菌。8.1.4 衬垫添加MU;AL培养液用无菌操作取两张灭菌衬垫置于灭菌培养皿中，用灭菌吸管吸取2.5n MCGAL培养液滴如到衬垫上，使完全吸透并小心除去过多的培养液。B. 1. 5 滤器灭菌2 T/T 2930-1998 先用干燥棉球或卫生纸擦去滤器上的水份，再用点燃的酒精棉球火焰灭菌。8.2 过滤水样用灭菌慑子夹取灭菌滤膜边缘部分，将其粗糙面向上贴放在灭菌的滤器滤床上，固定好滤嚣，以无菌操作方法将充分混匀的100ml水样注入谑器中，打开滤器间，在负0.5个大气压下抽撞。混浊度及含菌量较高的水样，应作稀释
6、处理。8.3 培养水样滤完后，保持负压约5s，关上撞器阅门，取下滤筒，平衡气压，用灭菌慑子夹取滤膜边缘部分，将滤膜截留细菌面向上，移放到吸收有MUGAL培养液的衬垫上。滤膜要与衬垫完全贴紧，两者之间不得留有气泡，盖好皿盖，放入370C、相对湿度大于90%的恒温箱中培养15h (箱内可放一块湿棉花于一皿盖上保持湿润。注a培养时间不超过24h均不影响结果的判定.804 观察结果将培养后的平皿于暗室打开皿盖，在365nm长波紫外灯照射F观察有无蓝色荧光斑点。凡显蓝色荧光、直径大于菌落、呈现出带有扩散性晕轮特征的斑点，则判定为总大肠菌群，予以计数。9 结果报告按下式计算滤膜上的总大肠菌群荧光斑点数，以
7、每100ml水样中的大肠菌群数报告。Q-F 100 一一一一. o (1) G 式中:Q-每100ml水中总大肠菌群数，cfu/100ml; F一一数出的荧光斑点数，cfu;G-一过滤的水样量，ml.注s如采用稀释水样，结果应乘以稀释倍数。3 A1 成分硫酸锚硫酸辞蛋白陈牛肉膏粉乳糖MUGAL 蒸馆水A2 制法膏粉混合置入7121 C灭菌152A2. 2 将乳糖、十菌10min，趁热与n安舰或小瓶中A3 质量控制菌)为阳性对照。TBjT 2930-1998 附录A(标准的附录)MUGAL培养液的配制方法1 000 n 酸氢接纳、硫酸搓、氯化锅、拧橡酸锅、硫酸锤、硫酸铮、蛋白陈、牛肉水中加热溶解，调整pH值为7.27.4，用脱脂棉过滤到烧瓶内，以均应设标准菌株的阳性对照和阴性对照。中，以115C灭液分装于2.5希氏菌和大肠埃希氏菌以外的一种总大肠菌群细菌(如阴沟肠杆A3. 3 应选用一种非大肠菌群细菌(如变形杆菌)为阴性对照。A3. 4 应将上述三种细菌分别用灭菌生理盐水配制成菌密度为每100n含数十个cfu的模拟水样，按本标准方法操作，观察并记录检测结果。A3.5 阳性对照应在培养1215h即可出现明显阳性结果，阴性对照在培养24h后仍应阴TB/T 2930 -1998 性，且元杂菌干扰。5 臼N。-4
