1、GB/T 13079-1999 前言呻系有害元素，自然界中分布广、毒性大。碑与动物机体组织中酶的琉基结合，使之灭活而产生毒性，尤其以肝、肾、肺等内脏器官最为敏感，因此，碑已成为环境中必检项目之一。我国虽已制定了饲料中总碑的检验标准(GB/T13079-1991)，但随着饲料工业的迅速发展，原标准已不能满足快速检验产品、及时控制产品质量的需求，同时在应用范围和样品前处理上都存在一定的局限性。为此，对GB/T 13079一1991进行了修订。本标准中第一篇银盐法，参考了国际标准ISO2590: 1973(测定碑的通用方法Ag(DDTC)分光光度法)，在技术内容上尽可能与其保持致。特点是将经典的银盐
2、法与简便的快速法融为一体，使其更具有科学性、严谨性和灵活性。本标准对原标准主要有三点改进与补充z增补了快速法，将修改后的银盐法作为标准第一法(仲裁法), 跚氧化物还原光度法为第二法(快速法)。用快速法消解样品时，由原来l7h缩短至1. 5 h，用跚氧化饵作还原剂，使还原反应由90min减少到15min，提高效率近10倍。规定了不同类型样品的前处理方法，使样品预处理技术更加完善、合理。改进后的测碑装置结构合理、使用方便，密封性能好，提高了分析精度。经大量样品分析验证方法精密度小于6%，平均回收率为98.3%。方法检出限为0.04mg/mL。本标准自实施之日起，同时代替GB/T13079-1991
3、。本标准由中华人民共和国农业部和全国饲料工业标准化技术委员会共同提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位国家饲料质量监督检验中心(北京)。本标准主要起草人:王永真、李伟格、王彤、钱防。111 中华人民共和国国家标准GB/T 13079-1999 饲料中总呻的测定代替GB/T13079 -1991 Determination of totaJ arsenic in feeds 1 范围本标准规定了饲料中总碑的测定方法。本标准适用于各种配门配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料及饲料原料。第-篇银盐法(仲裁法)2 原理样品经酸消解或干灰化破坏有机物，使碑呈离子状态存在，经破化僻、氯化
4、亚锡将高价呻还原为三价呻，然后被钵粒和酸产生的新生态氢还原为碑化氢。在密闭装置中，被二乙氨基二硫代甲酸银CAgDDTCl的三氯甲烧溶液吸收.形成黄色或棕红色银溶胶，其颜色深浅与呻含量成正比，用分光光度计比色测定。形成胶体银的反应如下:AsH，十6AgCDDTCl= 6Ag+ 3H CDDTC) + As (DDTC), 3试剂除特殊规定外，所用试剂均为分析纯，水系蒸馆水或相应纯度的水。3. 1 硝酸。3. 2 硫酸。3. 3 高氯酸。3. 4 盐酸。3. 5 抗坏血酸。3. 6 元碑铮粒，粒径3.0mm士0.2mm。3. 7 混合酸溶液(A),HNO, H2SO, : HCIO, =23 :
5、3: 4. 3. 8 乙酸铅棉花:将医用脱脂棉在乙酸铅溶液(100g/L)中浸泡约1h.压除多余溶液，自然晾干，或在日OClOOC烘干，保存于密闭瓶中。3. 9 二乙氨基二硫代甲酸银(Ag-DDTC)一三乙胶三氯甲烧吸收溶液，2.5g/L。称取2.5 g (精确j1JO. 000 2 g) Ag-DDTC于干燥的烧杯中，加适量三氯甲烧待完全溶解后，转入J 000 mL容量瓶中，加人20mL三乙胶.用三氯甲烧定容，于棕色瓶中存放在冷暗处。若有沉淀应过滤后使用。3. 10 碑标准储备潜液1.0 mg/mL. 精确称取O.660 0 g三氧化二呻(110C.干燥2h).加5mL氮氧化纳溶液(200g
6、/U使之溶解，然后加入25mL硫酸溶液(60mL/U中和，定容至500mL.此溶液每毫升含1.00 mg碑，于塑料瓶中冷贮。国家质量技术监督局1999-08-10批准2000- 02-01发布lltJ GB/T 13079-1999 3. 11 碑标准工作溶液，1. 0周/mLo准确吸取5.00mL伸标准储备液(3.10)于100mL容量瓶中，加水定容，此溶液含碑50g/mLo准确吸取50g/mL碑标准溶液2.00mL，于100mL容量瓶中，加1mL盐酸，加水定容，摇匀，此熔液每毫升相当于1.0吨碎。3. 12 硫酸溶液，60mL/L。吸取6.0mL硫酸，缓慢加入约80mL水中，冷却后用水稀释
7、至100mL , 3. 13 盐酸溶液，c(HC) = 1 mol/L 量取84.0mL盐酸(3.4)，倒人适量水中，用水稀释JlJ1 L , 3. 14 盐酸溶液cCHC) = 3 mol/L 将1份盐酸与3份水混合。3. 15 硝酸续溶液，150g/L。称取30g硝酸楼Mg(NO，)2 6H20溶于水中，并稀稀至200mL。3. 16 模化饵溶液，150g/L。称取75g破化御溶于水中，定容至500mL，贮存于棕色瓶中。3.17 酸性氯化亚锡溶液，400日/L。称取20g氯化亚锡(SnCI2 2H20)溶于50mL盐酸中，加入数颗金属锡粒，可用一周。3. 18 氢氧化纳溶液200g/L。3
8、. 19 乙酸铅溶液，200g/L。4 设备4. 1 碑化氢发生及吸收装置(见图1)。4. 1. 1 碑化氢发生器，100mL带30mL、40mL、50mL刻度线和侧管的锥形瓶。4. 1. 2 导气管g管径#为8.0 mm8. 5 mm;尖端孔#为2.5mm,._, 3. 0 mm Q 4. 1. 3 吸收瓶，下部带5mL刻度线。4.2 分光光度计2波长范围360nm800 nmo 4. 3 分析天平s感量O.000 2 g 0 4.4 可调温电炉.六联和二联各一个。4. 5 玻璃器皿z凯氏瓶，各种刻度吸量管，容量瓶和高型烧杯。4.6 瓷增塌，30mL。4. 7 高温炉z温控0C950C。5
9、分析步骤5. 1 样品制备选择有代表性样品1.0 kg，用四分法缩减至250g，过0.42mm孔筛，存于密封瓶中，待用。5. 1. 1 混合酸消解法配合饲料及植物性单一饲料，宜采用硝酸硫酸高氯酸消解法。称取试样3g4日(精确到0.001 日)，置于250mL凯氏瓶中，加水少许湿润试样，加30mL 混合酸(A)，放置4h以上或过夜，置电炉上从室温开始消解。待棕色气体消失后，提高消解温度，至冒白烟(SO，)数分钟(务必赶尽硝酸)，此时溶液应清亮无色或谈黄色，瓶内溶液体积近似硫酸用量.残渣为白色。若瓶内榕液呈棕色，冷却后添加适量硝酸和高氯酸，直到消解完全。冷却，加10mL盐酸溶液(3.13)并煮沸，
10、稍冷，转移到50mL容量瓶中，洗涤凯氏瓶35次，洗液并入容量瓶中，然后定容，摇匀，待测。试样消解液含碑小于10E时，可直接转移到碑化氢发生器中，补加7mL盐酸，加水使瓶内溶液体积为4mL.从加腆化御起以下按5.3操作步骤进行。111 GB/T 13079-1999 单位:rnm155士3白川ZhNUEZ NNEE 提E;12+0.5 N +1 19/26 5mL 的OHL m 000 543 ll呻化氢发生器，2导气管，3一吸收瓶;4乙酸铅棉花图1呻化氢发生及吸收装置5.1.2 盐酸洛样法磷酸盐、碳酸盐和微量元素添加剂不宜加硫酸，应用盐酸溶样。称取试样1g-3 g(精确到O. 000 2 g)
11、于100mL高型烧杯中，加水少许湿润试样，慢慢滴加10mL盐酸溶液(3.14)，待激烈反应过后，再缓慢加入8mL盐酸，用水稀释至约30mL煮沸。转移到50mL容量瓶中，洗涤烧杯3-4次.洗液并入容量瓶中，定容，摇匀，待测。试样消解液含碑小于10E时，可直接在发生器中溶样，用水稀释到40mL并煮沸，从加碗化御起以下按5.3操作步骤进行。另外，少数矿物质饲料富含硫，严重干扰碎的测定，可用盐酸溶解样品后(5.1. 2) ，往高型杯中加入5 mL乙酸铅溶液(3.19)并煮沸.静置20min，形成的硫化铅沉淀过滤除之.滤液定容至50mL，以下按5. 3规定步骤进行。5. 1. 3 干灰化法预i昆料、浓缩
12、饲料(配合饲料可选择干灰化法。称取试样2g3g(精确至O.000 2 g)于30mL资增辆中，低温炭化至元烟后，加入5mL硝酸续溶液(3.15)，混匀，于低温或沸水浴中蒸干，然后转入高温炉子550C恒温灰化3.5h-4ho取出冷却.缓慢加入10mL盐酸溶液(3.14)，待激烈反应过后，煮沸并转移到50mL容量瓶中.洗涤柑蝙3-5次，洗112 GB/T 13079-1999 液并人容量瓶中，定容，娼匀，待测。所称试样含碑小f10自时，可直接转移到发生器中，补加8mL盐酸.加水至40mL左右，加人1日抗坏血酸溶解后，按5.3规定步骤操作。同时于相同条件下，做试J空白试验。5. 2 标准曲线绘制准确
13、吸取碑标准工作溶液(.。g/mL)O.00 ,1. 00 , 2. 00 , 4. 00 , 6. 00 , 8. 00 , 10. 00 mL于发生瓶中，加10mL盐酸，加水稀释至40mL，从加入硕化梆起，以下按5.3规定步骤操作，测其吸光度，求出回归方程各参数或绘制出标准曲线。且更换铸粒批号或者新配制Ag-DDTC吸收液、模化饵溶液和氯化亚锡溶液，均应重新绘制标准曲线。5.3 还原反应与比色测定从5.1. 1、5.1. 2、5.1. 3处理好的待测液中，准确吸取适量溶液(含碑量应注1.0问)于呻化氧发生器中，补加盐酸空总量为10mL，并用水稀释i1J40 mL，使榕液中盐酸浓度为3mol/
14、L，然后向试样溶液、试J空白溶液，标准系列溶液各发生器中，加入2mL殃化御溶液(50g/L摇匀，加入1mL氯化亚锡溶液(3.17)，摇匀，静置15mino 准确吸取5.00mL Ag-DDTC吸收液于吸收瓶中，连接好发生吸收装置(勿漏气，导管塞有膨松的乙酸铅棉花)。从发生器锢管迅速加入4g无碑铸粒，反应45，tnin，当室温低于15C时，反应延长至1h , 反应中轻摇发生瓶2次反应结束后，取下吸收瓶，用三氯甲烧定容至5mL，摇匀(避光时溶液颜色稳定2 h)。以原吸收液(3.9)为参比，在520nm处，用1cm比色池测定。注，Ag-DDTC吸收液最有机溶剂，凡与之接触器皿务必干燥。5 分析结果的
15、计算与表述6. 1 每千克饲料中碑含量按式(1)计算zA， x V , X 1 000 m X V , X 1 000 ) l ( 式中每千克饲料中含碑量，mg;V，一-试样消解液总体积，mL;V，-分取试液体积，rIIL;A，一-测试液中含碑量，pm 试样质量，g。若样品中碑含量很高.可用式(2)计算-A2 X V, X V3 X 1 000 J = m X V , X V , X 1 000 .( 2 ) 式中，W一川每千克饲料中含碑量，mg;V , 试样消解液总体积，mL;V. 分取试液体积，mLV , 分取液再定容体积，rnL;飞一测定时分取矶的体积，mLA, 测定用试液中含碑量，g;
16、m-试样质量，臣。6, 2 结果表示每个样品应做双样.以其算术平均值为分析结果，并表示至小数点后两位。当每千克试样中含硝量三二l，0 1g l.结果取三位有效数字。1 13 GB/T 13079-1999 7 允许差分析结果的相对偏差，应不大于表1所列允许差。表1分析结果允许差每千克饲料中吉碑量.mg允许相对偏差.%:0:;:1. 00 20% 一寸1. 00-5. 00 运10%5.00-10.00 运5%二三10.00三三3%第二篇翻氢化物还原光度法(快速法)8原理样品经酸消解或午灰化破坏有机物，使碑呈离子状态存在，在酒石酸环境中，跚氢化饵将呻离于还原成氢化碑(AsH，)气体。在密闭装置中
17、，被Ag-DDTC三氯甲烧溶液吸收，形成黄色或棕红色银溶胶，其颜色深浅与碑含量成正比，用分光光度计比色测定。9 试剂除下列试剂外，其他试剂同第3章。9. 1 混合酸溶液(B),HNO, H,50, HC10, =20 , 2 3。9. 2 甲基橙水溶液，1g/L;pH 3. O(红)4.4(橙)。9. 3 氨水熔液，1 1。9.4 酒石酸溶液，200g/L , 称取100g酒石酸加水适量，稍加热搭解，冷却后定容500mL。9. 5 棚氢化饵片，KBH川NaCl=1 5 将棚氢化梆和氯化销按质量比1 5比例混匀，于90C100C于燥2h.压力为2kPa条件下，压制成直径10mm，厚5mm，每片质
18、量为1.0 g :c O. 1 g，压制及贮存中应防潮湿。10 设备同第4章11 分析步骤11. 1 样品制备选择有代表性样品1.0 kg.用四分法缩减至250g.过0.42mm孔筛，存于密封瓶中，待用。11.1.1 混合酸消解法配、混合饲料及植物性单一饲料，宜采用兰酸消解法。称取试样2.0g3.0g(精确到O.000 2剖，于250mL凯氏瓶中，加水少许湿润试样，加25mL混合酸(B).置电炉上从室温开始消解，待样液煮沸后，关闭电炉10mn_lS min，继续加热消解，直至冒白烟(50，)数分钟，此时溶液应清亮无色或淡黄色，体积近似硫酸用量，残渣为白色。稍冷，转移到100mL碑化氢发生器中，
19、洗涤凯氏瓶34次.洗液并入发生器中，使瓶内溶液体积为30mL左右。以下按11.2、11.3操作步骤进行。注:消解时赶尽硝酸.否则结果偏低。11.1.2 盐酸溶样法磷酸盐、碳酸盐和微量元素添加剂不宜加硫酸，应用盐酸溶样。称取试样0.5g2.0日(精确到0.0002gl于发生器中，慢慢滴加5mL盐酸溶液(3.14).待激烈反应过后，再缓慢加入3mL4 mL盐1 1 1 GB!T 13079 1999 酸，用水稀择至约30mL煮沸，试样溶解后按1)，2、1)，3操作步骤进行。11. 1. 3 干灰化法预混料、浓缩饲料(配合饲料)可选择干灰化法。称取试样)Og2.0g(精确至O.000 2 g)于30
20、mL瓷站涡中，低温炭化完全后转入高温炉中，于550 C恒温灰化3h。取出冷却，慢慢加入10mL盐酸溶液(3.14)，待激烈反应过后煮沸并转移到碑化氢发生器中，加水至30mL左右，加入1g抗坏血酸(3.5)溶解后.以下按1)，2、11.3规定步骤操作。同时于相同条件下，做试剂空白试验。11. 2 氨水(1, 1)调溶液pH值发生器中加入2滴甲基橙指示剂，用氨水(1，1)调pH值至橙黄色，再滴加盐酸溶液(3.13)至刚好变红色。加入6.0mL酒石酸溶液(9.4) ，用水稀释至50mL。11. 3 还原反应与比色测定准确吸取5.00mL吸收液于吸收瓶中，连接好发生吸收装置(勿漏气，导管塞有膨松的乙酸铅棉花)，从发生器侧管迅速加入唰氢化佛一片，立即盖紧塞子，反应完毕再加第三片。反应时轻轻摇动发生器23次，待反应结束后，以原吸收液(3.的为参比，在520nm处，用1cm比色池测定。注还原反应时，应防止有毒碑化氧气体泄嘱。12 标准曲线绘制准确吸取碑标准工作榕液(1.0g!mL)O.00 ,). 00 , 2. 00 , 4. 00 , 6. 00 , 8. 00 mL于发生瓶中，加水至44 mL，加入6mL酒石酸溶液(9.4)，以下按1l.3规定步骤操作，测其吸光度，求出回归方程各参数或绘制出标准曲线。13 分析结果的计算与亵述同第6章14 允许差同第7章1 Li
