1、GB 1308591 1 主题内容与适用范围 本标准规定了饲料中亚硝酸盐的测定方法。 本标准适用于饲料原料(鱼粉)、配合饲料(包括混合饲料)中亚硝酸盐的测定。 2 原理 样品在微碱性条件下除去蛋白质,在酸性条件下试样中的亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应,生成重氮化合物,再与N-1-萘乙二胺盐酸盐偶合形成红色物质,进行比色测定。 3 试剂和溶液 本标准所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或相应纯度的水。 3.1 四硼酸钠饱和溶液:称取25g四硼酸钠(Na2B4O710H2O,GB 632),溶于500mL温水中,冷却后备用。 3.2 10.6亚铁氰化钾溶液:称取53g亚铁氰化钾K4Fe(CN)63H2O ,
2、GB 1273,溶于水,加水稀释至500mL。 3.3 22乙酸锌溶液:称取110g乙酸锌Zn(CH3COO)22H2O,HG 31098,溶于适量水和15mL冰乙酸(GB 676)中,加水稀释至500mL。 3.4 0.5对氨基苯磺酸溶液:称取0.5g对氨基苯磺酸(NH2C6H4SO3HH2O,HG 3992),溶于10盐酸中,边加边搅,再加10盐酸稀释至100mL,贮于暗棕色试剂瓶中,密闭保存,一周内有效。 3.5 0.1N-1-萘乙二胺盐酸盐溶液:称取0.1gN-1-萘乙二胺盐酸盐(C10H7NHCH2NH22HCl),用少量水研磨溶解,加水稀释至100mL,贮于暗棕色试剂瓶中密闭保存,
3、一周内有效。 3.6 5mol/L盐酸溶液:量取445mL盐酸(GB 622),加水稀释至1 000mL。 3.7 亚硝酸钠标准贮备液:称取经1155烘至恒重的亚硝酸钠(GB 633)0.300 0g,用水溶解,移入500mL容量瓶中,加水稀释至刻度,此溶液每毫升相当于400 g亚硝酸根离子。 3.8 亚硝酸钠标准工作液:吸取5.00mL亚硝酸钠标准贮备液(3.7),置于200mL容量瓶中,加水稀释至刻度,此溶液每毫升相当于10 g亚硝酸根离子。 4 仪器、设备 4.1 分光光度计:有10mm比色池,可在538nm处测量吸光度。 4.2 分析天平:感量0.000 1g。 4.3 恒温水浴锅。
4、4.4 实验室用样品粉碎机或研钵。 页码,1/3GB 13085912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130850A.htm4.5 容量瓶:50(棕色)、100、150、500mL。 4.6 烧杯:100、200、500mL。 4.7 量筒:100、200、1 000mL。 4.8 长颈漏斗:直径7590mm。 4.9 吸量管:1、2、5mL。 4.10 称液管:5、10、15、20mL。 5 试样制备 采集具有代表性的饲料样品,至少2kg,四分法缩分至约250g,磨碎,过1mm 孔筛,混匀,装入密闭容器,防止试样变质,低温保存备用。 6 测定步骤
5、6.1 试液制备 称取约5g试样,精确到0.001g,置于200mL烧杯(4.6)中,加约70mL温水(60 5)和5mL四硼酸 钠饱和溶液(3.1),在水浴(4.3)上加热15min(855),取出,稍凉,依次加入2mL10.6亚铁氰 化钾溶液(3.2)、2mL22乙酸锌溶液(3.3),每一步须充分搅拌,将烧杯内溶液全部转移至150mL容 量瓶(4.5)中,用水洗涤烧杯数次,并入容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,静置澄清,用滤纸过滤, 滤液为试液备用。 6.2 标准曲线绘制 吸取0、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00mL亚硝酸钠标准工作液(3.8),分别置于50mL柠色容量 瓶(
6、4.5)中,加水约30mL,依次加入2mL0.5对氨基苯磺酸溶液(3.4)、2mL盐酸溶液(3.6),混匀, 在闭光处放置35min,加入2mL0.1N-1- 萘乙二胺盐酸盐溶液(3.5),加水稀释至刻度,混匀,在闭 光处放置15min,以0mL亚硝酸钠标准工作液(3.8)为参比,用10mm比色池,在波长538nm处,用分光光 度计(4.1)测其他各溶液的吸光度,以吸光度为纵坐标,各溶液中所含亚硝酸根离子质量为横坐标,绘 制标准曲线或计算回归方程。 6.3 测定 准确吸取试液约30mL,置于50mL棕色容量瓶(4.5)中,从“依次加入2mL0.5对氨基苯磺酸溶 液(3.4)、2mL盐酸溶液(3
7、.6)”起,按6.2的方法显色和测量试液的吸光度。 7 测定结果 页码,2/3GB 13085912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130850A.htm7.1 计算公式 7.2 结果表示 每个试样取2个平行样进行测定,以其算术平均值为结果。 结果表示到0.1mg/kg。 7.3 重复性 同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定,所得结果之间的差值; 在亚硝酸盐含量小于或等于1mg/kg时,不得超过平均值的50; 在亚硝酸盐含量大于1mg/kg时,不得超过平均值的20。 X=m1150/( V m)1.5=( m1/Vm)225 式中: X试样中亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)含量,mg/kg;V试样测定时吸取试液的体积,mL;m1VmL试液中所含亚硝酸根离子质量, g(由标准曲线读得或由回归方程求出);m试样质量,g;1.5亚硝酸钠质量和亚硝酸根离子质量的比值。页码,3/3GB 13085912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130850A.htm