1、GB 1309291 1 主题内容与适用范围 本标准规定了饲料中霉菌的检验方法。 本标准适用于饲料中霉菌的检验。 2 原理 根据霉菌生理特性，选择适宜于霉菌生长而不适宜于细菌生长的培养基，采用平皿计数方法，测定霉菌数。 3 设备及材料 3.1 天平：感量1g，最大秤量1 000g。 3.2 显微镜：1 500。 3.3 温箱：25281。 3.4 冰箱：普通冰箱。 3.5 高压灭菌器：2.5kg。 3.6 干燥箱：502501。 3.7 水浴锅：45771。 3.8 振荡器：往复式。 3.9 微型混合器：2 900rmin。 3.10 电炉。 3.11 酒精灯。 3.12 接种棒：镍铬丝。 3
2、.13 温度计：1001。 3.14 载玻片。 3.15 盖玻片。 3.16 乳钵。 3.17 试管架。 3.18 玻璃三角瓶：250，500mL。 3.19 试管：15150mm。 页码，1/5GB 13092912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130920A.htm3.20 平皿：直径9cm。 3.21 吸管：1，10mL。 3.22 玻珠：直径5mm。 3.23 广口瓶：100，500mL。 3.24 金属勺、刀等。 3.25 橡皮乳头。 4 培养基和稀释液 4.1 高盐察氏培养基。 4.2 稀释液。 4.3 试验室常用消毒药品。 5 检验程
3、序 霉菌检验程序如下： 页码，2/5GB 13092912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130920A.htm 6 操作步骤 6.1 采样 采样时必须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或广口瓶，金属勺和刀，在卫生学调查基础上，采取有代表性的样品，样品采集后应尽快检验，否则应将样品放在低温干燥处。 根据饲料仓库、饲料垛的大小和类型，分层定点采样，一般可分三层五点或分层随机采样，不同点的样品，充分混合后，取500g左右送检，小量存贮的饲料可使用金属小勺采取上、中、下各部位的样品混合。 海运进口饲料采样：
4、每一船仓采取表层、上层、中层及下层四个样品，每层从五点取样混合，如船仓盛饲料超过10 000t，则应加采一个样品。必要时采取有疑问的样品送检。 6.2 以无菌操作称取样品25g（或25mL），放入含有225mL灭菌稀释液的玻塞三角瓶中，置振荡器上，振摇30min，即为110的稀释液。 6.3 用灭菌吸管吸取110稀释液10mL，注入带玻璃珠的试管中，置微型混合器上混合3min，或注入试管中，另用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子分散开。 页码，3/5GB 13092912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130920A.htm6.4
5、取1mL110稀释液，注入含有9mL灭菌稀释液试管中，另换一支吸管吹吸5次，此液为1100稀释液。 6.5 按上述操作顺序作10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1mL灭菌吸管，根据对样品污染情况的估计，选择三个合适稀释度，分别在作10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度作两个平皿，然后将凉至45左右的高盐察氏培养基注入平皿中，充分混合，待琼脂凝固后，倒置于25281温箱中，培养3d后开始观察，应培养观察一周。 6.6 计算方法 通常选择菌落数在30100个之间的平皿进行计数，同稀释度的2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克（或每毫升）检样中所含霉菌数。 6.7 报告 每
6、克（或每毫升）饲料中含霉菌数以个g（个mL）表示。 附 录 A 培养基和稀释液制备 （补充件） 除特殊规定外，本标准所用化学试剂为分析纯或化学纯；生物制剂为细菌培养用；水为蒸馏水。 A1 高盐察氏培养基 A1.1 成分 A1.2 制法 加热溶解，分装后，115高压灭菌30min。必要时，可酌量增加琼脂。 A2 稀释液 A2.1 成分 硝酸钠（GB 636） 2g磷酸二氢钾（GB 1274） 1g硫酸镁（MgSO47H2O，GB 671）0.5g氯化钾（GB 646） 0.5g硫酸亚铁（GB 664） 0.01g氯化钠（GB 1266） 60g蔗糖（HG 31001） 30g琼脂 20g蒸馏水 1 000mL氯化钠（GB 1266）页码，4/5GB 13092912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130920A.htmA2.2 制法 加热溶解，分装后，121高压灭菌30min。 蒸馏水 页码，5/5GB 13092912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130920A.htm
