1、中华人民共和国国家标准环境中有机污染物遗传毒性检测的样品前处理规范发布实施国家环境保护局发布中华人民共和国国家标准环境中有机污染物遗传毒性检测的样品前处理规范国家环境保护局批准实施本规范规定了环境中有机污染物遗传毒性检测时样品前处理的技术要求本规范分五篇第一篇大气可吸入颗粒物样品前处理第二篇地面水及废水样品前处理第三篇非水液态废弃物样品前处理第四篇土壤及沉积物样品前处理第五篇固体废弃物样品前处理规范所给定义仅限定在本规范内使用不具普遍性本规范不对样品前处理的质量控制及操作安全性作全面阐述仅对特定问题给以说明其他问题应遵从合格实验室准则的有关原则本规范的质量控制原则皆以遗传毒性检测系统本身正常为
2、前提本规范不另提供记录表格样品前处理过程的记录应遵从常规分析测试原则第一篇大气可吸入颗粒物样品前处理适用范围本规范适用于大气可吸入颗粒物中非挥发性有机物不适用于大气可吸入颗粒物的气态及半气态有机物引用标准大气飘尘浓度测定方法实验室用水规格和实验方法定义可吸入颗粒物能长期悬浮在空气中空气动力学当量直径的能进入人体呼吸道的颗粒物仪器设备采样系统符合的要求超细玻璃纤维滤膜过滤效率不低于索氏提取器容量超声波清洗器功率分液漏斗旋转蒸发器浓缩器钢瓶减压阀高纯氮气一般实验室器具及玻璃器皿为避免其他有机物质的干扰所有玻璃器皿及直接接触样品的器具均需洗净并经纯水及纯有机溶剂冲洗试剂纯水符合实验室用水规格中一级水
3、标准的水即电导率吸光度光程二氧化硅含量可用去离子水加少量经全玻璃器皿重蒸馏制得溶剂等级不得低于分析纯且皆应在玻璃容器中重蒸馏后方能使用二氯甲烷二甲基亚砜氢氧化钠盐酸无水硫酸钠样品采集按的方法采集一定量的大气可吸入颗粒物记录流量及采样时间采样前将滤膜于灼烧半小时后称重采样后将对折的滤膜用硫酸纸包好装入黑色纸袋于条件下运输并于采样前的称重条件下平衡至少后称重称重后的滤膜装入塑料袋于以下避光保存采样后应尽快进行样品制备采样时间不应超过在此期间如不能采集到足量的尘可在同一采样地同时设置两个或更多的采样器将所得尘样合并为一个样品样品制备有机物分离提取可采用索氏提取法超声提取法必要时进行不同有机组分的提取
4、索氏提取将样品滤膜对折成卷状放入提取器分别用二氯甲烷在溶剂沸点条件下提取次每次每小时回流次将两次的提取液冷却至室温后合并用孔径的微孔全玻璃砂芯漏斗将提取液滤至一圆底烧瓶中超声提取将滤膜剪成小片放入瓶塞配有聚四氟乙烯衬垫的玻璃试管中在超声波清洗器中用二氯甲烷提取次每次用孔径的微孔全玻璃砂芯漏斗将提取液滤至一圆底烧瓶中不同有机组分的提取将索氏提取或超声提取得到的提取滤液放入分液漏斗用盐酸提取次每次用量约提取液为碱性组分将中次提取所得的水相合并用氢氧化钠将调至用二氯甲烷提取次每次用量约将次提取的有机相合并并使其通过无水硫酸钠除去水分此为碱性组分中性组分将中次提取所得的有机相合并用氢氧化钠提取次每次用
5、量约提取液为将次提取的有机相合并并使其通过无水硫酸钠除去水分此为中性组分酸性组分将中次提取所得的水相合并用盐酸将调至用二氯甲烷提取次每次用量约合并次提取的有机相使其通过无水硫酸钠除去水分此为酸性组分注意在提取过程中如水相有机相间的乳化层超过有机相的应使用离心等物理学方法进行分离提取液浓缩所得提取液及所得各有机组分提取液体积在以下时可用浓缩器浓缩如提取液体积大于使用旋转蒸发器将提取液蒸发至近用浓缩器浓缩留出浓缩后的提取液以备重量分析及化学分析另外继续用浓缩器浓缩至溶剂置换于水浴条件下用平稳氮气流将浓缩过的提取液吹干加入适量左右或遗传毒性检测所需的其他溶剂使萃取物溶解并稀释至适当浓度以备进行遗传毒
6、理学检测提取液应于避光保并应在提取之日起的周内进行检测样品量计算结果的表示采气总量用表示可吸入颗粒物采集总量用表示提取有机物的量用表示质量控制设置现场采样及溶剂对照即在采样期间将空白滤膜放置在现场注意防止污染除不参与采样外空白滤膜需经历从膜准备到遗传毒性检测的全过程如此对照的遗传毒性检测呈阳性反应应分别检查采样过程及制备系统找出原因重复对照试验至合格为止设置阳性对照即将在所要进行的遗传毒性检测中肯定会产生阳性结果的对照物滴加在空白滤膜上使其经历样品制备的全过程如遗传毒理学检测结果为阴性应检查制备系统找出原因重复阳性对照试验至合格为止安全性由于对样品制备中涉及的毒性与致癌性不完全清楚应将其按有潜
7、在健康危害的物质对待操作者应保持最低限度的接触第二篇地面水及废水样品前处理适用范围本规范适用于地面水及废水中的非挥发性有机物不适于挥发性有机物定义地面水本规范中包括江水河水湖水池塘水等废水本规范中包括工业废水及生活污水等非水液相本规范中为与水介质分层主成分不是水的液相沉积固相本规范中为从静置的废水样中分离出来的固相或半固相仪器设备采样瓶瓶盖具聚四氟乙烯衬垫的棕色螺口大口玻璃瓶或在样品无腐蚀性条件下使用具铝箔外衬的橡皮塞分液漏斗贮水器具下口的玻璃或搪瓷容器玻璃树脂柱不低于高柱直径与柱长比为之间输液泵分别与相同试剂纯水与相同氢氧化钠硫酸氢氧化钠盐酸溶剂等级不得低于分析纯且皆应在玻璃容器中重蒸馏后方
8、能使用二氯甲烷甲醇丙酮己烷二甲基亚砜树脂或等效的大孔树脂树脂应经纯水及甲醇漂洗后在索氏提取器中分别用甲醇二氯甲烷己烷丙酮提取去除有机物净化后的树脂浸于甲醇中置冰箱冷藏备用样品采集手工采集适量样品放入采样瓶中样品要完全充满容器密封并于内送至实验室尽快进行处理样品制备有机物的分离提取有机物分离提取前的样品预处理将采样瓶于静置使非水液相水相沉积固相分离非水液相按非水液态废弃物样品制备规范处理沉积固相按固态废弃物样品制备规范处理水相按下述原则处理悬浮物重量低于的地面水可直接进行有机物的大孔树脂提取悬浮物重量高于地面水及废水进行有机物的液液提取有机物的液液提取取份的水样分放到个分液漏斗中用氢氧化钠将调至
9、向每个分液漏斗加入二氯甲烷振荡注意放气至少静置使有机相与水相分离分出有机相再各用二氯甲烷提取两次将次提取液合并在烧瓶中如有机相与水相间的乳化层多于溶剂层的则可用离心等物理学方法完成两相的分离用硫酸溶液将水相的调至以下用二氯甲烷分三次进行溶剂提取将这三次提取的有机相也并入烧瓶中有机物的大孔树脂分离提取将净化后的树脂连同丙酮一道装入树脂柱树脂上下端分别垫盖玻璃棉将盛水容器与树脂柱相连排去柱中丙酮用纯水洗柱次使水样流经树脂柱流速为倍柱体积水样量不超过倍柱体积用真空泵抽去柱中余水然后用倍柱体积的己烷丙酮和个柱体积二氯甲烷分别次浸柱以洗脱有机质浸泡时间为每次然后缓缓滴流将洗脱液收集至烧瓶中必要时按对提取
10、液和的洗脱液进行不同有机组分的提取提取液浓缩将经获取的提取液或洗脱液按所述方法浓缩溶剂置换与相同样品量计算结果的表示样品前处理所得水相体积或流经树脂柱水样的体积以表示有机提取物的重量以表示质量控制设置树脂及溶剂对照即用纯水代替水样完成样品制备全过程用所得浓缩物进行遗传毒性检测如呈阳性反应则分别检查树脂及溶剂系统找出原因重复该试验直至合格为止设置平行样设置阳性对照见安全性与相同第三篇非水液态废弃物样品前处理适用范围本规范适用于非水液态废弃物中的挥发性及非挥发性有机物定义非水液态废弃物本规范中为主要成分不是水的液体包括水溶性和非水溶性液体以及某些液体的混合物液体中固体含量应低于仪器设备采样瓶瓶塞盖
11、具聚四氟乙烯衬垫的螺口玻璃瓶超声波清洗器分液漏斗同所列仪器设备一般实验室器具及玻璃器皿处理方法与相同试剂纯水与相同溶剂等级不得低于分析纯且皆应在玻璃容器中重蒸馏后方能使用二氯甲烷二甲基亚砜氢氧化钠盐酸无水硫酸钠样品采集用玻璃容器随机采集一定量的样品样品应将容器充满并于之内送至实验室用前将样品在室温条件下放置称重采样后应尽快进行样品制备样品制备无须进行组分提取的挥发性非水液态废弃物不必进行有机物提取即可直接用于以干燥器法等实验手段进行的诱变性检测无须进行组分提取的非挥发性非水液态废弃物不必进行有机物提取仅需称取一定量受试液溶于或悬浮于一定量或遗传毒性检测所需其他溶剂中于室温下超声处理后进行遗传毒
12、理学检测不同有机物组分的提取如遗传毒性检测需要按组分提取的样品按下述方法操作首先称取近样品放入锥形瓶中加二氯甲烷搅动烧瓶使样品溶解若不完全用分液漏斗分层不溶于二氯甲烷的液相可直接进行遗传毒理学检测其后程序与相同提取液浓缩将中所得各组分按所述方法浓缩溶剂置换与相同样品量计算结果的表示样品总量以计浓缩后的样品重以计提取的各有机组分的量以计质量控制设置溶剂对照即不用样品仅用所需溶剂完成样品制备全过程所得浓缩物的遗传毒性检测结果为阳性则应更换溶剂重复溶剂空白试验至合格为止设置平行样设置阳性对照见安全性与相同第四篇土壤及沉积物样品前处理适用范围本规范适用于土壤及沉积物中的非挥发性有机物定义土壤本规范中为
13、颗粒直径小于且能支持植物生长结合成一体的物质沉积物本规范中为在水生环境中淤积和残留的土壤类物质仪器设备采样瓶棕色广口瓶盖带聚四氟乙烯衬垫的螺口玻璃瓶采样勺或铲索氏提取器研磨机超声波清洗器功率分液漏斗所列仪器设备一般实验室器具及玻璃器皿处理方法与相同试剂纯水与相同溶剂等级不得低于分析纯且皆应在玻璃容器中重蒸馏后方能使用二氯甲烷二甲基亚砜无水硫酸钠氢氧化钠盐酸样品采集将样品装入采样瓶中样品应充满容器如采集水下样品应用水样将表面覆盖物冲去沉积物样品上面应覆盖水样后再旋上瓶盖样品于保存运输如超过应保存一般在油或其他有机物污染情况下采样量约污染不严重或含水量大的土壤采样量应采样时要注意样品对采样地的代表
14、性应在采样地范围内不同方位的采样点上采集个样品混合均匀为一个样品样品采集后应尽快进行样品制备样品制备有机物分离提取有机物分离提取前的样品预处理将样品风干压碎样品的团粒目过筛采样用四分法缩分直至选取适宜量的样品为止应留取份样品其中份用于测量含水量沉积物样品需经离心去除样品中的水分去除水分前后都应测量样品重量然后同土壤一样留取另一份样品测量含水量索氏提取可用索氏提取法提取样品中有机物将土壤沉积物样品与无水硫酸钠混合放入索氏提取器用二氯甲烷在溶剂沸点条件下提取每小时回流次使提取液冷却过滤然后使其通过无水硫酸钠柱去除水分研磨提取也可用研磨提取法将土壤或沉积物样品与无水硫酸钠混合放入研磨罐中加入约二氯甲
15、烷旋紧研磨器盖研磨滗出溶剂再用二氯甲烷重复提取共两次或直到提取液无色时为止将提取液合并过滤并使其通过无水硫酸钠柱去除水分超声提取索氏提取及研磨提取都不适宜的样品可选用超声提取法将土壤或沉积物样品与无水硫酸钠混合放入烧杯中在超声器中用二氯甲烷提取两次或直到提取液无色时为止将提取液合并过滤并使其通过无水硫酸钠柱去除水分不同有机组分的提取必要时按下述方法进行不同有机组分的提取首先将前述几种方法中得到的提取物溶于二氯甲烷中放入分液漏斗其后程序与相同提取液浓缩将所得提取液按所述方法浓缩溶剂置换与相同样品量计算结果的表示样品总量以表示土壤样品干重为土壤样品总量与含水量的差以表示沉积物样品干重为沉积物样品总
16、量与水样重量及含水量的差以表示提取的各有机物及各有机组分的量以计质量控制设置溶剂对照与相同设置平行样设置阳性对照参见安全性与相同第五篇固体废弃物样品前处理适用范围本规范适用于固体废弃物中的非挥发性有机物定义固体废弃物本规范中为含水量低于由有一定硬度粘着的颗粒物或条件下保持不呈液态或气态的物质组成的废弃物仪器设备样品容器棕色大口瓶盖具聚四氟乙烯衬垫的螺口玻璃瓶如样品对玻璃有腐蚀性可使用聚四氟乙烯容器采样勺或铲索氏提取器研磨机分液漏斗所列仪器设备试剂与相同样品采集用采样勺或铲将适量样品采集至样品容器中采样操作应在弱光条件下进行样品应于或低于保存运输一般在采样后即刻进行样品制备样品制备去除液相及降低
17、样品粒度方法选用下述适当物理学方法去除样品中的液相和降低样品粒度于静置将液相与固相分离油性或粘着废弃物可用无水硫酸钠或硅胶处理研磨目过筛油性或粘着废弃物可使其冷冻后再研磨降低其粒度有机物分离提取索氏提取将固体样品与无水硫酸钠混合放入索氏提取器用二氯甲烷提取使提取液流经无水硫酸钠去除水分研磨提取将固体样品与无水硫酸钠混合放入研磨器中加入二氯甲烷研磨间歇再研磨重复上述操作研磨结束后用滤纸过滤提取液并使其通过无水硫酸钠去除水分不同有机组分的提取与相同提取液浓缩将和所得提取液按所述方法浓缩溶剂置换与相同样品量计算结果的表示样品总量以计提取的有机物及各有机组分的量以计质量控制设置溶剂对照与相同设置平行样设置阳性对照参见安全性与相同附加说明本标准由国家环境保护局科技标准司提出本标准由北京市环境保护科学研究所中国环境科学院负责起草本标准主要起草人汪晶阎雷生本标准由国家环境保护局负责解释
