1、ICS 65. 120 B 46 GB 中华人民共和国国家标准G/T 20363-2006 饲料中苯巴比妥的测定Determination of phenobarbital in feed 2006-06皿09发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2006-09-01实施中华人民共和国国家标准饲料中苯巴比蛋的测定GB/T 20363一2006* 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销当e开本880X1230 1/16 印张0.5字数8千字20
2、06年10月第一版2006年10月第一次印刷9峰书号:155066. 1-28134 定价8.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 20363-2006 前言本标准系参阅国内外最新文献，经大量实验研究后结合我国现有技术装备水平，提出用高效液相色谱(HPLC)法定量，用气相色谱-质谱(GC-MS)法仲裁。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位:国家饲料质量监督检验中心(武汉)。本标准主要起草人:屈利文、钱肪、杨林、叶德连、钱沁。I GB/T 20363-2006 饲料中苯巴比妥的测定1 范围本标准规定了以高效液相
3、色谱(HPLC)仪和气相色谱质谱(GC-MS)仪测定饲料中苯巴比妥的方法，规定GC-MS法为仲裁法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预说合饲料中苯巴比妥的测定。HPLC法的最低检出量为5.0 ng(取样5g时，最低检测限为0.10mg/kg) ，GC-MS法最低检出量为0.25ng(取样5g时，最低检测限为0.02mg/kg)。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准
4、。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(neqISO 3696) GB/T 14699. 1饲料采样3 方法l:HPLC法3. 1 原理用三氯甲皖将饲料中的苯巴比妥溶出，经净化、萃取、浓缩后，用甲醇搭解，在HPLC仪上分离测定。3.2 试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。3.2.1 水，GB/T6682中二级。3.2.2 三氯甲:院。3.2.3 甲醇。3.2.4 氢氧化铀、溶液c(NaOH)约0.45mol/LJ: 18 g氢氧化纳溶于1000 mL水中。3.2.5 磷酸:85%。3.2.6 HPLC流动相:V(水)(3. 2. 1)十V(乙睛)(用前过o.4
5、5m滤膜)=65+35，用前超声脱气。3.2.7 苯巴比妥标准梅液3.2.7.1 储备液:准确称取100.00mg苯巴比妥标准品(含C12H120;J问不少于98.5 %)于50mL容量瓶中，用甲醇(3.2.3)榕解，并定容至刻度，该潜液为每毫升含苯巴比妥2000吨。储于冰箱中，有效期半年。3.2.7.2 工作液:用做量移液器移取储备液(3.2.7.1)500L，用甲醇(3.2.3)定容于50mL容量瓶，该溶液为每毫升含苯巴比妥20.00吨，储存于冰箱中备用。3.2.7.3 标准系列:用移液器移取工作液(3.2.7.2)1.0、2.0、5.0、10.00、15.00mL于50mL容量瓶，以甲醇
6、(3.2.3)稀释定容，该标准梅液系列中苯巴比妥的相应浓度为o.40、o.80、2.00、4.00、6.00问/mL，储存于冰箱中备用。3.3 仪器与设备3.3. 1 实验室常用仪器设备。3.3.2 分析天平:感量0.0001 g。GB/T 20363一20063. 3. 3 实验用振荡器。3. 3. 4 具塞三角瓶:100 mL。3. 3. 5 分液漏斗:150 mL。3. 3.6 旋转蒸发器:带100mL、200mL梨形瓶。3. 3. 7 高效液相色谱仪:具有C1B柱或类似的分析柱和紫外(UV)检测器或二极管阵列检测器。3. 4 试样的制备按GB/T14699. 1方法采样，选取饲料样品至
7、少500g，四分法缩减至少100g，磨碎，通过0.42mm 孔筛，r昆匀，装入密闭容器中，保存备用。3. 5 分析步骤3. 5. 1 提取称取适量试样(配合饲料5g，预引干溶剂，残渣加10mL 漏斗中，每次用10m 瓶中，于旋转蒸发器3.5.3 测定残渣溶解，过O.4 样的特征光谱应与标准品的恃定量方法:积分记录峰面积，3.6 分析结果的表述3.6. 1 式中:. . 100 x=二土一一xVm 2 , . 50 X一一试样中苯巴比妥的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); 00 1 g，置于100mL具塞三角烧瓶滤，滤渣返回瓶内，再用25mL (3.3.6)上于500C蒸H23后，转入分液振
8、摇、超声，使. ( 1 ) m)一-HPLC色谱峰的面积对应的苯巴比妥的质量，单位为微克(g);叫一一一所称取的试样质量(3.5. 1) ，单位为克(g);V-溶解残渣的总体积，单位为毫升(mL)。2 GB/T 20363一20063.6.2 每个试样取两份试料进行平行测定，以其算术平均值为测定结果，保留三位有效数字。3. 7 重复性在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的20%，以大于这两个测定值的算术平均值的20%情况不超过5%为前提。4 方法2:GC-MS法(伸裁法)4.1 原理用三氯甲皖将饲料中的苯巴比妥洛出，经净化、萃取、浓缩后，在GC-MS联用
9、仪上分离、测定。4.2 试剂和材料4.2. 1 提取净化用试剂同HPLC法中3.2.13. 2. 5。4.2.2 苯巴比妥标准溶液4.2.2.1 储备液:2000g/mL，同HPLC法中3.2.7.104.2.2.2 工作液:20.00g/mL，同HPLC法中3.2.7.204.2.2.3 标准系列:用微量移液器分别移取工作液(4.2.2.2)125、250、500、1000、2500L于10mL 容量瓶中，用甲醇(3.2.3)稀释定容，该标准系列中苯巴比妥的相应浓度分别为:0.25、o.50、1.00、2.00、5. 00g/mL，贮于冰箱中备用。4.3 仪器、设备4.3.1 样品前处理设备
10、同HPLC法3.3. 13. 3. 60 4.3.2 GC-MS联用仪:装有弱极性或非极性的交联毛细管柱的气相色谱仪和具电子轰击离子帽、及检测器。4.4 试样制备同3.4。4.5 分析步骤4.5. 1 提取同3.5.1。4.5.2 净化及浓缩同3.5.20 4.5.3 测定4.5.3.1 溶解同3.5.3.1。4.5.3.2 GC-MS测定参数设定色谱柱:弹性石英键合相毛细管色谱柱SE-54，长30m，直径0.25mm，壁厚O.25m; 载气:氮气(99.999%);柱头压:100 kPa; 进样口、温度:2600C ; 进样量:1L不分流;柱温程序:1200C保持1min，以200C/min
11、的速度升至2600C，于2600C保持15min; EI源电子轰击能:70eV; 离子源温度:2000C;接口温度:2500C;质量扫描范围:60AMU250 AMU; 榕剂延迟:2min; CON-的伺ONH筒。GB/T 20363-2006 特征质谱峰:m/z为89、117、204、232。4.5.3.3 定性定量方法定性方法:试样与标准品质谱特征峰对照可信度大于90%。定量方法:单点或多点色谱峰面积校准法定量。4.6 分析结果的表述4.6.1 苯巴比妥的含量按式(2)计算:式中:X一试样中苯巴比妥的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); m3-GC-MS色谱峰的面积对应的苯巴比妥的质量，单位为微克(g);m4一所称取的试样质量(4.5.1)，单位为克(g); V-洛解残渣的总体积，单位为毫升(mL)。每个试样取两份试料进行平行测定，以其算术平均值为测定结果，保留三位有效数字。重复性在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的20%，以大于这两个测定值的算术平均值的20%情况不超过5%为前提。. ( 2 ) V 川一切 m-m z X 4.6.2 4. 7 侵权必究书号:155066，1-28134 定价:8.00元关版权专有GB/T 20363-2006
