1、ICS 65.020.30 B 47 道B中华人民共和国国家标准GB/T 20395-2006 桑蚕微粒子病病原鉴定方法Identification of the pathogen of pebrine for silkworm (Bombvx moril. ) 2006-05-26发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2006-12-01实施发布中华人民共和国国家标准桑蚕微粒子病病原鉴定方法GB/T 203952006 唔中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印
2、刷各地新华书店经销9峰开本880X1230 1/16 印张0.5字数7千字2006年12月第-版2006年12月第一次印刷唔书号:155066 1-28334定价8.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 20395-2006 前桑蚕微粒子病是我国进境动物检疫危险性病害，为防止该病随桑蚕茧进境而传入我国，在进境动物检疫时需正确掌握桑蚕微粒子病原子包子的检疫和鉴定方法。本标准在制定过程中，总结了多年桑蚕茧检疫的实践经验，根据桑蚕微粒子抱子的形态学特征和遇酸溶解的化学特性，确定了检疫和鉴定桑蚕微粒子病原抱子的各项技术要求。本标准的附录A是规
3、范性附录。本标准由国家标准化管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人:吴希君、边玉民、李广华、王宝忠。本标准是首次发布的国家标准。I 桑蚕微粒子病病原鉴定方法1 范围本标准规定了桑蚕中微粒子病原子包子的检疫和鉴定方法。本标准适用于桑蚕茧中感染微粒子病的检疫和鉴定。2 规范性引用文件GB/T 20395-2006 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新
4、版本适用于本标准。GB 6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 18088-2000 出入境动物检疫采样3 原理微粒子病的病原体微抱子虫是一种原生动物，分类地位属于原生动物门，单丝抱子虫亚门，微抱子虫纲，微抱子虫目，单丝抱子虫亚目，微抱子虫科，微抱子虫属。它的生活周期中有抱子、抱子发芽、裂殖体、抱子形成期。抱子呈卵形或长卵圆形，大小为(3.6m3.8m)X(2.0m2.3m)，单细胞结构，见附录A。其大小在一定范围内是相对稳定的，但由于寄主发育阶段及寄生部位不同而有差异。在显微镜下呈淡蓝色，折光性强，密度1.301.35，遇酸溶解。抱子进入桑蚕消化道后，受消化液的作用而发芽，
5、弹出极丝，放出抱原质，进一步形成裂殖体，裂殖体常以二分裂法增殖，进入抱子形成阶段形成抱子。抱子是微粒子原虫的休眠体。由抱子侵入蚕体至新抱子形成，一般需要4d8d。微粒子病的传染源包括患病的蚕、蝠、峨的尸体、排泄物(如z蚕粪、熟蚕尿、峨尿)、脱离物(如:蜕皮壳、蜗壳、鳞毛等)。其传播途径主要是食入传染和胚种传染。被微粒子抱子感染的病蚕上藤结茧后，随桑蚕茧进境而传播。在进境桑蚕茧检疫工作中，该病原抱子的形态特征、特性是本标准鉴定方法的依据。4 试剂4. 1 浓盐酸(HCD。4.2 20%的氢氧化铀(NaOH)。4.3 分析用水按GB/T6682-1992规定执行。5 仪器、设备5. 1 相差显微镜
6、。5.2 生化培养箱(温控范围100C500C)。5.3 冰箱。5.4 天平(感量:O.lg)。5.5 离心机。5.6 离心管。5. 7 载玻片。1 GB/T 20395-2006 5.8 盖玻片。5.9 量筒。5.10 研钵。5. 11 手术剪、慑子。5.12 烧杯。5.13 培养皿。5.14 移液管。5.15 采样袋。5.16 医用纱布。6 抽样方法6. 1 抽查6. 1. 1 抽查方法抽查在现场进行，抽进行抽查。首先抽查蚕液体流出者为半干茧，有传染性和致病性。6. 1. 2 抽查件数按表1所列比动物产品种类蚕茧6.2 采样6.2.1 采样结合抽6.2.2 采样过程中检验。6.3 样晶的保
7、存现场采样后，将样品混OOC40C冰箱中保存，以备检7 显微镜检查7. 1 直接检查法子未被灭活，具茧从检样中取出蝠、峨剖开后，用慑子沾取体内不同部位少许组织分别涂于不同载玻片上，加入适量无菌水混匀，盖上盖玻片镜检(600倍以上)有无微粒子抱子。若检样中脂肪球数量过多影响镜检时，应加入适量20%氢氧化铀充分混匀作用10min后再进行检查，直接判定。如果镜检该批检样未检出微粒子病原抱子时，需收集检样用7.2法离心浓缩后再进一步检查。7.2 离心浓缩法经7.1法未检出微粒子病原抱子的检样收集后，将蝠及其他残留组织、峨于研钵中加2倍3倍20%氢氧化铀溶液充分磨碎并作用10min后，加入适量无菌水充分
8、搅拌，用两层医用纱布过滤除去残GB/T 20395-2006 渣，将滤液倒入离心管，以4000r/min离心10min20 min，弃去上清液，加适量无菌水于离心管充分搅拌沉淀物再离心弃去上清液，取沉淀物置载玻片上，加入适量元菌水混匀，盖上盖玻片镜检(600倍以上)有无微粒子抱子，每个检样至少检查10个玻片。7.3 酸溶解法镜检时有时会遇到畸形的微粒子抱子(多半是梨形或长形抱子)，往往易与真菌抱子相混淆，必要时可进行酸榕解处理，加以鉴别诊断。取检出样2滴，分别滴于载玻片两端，自然干燥后在其中一点加一滴浓盐酸(密度1.1日，另一点作对照，在300C生化培养箱中放置10min20 min后，然后盖上盖玻片镜检(600倍以上)。如果试样已干，可加元菌水一滴。经过酸处理的检样，微粒子溶解消失，而真菌抱子仍保持原状。8 结果判定8. 1 直接检查法及离心浓缩法当镜检发现于包子呈卵形或长卵圆形，大小为(3.6m3.8m) X (2. 0m2. 3m)，呈淡蓝色，折光性强，判定其为微粒子抱子(见附录A)。8.2 酸溶解法加酸作用后，被溶解的抱子判定其为微粒子抱子。CON-m的ONH阁。GB/T 20395一2006附录(规范性附录)微粒子抱子图A 侵权必究斗除版权专有微粒子抱子圈(版大600倍)固A.l书号:155066 1-28334 定价:8.00元GB/T 20395-2006
