1、ICS 65020B 16 圆雪中华人民共和国国家标准GBT 2210112008棉花抗病虫性评价技术规范第1部分：棉铃虫Technical specification for evaluating resistance ofcotton to disease and insect pestsPart 1：Cotton bollworm2008-06-18发布 2008-12-01实施宰瞀鳃紫瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会捉111刚 吾GBT 2210112008GBT 22101(棉花抗病虫性评价技术规范分为以下五部分：第1部分：棉铃虫；第2部分：棉蚜；第3部分：红铃虫；第4部分：枯
2、萎病；第5部分：黄萎病。本部分是GBT 22101的第1部分。本部分的附录A、附录B为资料性附录。本部分由中华人民共和国农业部提出并归口。本部分起草单位：中国农业科学院植物保护研究所、全国农业技术推广服务中心。本部分主要起草人：王武刚、张永军、吴孔明、郭荣。1范围棉花抗病虫性评价技术规范第1部分：棉铃虫GBT 2210112008GBT 22101的本部分规定了转基因棉花、杂交棉花和常规棉花抗棉铃虫性鉴定方法和抗虫性评价标准。本部分适用于棉花育种、棉花生产和植保单位对转基因棉花、杂交棉花和常规棉花抗棉铃虫性鉴定和抗虫性评价。2术语和定义下列术语和定义适用于GBT 22101的本部分。21幼虫死
3、亡率larval mortality棉铃虫幼虫取食棉花后死亡幼虫数占供试幼虫总数的百分率。22蕾铃受害率damaged rates of square and boll棉铃虫幼虫危害棉花蕾铃数占棉花植株蕾铃总数的百分率。23初孵幼虫neonate刚从卵中孵化出的棉铃虫幼虫。24双重皿petri dish大小一致的培养皿相对扣在一起。25标准感虫棉花品种cotton cultival for susceptibility to cotton bollworm棉铃虫幼虫取食供试棉叶状况达到4级的非转基因相同棉种的棉花品种。3供试棉铃虫的饲养31 饲养棉铃虫的基本设施和条件具有调温和光照设备的养虫室
4、，温度保持在2528之间和保证14 h光照时间。培养皿(直径9 cm)、养虫管(直径25 cm，高8 cm)、养虫架、饲喂幼虫的人工饲料(人工饲料配制参见附录A和附录B)。饲养成虫用铁纱笼、纱布、剪子、镊子、毛笔等养虫用具和存放饲料的冰箱及操作台。32棉铃虫成虫饲养将羽化后的雌、雄成虫混合放入铁纱笼内，饲喂以5蔗糖水或蜂蜜水，由其自由交配，在铁纱笼上覆盖纱布，使雌蛾产卵于纱布上。33卵的处理将同日产卵的纱布放在同一培养皿内，然后放在养虫室的养虫架上，等待卵的孵化。1GBT 22101卜一200834幼虫饲养孵化后幼虫接在人工饲料上，刚孵化幼虫用培养皿集体饲养，2龄3龄后分管单虫饲养。35供鉴定
5、用棉铃虫室内鉴定用孵化后在人工饲料上饲养2 d的1龄幼虫。网室鉴定用棉铃虫成虫和卵或初孵幼虫。36对照材料361 转基因棉花鉴定以对应的非转基因棉花受体亲本为对照。362转基因杂交棉花鉴定以对应的非转基因亲本为对照。363常规杂交棉花鉴定以标准感虫棉花为对照。364常规棉花鉴定以标准感虫棉花为对照。4转基因棉花植株抗棉铃虫性室内鉴定41供试棉叶供试转基因棉株的叶片为从植株顶部展开的第3片棉叶。42供试棉铃虫1龄幼虫，即从卵孵化后在人工饲料上饲养2 d的幼虫。43鉴定方法431双重皿集体饲虫将棉叶放在双重皿内(大叶放l片小叶放2片)，每皿接1龄幼虫8头，重复3次，皿底放置1张湿滤纸，用小湿棉球包
6、紧叶柄底部，保持棉叶在供试期内不于。接虫后用纸条或封口膜将双重皿封严，防止幼虫逃逸和保持皿内湿度。放入2528的养虫室或培养箱中饲养。432分管单头饲养将碎叶块放在管内，每管接1头1龄幼虫，每处理接24管。放入2528的养虫室或培养箱中饲养。44鉴定结果调查调查2次，第1次调查在接虫后第3天，第2次调查在第6天，调查记录内容如下。441幼虫死亡状况统计幼虫死亡数和活虫数，计算幼虫死亡率。需继续观察时将死亡虫挑出累计。442幼虫取食状况以目测分4个等级：叶片未取食或取食很少(叶片被食的tJ,iL或痕迹很少)记为“+”，即为1级；叶片上有一些被食孔但不多，记为“+”，即为2级；叶片上有许多被食孔但
7、未出现大片叶片被食缺口，记为“+”，即为3级；叶片大部被食或所剩无几为大量取食，记为“+”，即为4级。443幼虫生长状况以目测法观察幼虫生长情况，幼虫没有生长发育记为“一”，生长发育比正常个体小记为“+一”，正常生长记为“+”。另外，可用分析天平(精确度1 mg)称幼虫体重并计算各处理平均单头幼虫体重，以幼虫体重比较幼虫生长情况。45鉴定结果计算与分析每次鉴定均须设置非转基因棉株为对照。若对照组幼虫死亡率在5以上，处理组的幼虫死亡率需要进行校正。若对照组死亡率超过20，则需要分析原因，重新进行试验。幼虫校正死亡率m，数值以表示，按式(1)计算：mT_ftt-一Tne100 1m，2GBT 22
8、10112008式中：m，处理组幼虫死亡率；m。对照组幼虫死亡率。计算结果精确到小数点后一位。以幼虫校正死亡率、取食量(棉花被害程度)和幼虫生长发育情况综合评价转基因棉株对棉铃虫有无抗虫性和抗虫性程度。5棉花品种抗棉铃虫性田间网室鉴定51鉴定方法采用罩笼接虫法，通过对棉株受害调查，以蕾铃受害率与对照品种相比较评价鉴定材料的抗虫性级别。52田间罩笼设计罩笼高18 m，面积在50 m2以上，每品种25株，不设重复，以HG-BR-8为对照品种，罩笼四周设有保护行。罩笼内棉花栽培方式同大田，苗期可以防治棉蚜，防治棉蚜药剂不可影响后期棉铃虫的存活，后期不防治棉铃虫。53供试虫源和接虫量供试昆虫为采自田间
9、并经室内饲养的棉铃虫成虫，在养虫笼内任其自由交配，并喂以5的蜂蜜水。3 d后选择活动力强的成虫释放于种植鉴定材料的罩笼内。接虫量为每10 m2 4对(雌雄比1：1)接虫后分别在第3天、第7天分两次调查卵量，第7天如果每loo株累计卵量不足500粒，要进行补接卵，每株补足5粒卵，补接的卵粒用稀浆糊粘接在棉株顶部。接卵时期与棉田2代棉铃虫的发生期一致，棉花生育期为现蕾或开花结铃期。54调查方法接虫后第7天至第10天和第15天至第20天分两次调查各材料的被害蕾铃数、健蕾铃数和顶尖受害株数(以生长点受害为准)，分别计算蕾铃受害百分率和顶尖受害率，并计算两次调查的均值。55调查结果计算551蕾铃(顶尖)
10、受害率d，数值以表示，按式(2)计算：dnd100nt式中：粕调查棉株蕾铃(顶尖)被害数；n。调查棉株蕾铃(顶尖)总数。计算结果精确到小数点后两位。552蕾铃(顶尖)受害减退率x，数值以表示，按式(3)计算 x一(等)舢。式中：d。对照品种蕾铃(顶尖)受害率；d：鉴定材料蕾铃(顶尖)受害率。计算结果精确到小数点后两位。6抗虫性评价和分级(3)根据田间网室和室内抗虫性鉴定结果进行鉴定材料抗虫性综合评定，并按照表1评价棉花材料抗棉铃虫的级别。3GBT 2210112008表1 棉花品种抗棉铃虫性评价标准按照营铃(顶尖)受害 按照室内幼虫3 d校正 按照室内幼虫6 d校正抗虫性级别 减退率(x)的分
11、级 死亡率的分级 死亡率的分级I(高抗) X50 50 70IT(抗) 50X30 31S0 4170nl(中抗) 30X10 2130 2140IV(低抗) 10X60 20 20V感 X一60 同对照品种 同对照品种注：转基因棉花抗棉铃虫性评价依据室内幼虫取食嫩叶的校正死亡率和大田网室内营铃(顶尖)受害减退率(x)，综合评判其抗虫性程度。常规棉花品种抗棉铃虫性评价依据大田网室内营铃(顶尖)受害减退率(X)，按照分缀标准进行评定。4附录A(资料性附录)棉铃虫幼虫人工饲料配方表A1棉铃虫幼虫人工饲料配方GBT 2210112008主要成分 配方玉米粉 200 g黄豆粉 loo g酵母粉 90 g蔗糖 50 g山梨酸 18 g对羟基苯甲酸甲酯(尼泊金) 18 g维生素C 62 g复配维生素液 15 mL氢氧化钾(112 g50 mL) 18 mL乙酸(10 mL50 mL) 40 mL甲醛(10 mL30 mL) 15 mL水 912mLGBT 2210112008附录B(资料性附录)复配维生素配方表B1复配维生素配方维生素种类 含量烟酸(Vn) 1528 g泛酸钙(V) 1525 g核黄紊(vk) o764 g维生素B1 o382 g维生素B6 o382 g叶酸(v配) 0382 g生物素H(Vn) 0305 g氰钻胺紊(V：) 0003 g水 500132L6
