1、ICS 65. 150 B 51 GB 中华人民共和国国家标准GB/T 26621一2011日本对虾Kuruma prawn 2011-06-16发布数码防伪中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局中国国家标准化管理委员会2011-11-01实施发布目。吕本标准的附录A和附录B为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归口。本标准起草单位:中国水产科学研究院黄海水产研究所。本标准主要起草人:刘再、李健、孔杰、刘志鸿、庄志猛、张岩、王清印。GB/T 26621-2011 I GB/T 26621-2011 日本对虾1 范围本标准规定了日本对
2、虾(A1arsupenaeusjaonicus)的主要外部形态构造特征、生长与繁殖、遗传学特性以及检测方法。本标准适用于日本对虾的种质检测和鉴定。2 学名与分类2. 1 学名日本对虾Marsuenaeusa户onicus(Bate , 1988)。2.2 分类位置甲壳纲(Crustacea)，十足目(Decapoda)，对虾科(P巳naeidae)，囊对虾属(Marsuenaeus)。3 主要形态构造特征3. 1 外部特征日本对虾甲壳光滑元毛，体上有十几条棕色和兰色相间的横带。附肢呈黄色，尾肢后部色泽鲜艳、呈鲜兰色和黄色，边缘呈红色。额角侧沟很深，延伸至头胸甲的后缘。额角后脊较额角侧沟宽，具中
3、央沟。尾节背面有深的纵沟，未端尖，两侧有3对细小活动刺。肝脊和额胃脊明显。日本对虾的外部形态见图10圄1日本对虾外部形态雄虾第1腹肢的内肢变形特化成交接器，呈倒钟形，中叶末端形成横圆突起折向腹面，显著超出侧叶末端，顶端稍圆，雄性交接器见图2。雄性附肢由2节构成，末端鳞片状，近乎椭圆形，长约为宽的2倍，边缘着生细端刺。雌虾第4对和第5对步足之间基部的腹甲上，有一囊状交接器为纳精囊，前端开口，其前方有一圈突，见图301 GB/T 26621-2011 2 III-tis-BEE-LEEN 图2日本对虾雄性交接器(2.背面;1.腹面图3日本对虾雌性交接器3.2 可量性状3.2. 1 第1触角柄第1节
4、的柄剌和外缘末端刺小而尖细，内侧附肢伸至第1节末，末节约为第2节长度的1/3;第1触角触鞭很短，仅为头胸甲长的1/4，上鞭稍长于下鞭。3.2.2 第2触角鳞片末缘略超出额角的末端，其触鞭长度约为体长的1.5倍。3.2.3 第3顿足细长。雄性超出第1触角柄基节末端;雌性较短，不到末端;指节细小，雄性约为掌节长的1/2，雌性约为指节长的2/303.2.4 眼胃脊明显，占自眼眶边缘至肝刺间距离的3/5。3.3 可数性状额角齿式:上额角齿数/下额角齿数为810/1202 GB/T 26621-2011 4 生长繁殖特性4. 1 生长由于雌雄对虾性成熟时间不同，因而雌雄对虾的生长类型显著不同。雌性、雄性
5、日本对虾在南海北部自然海区体长与体重关系式分别以式(1)和式(2)表示。w=6. 378X10-6L3.1I6 W古=9.949X 10-6 V.029 5 、，、，11nL /，、，、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 式中zW一-体重，单位为克(g); L一一体长，单位为毫米(mm)。4.2 繁殖4.2. 1 生物学最小型性成熟的最小体长为118mm，最小体重为20go 4.2.2 支配与产卵日本对虾产卵期较长，南海北部群体2月至8月均有性成熟个体出现，产卵高峰期在2月至5月。在10月上旬至11月初雌虾最后一次
6、蜕皮后进行交配，交配时雄虾将精英投入雌虾交接器纳精囊内，外瞿翼状精英栓。翌年春季产卵，纳精囊内精子与卵子同时排出。卵粒直径O.26 mmO. 28 mm，为沉性卵，呈灰绿色或浅褐色。受精后卵膜举起，卵膜径O.33 mmO. 44 mmo 4.2.3 怀鼻量发育成熟的亲虾在水温升至26oC左右开始产卵，为多次产卵。雌虾怀卵量20X 104粒50X 104粒。5 遗传学特性5. 1 染色体数目日本对虾的染色体数目为2n=86o5.2 生化遗传学特性5.2.1 同工酶圈谱日本对虾成体肌肉中的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳图谱见图4，表现为一条酶带。如伊战静时道酶且二叫一唱睛一帽酷图4日本对虾肌肉LD
7、H同工酶电泳图谱5.2.2 群体遗传变异范围日本对虾平均多态位点比例为18.2%;平均杂合度的观测值为0.1042 :1: 0.004 50 6 检测方法6. 1 染色体的检测6. 1. 1 染色体的制备6. 1. 1. 1 日本对虾胚胎或幼体放入含0.02%秋水仙素的海水中培养3h4 ho 6. 1. 1. 2 移去海水，加入0.075mol/L氯化饵溶液中室温下处理20min30 min。3 GB/T 26621-2011 6. 1. 1. 3 移去低渗溶液，加入预冷的现配卡诺(Carnoy)氏固定液(甲醇=冰乙酸=3: 1)固定，每隔15 min更换一次罔定液，更换2次3次，最后更换1:
8、 1的Carnoy氏固定液固定30min。6. 1. 1. 4 将胚胎或幼体滴到冰冻的载玻片上，室温下干燥。6. 1. 1. 5 用磷酸缓冲液(0.1mol/L , pH7. 2)将吉姆萨(Giemsa)原液稀释为4%的溶液染色15min。吉姆萨染色液的配制见附录Ao6. 1. 2 染色体观察选择染色体形态好的分裂相100个计数，确定染色体数目。6.2 同工酶检测6.2.1 样品的采集与保存日本对虾成体(活体)运到实验室，保存于一700C超低温冰箱中。6.2.2 样品制备从液氮中分别取出样品(肌肉)，加入5倍体积的0.1mol/L磷酸缓冲液(PBS)后冰浴匀浆，4oC离心(15000 r/mi
9、n, 10 min) ，取上清液加入少量1%澳酣兰，再加入等体积的40%震糖溶液。20oC保存待测。6.2.3 电泳同工酶电泳采用不连续聚丙烯酷胶凝胶垂直电泳。电泳在4oC冰箱中进行。电泳参数如下。凝胶浓度(T):T浓缩肢=3.0%(pH6.7)，T分离肢=7.5%(pH8. 9)。乳酸脱氢酶染色液配方见附录Bo6.2.4 结果计算多态位点比例按式(3)计算:式中:P 多态位点比例:N1-一多态位点数;N2-一观察位点总数。平均杂合度观察值按式(4)计算:式中zHo一一一平均杂合度观察值;HI一一观察到的杂合个体数zN一一观察的个体总数。7 判定规则P=N1/N2X100% . ( 3 ) H
10、o=HI/N . ( 4 ) 检测结果不符合第3章和5.1要求的，则判定为不合格项;有不合格项的样品为不合格样品。合格样品数与样品总数的比为合格率。4 GB/T 26621-20门附录A(规范性附录)吉姆萨(Giemsa)染色液的配制A.1 Giemsa染色波母液称取0.5g Giemsa粉，量取甘油33mL，在研钵中先用少量甘油与Giemsa粉1昆合，研磨至元颗粒时再将剩余甘油加人，在56oc条件下温洛2h后，加入33mL甲醇，混匀。并保存于棕色瓶中备用。A.2 磷酸缓冲液(0.2moI/L , pH7.2) 磷酸缓冲液由A液和B液按比例混合而成。A.2.1 A液(0.2mol!L , Na
11、2HP04) 取36.1g磷酸氢二铀(Na2HP04 H20)定容于1000 mL的蒸馆水中;或取71.63 g磷酸氢二锅(Na2 HP04 2H20)定容于1000 mL的蒸锢水中，即可。A.2.2 B液(0.2mol!L ,NaH2P04) 取27.6g磷酸二氢铀(NaH2P04 H20)定容于1000 mL的蒸馆水中;或取31.21 g磷酸二氢铀(NaH2P04 .2H20)定容于1000 mL的蒸锢水中，即可。A.2.3 取A液720mL、B液28mL，两者混合即可。A.3 Giemsa染色液取100mL的磷酸缓冲液，加入4mL Giemsa染色原液即可。5 GB/T 26621-20
12、11 附录B(规范性附录)同工酶染色液及其所需溶液的配制B.1 1 moI/L三挂甲基氨基甲皖-盐酸CTris-HCO缓冲液的配制800 mL水中加入121.1 g Tris碱，加入浓HCl调节pH至8.0，加水定容至1000mL，分装后高压灭菌。B.2 同工酶染色液的配制见表B.l。药口口口Tris-HCl 乳酸铿辅酶1(NAD) 硝基囚瞠蓝(NBT)甲基吩嗦甲基硫酸盐(PMS)L一一一一一一一一一6 表B.1同工酶染色液的配制浓度剂量/mL0.2 mo!/L(pH8. 0) 50 1. 0 mo!/L(pH8. 0) 8 10 mg/mL 1 5 mg/mL 1 5 mg/mL 1 FFON-NNH因。国和华人民共国家标准日本对虾GB/T 26621-2011 中唔中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张0.75字数13千字2011年8月第一次印刷开本880X12301/16 2011年8月第一版16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533定价* f号:155066. 1-43313 GB/T 26621-2011 打印日期:2011年9月13日F002A
