1、CB 中国船舶工业总公司部标准CB 1171.1 1171. 7-87 船舶设备环境测量方法”7-04-25发布1988- 04-01实施中国船舶工业总公司批准中国船舶工业总公司部标准船舶设备环境测量方法霉菌CB 1171. 7-87 分类号：u 04 本标准规定了在大气及设备（含元、器件及材料）上进行霉菌取样、分离不自鉴定方法。霉菌的污染机理、长霉的影响及预防等，见GB2424.9-81电工电子产品基本环境试槌规程长霉试验导则。1 取样1. 1 基本取样方法1. 1. 1 将船舶舱室或港口码头所设置的有关设备长霉部位上的霉菌，直接用接种针接种到斜面上或用无菌棉抨，在长霉部位涂抹，放于无菌试管
2、中，带回试验室进行培养，随之在试验室进行分离纯化，然后逐一进行分析鉴定。1.1. 2 在可能条件下，最好将长霉实物取回一部分或全部，进行分离纯化，然后进行分析鉴定。1. 1. 3 必要时，在船舶上或港口码头，选摔适当的部位，悬挂或安放有关元、器件或零、部件以及各类材料等实物样品，进行自然暴露长霉取样。经过一段时间后，将长霉实物样品取回，进行分离纯化、培养，然后进行分析鉴定。1. 1. 4 若取船舶舱室空气中的菌样，或取航行海区及港口码头的大气中的菌样，则用平板培养基采样，将注有培养基的玻璃培养皿，打开k盖，在空气中暴露敞开放置15min，然后盖好，进行但崖培养。待长霉后，进行分离纯化，再进行分
3、析鉴定。1. 2 取样工具要求1. 2. 1 在取样出发前，将取样所需的仪器、用品等工具，配置齐全，制备完善。然后逐件分类，妥善完好无损地包装好，放进专用防挤压的工具箱及工作包内。1. 2. 2 必备的用品a. 按所需的数量，制备好查氏培养基斜面和马铃薯培养基或麦芽汁培养基斜面及平板，用纱布分类包扎好，装人铁皮盒内。b. 接种针12支，并应备用白金丝2根。c. 气体打火机一只。d. 酒精灯12只，并应妥善安全地备用酒精2瓶。e. 放大镜510倍的2只。f. 手电筒2只。g. 镇子2把，长15Cm和25cmo h. 剪刀1把。I. 电工刀l把。j. 电测笔螺丝刀l把，500YM 755型。k:
4、无菌棉忏医用的）。I. 酒精棉球l瓶。m. 无菌纱布。也无菌棉。中国船舶工业总公司1987- 04 -25发布26 1988 - 04 -01实施CB 117f. 7一盯。白纱布。,. 红色特种铅笔2支。1.Z. I 为了便于测量取样部位的温度和湿度，最好携带干湿球温度计12只。1. z. 为了便于考察长霉严重情况，记录事故现状，最好携带摄影用具一套。1.2. 5 根据每次取样的季节条件，任务要求等特殊情况，应考虑采取必要的装置、仪器、工具及各种用品等有关措施。1.2 霉菌取样记录表若干，按格式1。1. a 取样操作要求1.3. 1 在具体取样区域及设备上，先进行认真细致地观察分析，可借用手电
5、筒和放大镜观察长霉情况，从而确定取样对象及其长霉部位。1.a.2 根据长霉部位情况，确定选择一种具体取样的方式，然后选取所需用的取样工具，准备齐全后，着手进行取样1.1.3 在空间对大气进行霉菌取样时，可采用玻璃平板。而在设备元、器件及材料上进行霉菌取样时，为了防止周围环境大气中杂菌的污染，一般都采用玻璃试管斜面进行取样，试管口不可向上，应向下制斜。1. a . 通常在一个部位或一个霉点上取样，应考虑取样2管。最好取查氏与马铃薯或麦芽汁培养基两种斜面，各一营。1. 3.1每次取样前，应在试管上部用红色特种铅笔在玻璃管上直接编号，也可先剪贴一块白胶布或白纸片进行编号，并在霉菌取样记录表上写明。1
6、.1.1 在船舶上取样时，特别要注意灭菌方式的安全。在允许使用明火之处，可使用打火机、酒精灯进行灭菌，但要严防油污物质燃烧引起火灾，切记火柴头等火种，不要乱丢乱放。对于有氢气的蓄电池舱、有易燃品的弹药舱和洞库等部位，严禁火种，绝对保证安全。此类部位应用无火种灭菌取样方法，一般采用无菌棉抨取样。1. 3. 7 在一般设备元、器件及材料上进行霉菌取样时，可用接种针取菌样。先将接种针放在酒精灯或打火机的火焰上烧红，进行灭菌。之后，冷却片刻，并插入试管培养基内润湿一下，立即取出。然后，准确地从取样部位挑取菌样，敏捷地送人试管内的斜面上，轻轻地划一条直线，立即塞紧棉塞，保存起来，以便带回培养、分离鉴定。
7、用过的接种针当即进行灭菌，以免到处污染。1.a.a在光学仪器的玻璃表面上取样时，应用无菌棉抨或用筷子夹一只无菌棉球，在玻璃表面上，轻轻地擦一下，然后在试管内的斜面上划一下，便使菌样抱子落在培养基表面上。也可将棉抨、棉球保留在试管内，以便带回培养、分离、鉴定。凡用过的带菌棉抨、棉球，应集中烧毁灭菌。J.a. I 在剪取长霉实物样品时，应先用酒精棉球，把剪刀、电工刀、锤子擦洗灭菌。然后，剪取一块长霉实物样品，夹好投放在试管斜面上，以便带回培养、分离、鉴定。对于体积较大或无法剪割的长霉实物，也可采用无污染的其他适当的容器包装，以便带回分离培养。.4 取样记录要求1. 4. 1 取样时应按格式1霉菌取
8、样记录表填写，必要时也可将取样海区的经、纬度写明，以说明大气取样时的空间方位。1.4.2 民霉严重程度，可以分轻微、严重、特严重等类，以表面长霉情况决定该材料的抗毒性能。若有可能，将菌落的外观颜色等特征加以描述。1.4.1 取样条件亦应记录一下。如果取样场所部位无测试仪表或记录，就用自带的干湿球温度计测量。1. 4. 4 在培养鉴定后，将所确认的菌种记录在表内，看的长霉菌样不仅是单一菌种，也有2种或3种以上，均应写明。以此作为取样报告的原始依据。27 CB 1171. 7-87 ! 培养与货商!. 1 培养要求2.1. 1 将电热恒温培养箱通电调试，使箱内温度稳定在28。!. 1. ！将所取回
9、的试管斜面，插在试管架上，放人箱内。若试管数量较多时，也可用橡皮圈扎紧，平放在培养箱内的网架上，也可分批培养。!. 1. 3 将玻璃乎板倒置，平放在培养箱内的网架上。若数量较多，可将平板叠放起来培养，也可分批培养。!. 1.4 培养天数，视菌种生长状况而定，一般连续培养57d即可，有的生长缓慢，需要培养时间在14d左右，均可使菌种萌发，长出可供接种的菌落。2. 1.5在培养过程中，应每天观察一次长势情况，根据各种菌种菌落的长势，及时取出进行分离或鉴定观察。!.! 划线分离法2.2. 1 根据所取菌样培养生长出的菌落数量，备取无菌液和玻璃平板。一般每个菌落菌样，各取用一瓶制备好的无菌液和一只玻璃
10、平板。并逐个进行编号或标志，然后放人经紫外线灭菌完善的无菌室内。2.2.2 制备无菌玻璃平板。取一瓶查氏培养基，经热水浴熔化后，在无菌室内，浇注所需的无菌玻璃培养皿中，每只约注人152omL，井将培养皿稍微摇转一下，使培养基均匀布满平面。之后，平放静置一些时间，使其冷却凝固，即可成为具有固体培养基平面的玻璃平板。2.2.3 制备霉菌抱子悬浮液。提取要分离的菌样时，用经过酒精灯火焰灭菌的接种针，挑取一点菌藩，投入相应编号的无菌液中。若是长霉实物样品，就剪取一块长霉较多部位的实物样品，投入无菌液中。然后摇动无菌液烧瓶，使霉菌抱子悬浮于水中，并使菌样菌团抱子分散开来。再将烧瓶静置片刻，使水中悬浮的杂
11、质沉淀下来，便成霉菌抱子悬浮液。2.2.4 进行划线分离。选用接种环，右手拿接种环，在酒精灯火焰上灭菌，然后放到烧瓶内，在霉菌抱子悬浮液表面上冷却片刻，即可蘸取一环抱子悬浮液。左手平端着相应编号的玻璃平板，在酒精灯火焰上方的无菌空间操作。用左手拇指和中指稍微打开平板盖，右手拿着带有菌样抱子悬浮液的接种环，伸人到平板表面上，分成三个区域，轻轻划成W线形。在划线时，应注意切勿划破培养基表面。然后立即盖好平板，进行培养。2.2.5倒置培养。将带菌的划线平板倒置放人霉菌电热恒温培养箱中进行培养。在箱内恒温28以下，培养57d左右，就应及时观察菌落的萌发情况。若有已萌发生长较好的菌落，就可把平板拿到无菌
12、室内，按移菌、接种操作要求，将单一的菌种菌落，谨慎地分别接种移植于新鲜的试管斜面上，一种菌样应接种4式2管，并进行相应由编号。再放人培养箱内进行培养，萌发生长好之后，即可成为较纯洁的单一菌种菌样，以备供应检验观察分析鉴定使用。2.2.6如果抱子悬浮液较浓，平板上菌落密集一团，且杂菌较多，无法接种移植为单一的菌种时，应再按2.2.12.2.5款的要求，重新再作划线分离。直到能够分离出单一的新鲜纯菌样为好。有时要反复几次，才能得到纯菌种。2.3稀释分离法2. 3. 1 根据所取长霉实物样品的数量，或按所取菌样长出的菌落数量，备取无菌液、无菌玻璃培养皿、制备所需之培养基及所用的工具。一般每一个菌样菌
13、落或长霉实物样品，都要用45瓶无菌液，iff.i每只250mL的三角烧瓶内，装49miL无菌液为妥，并用12套玻璃培养皿。然后，依次进行编号或标志，放人经紫外线灭菌完善的无菌室内。2.3.2 制备霉菌抱f悬浮液。按2.2.3款的要求，将1号无菌液制备成相应菌样的霉菌抱子悬浮液。2.3.3稀释霉菌抱子悬浮液34次。取用容量为lmL的无菌吸管，或用经灭菌的打针注射器28 CB 1171. 7-87 （针筒容量用2mL，配9号针头），保持无菌操作要求，从1号瓶内吸取lmL上层抱子悬浮液，注人2号瓶内。将；2号瓶摇动，使瓶内悬浮液散开，均匀分布，便成为稀释50倍的菌样抱子悬浮液。同样操作方法，将2号瓶
14、内的悬浮液吸取1mL，注人3号瓶内，摇动均匀后，便成为稀释2500倍的悬浮液。将3号瓶内的悬浮液吸取lmL，注入4号瓶内，摇动均匀后，便成为稀释12.5万倍的悬浮液。将4号瓶的悬浮液吸取lmL，注入5号瓶内，摇动均匀后，便成为稀释625万倍的霉菌抱子悬浮液。但是，在操作过程中，特别要注意每次所用过的带菌吸管或注射器，不可重复使用。每稀释一瓶，必须更换一支无菌吸营或注射器，以防杂菌混人。2.3.4 制备有菌玻璃平板。每一种菌种，取已灭菌完善的无菌玻璃培养皿2套。取2支无菌吸管或注射器，分别在4号瓶、5号瓶中，各吸取lmL悬浮液，按无菌操作要求，分别注人相应编号的无菌玻璃培养皿中。再把已经热水浴熔
15、化后，且已冷却到45的培养基，在每个有菌被的培养皿中，分别倒人152omL。轻轻放在台面上摇转，使培养基与lmL菌样抱子悬浮液混合分散均匀。然后，平放静置于台面上，使其冷却凝固，便成为具有菌样抱子的培养平板。2.3.5 倒置培养。按2.2.5款的要求进行。并注意观察好气菌种与不好气菌种的萌发生长情况。及时移植接种纯菌种一式2营，培养好后，以供鉴定使用。如果平板或斜面上仍有杂菌，那就要再按上述要求，重新进行稀释分离，直到获得单一的纯菌种为好。3 鉴定3. 1 菌种分离纯化后，位根据有关专门资料进行鉴定或请有关专业单位（如中国科学院微生物研究所等）进行鉴定。3.2 鉴定命名确认之后，应出具“菌种鉴
16、定书”。根据鉴定结果，编制“某某地区、设备霉菌取样鉴定报告”和按格式2提供霉菌取样汇总表。 注意事项 1 霉菌不仅对设备材料危害严重，而且大多数是政病菌，应杜绝霉菌抱子对环境大气空间的污染。王作人员操作过程中要戴好有关防护用品，作好各个环节的灭菌工作，以确保安全可靠无事故。4.2 高压灭菌时，不可超过额定压力，以防造成爆炸事故。4.3 凡是需用的玻璃器皿等用品，都要进行严格的清洁、冲洗、烘干、包扎、灭菌工作，以防亲菌污染。 凡是带菌的样品、材料、工具等用品，要妥善包装保管；无用时，及时采取烧毁、清洗、灭菌等措施，以防蔓延。4.5 菌种贮存保养，不论何时，以510的保温容器为好。在夏季贮运时，需
17、要考虑低温保存和快速运输措施，以防菌种腐败变质与衰退。4.6 在任何情况下，严防紫外线照射菌种，以防止菌种变种与杀死菌种。工作人员也要注意防止紫外线照射头部及皮肤。29 格式I船名试管编号格式2舱室名称及部位通统计设备元、器件取样名称及部位材料CB 1171. 7-87 霉菌取样记录表码头或海区长霉取样条件菌落特征温度温度培养基类型鉴定结果备程度注c % 取样人：19年月日霉菌取样汇总炭注：部位指海区空间方位、停泊港口、码头、洞库、船舶舱室及其设置的设备、仪器、元器件和材料的名称等。30 CB 1171. 7-87 附加说明：本标准由环境条件标准归口组提出，由中国船舶工业总公司第七研究院标准化研究室归口。本标准由第七研究院标准化研究室负责起草。本标准主要起草人贾永熙。
