1、ICS 65.120 B 46 中华人民共和国农业行业标准NY/T 1258-2007 饲料中苏丹红染料的测定高效液相色谱法Determination of sudandyes in feed High-performance liquid chromatography 2007 -0个19发布2007 -.01 -19实施中华人民共和国农业部发布NY /T 1258-2007 目。吕本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位:国家饲料质量监督检验中心(北京)。本标准主要起草人:李兰、杨曙明、索德戚、闰惠文、刘庆生。I
2、NY/T 1258-2007 饲料中苏丹红染料的测定高效液相色谱法1 范围本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中的苏丹红染料，方法定量限为0.05mg/峙。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及添加剂预棍合饲料中苏丹红I、苏丹红E、苏丹红田、苏丹红凹的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1饲料
3、来样3 原理试样中苏丹红染料经乙腊振荡提取后，氮气吹干被缩，注入高效掖相色谱仪反相色谱系统中进行分离，用紫外检测器和二极管矩阵检测器进行定性、定量测定。4 试剂和溶液除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级用水。4. 1 乙脯:色谱纯。4.2 乙腊:分析纯。4.3 流动相:溶剂A一乙脂;榕齐IjB一水。4.4 苏丹红染料标准品:苏丹红I、苏丹红H、苏丹红田、苏丹红凹的纯度均应大于95%。4.5 苏丹红染料标准溶液4.5.1 苏丹红染料标准贮备被:分别准确称取已知纯度的苏丹红标准品苏丹红I、苏丹红E、苏丹红E、苏丹红凹各10mg，精确至0.0001 g，分别
4、置于100mL棕色容量瓶中，加乙腊(4.1)超声使之完全溶解，并定容至刻度，摇匀。该溶被中苏丹红I、苏丹红E、苏丹红四、苏丹红凹浓度均为100g/mL，于4C保存可使用3个月。4.5.2苏丹红染料标准中间液:分别准确移取苏丹红L苏丹红E、苏丹红田、苏丹红N标准贮备液(4.5.1)各5mL，置于50mL棕色容量瓶中，用乙腊(4.1)定容至刻度。该榕液中苏丹红染料浓度为10g/mL，于4C保存可使用1个月。4.5.3 苏丹红染料标准工作准:准确移取苏丹红染料标准中间液(4.5.2)0.5mL、1.0mL、2.5rnL,5.0 mL、10.0mL于50rnL棕色容量瓶中，用乙脯(4.1)定容至刻度。
5、此时，溶液中苏丹红染料的被度分别为0.1g/mL、0.2g/mL、0.5周/mL、1.0月/mL、2.0g/mL，于4C保存可使用一周。5 仪器和设备除实验室常用仪器和设备外，还包括:5.1 电子天平:精度为万分之一和千分之一各1台。1 NY /T 1258-2007 5.2 振荡器。5.3 高效液相色谱仪:紫外检测器(多股长)和二极管矩阵检测器。5.4 针头过掠器:备孔径为0.45m有机微孔滤膜。5.5离心机:5000r/mino 5.6 氮吹仪:50C。5.7 涡轮混合器:2500r/mino 6 试样的选取和制备6.1 按GB/T14699.1采样。6.2 选取有代表性饲料样品至少500
6、g，四分法缩减至100g，粉碎，全部通过孔径为0.42mm的试验筛，泪匀，装人密闭容器中，避光低温保存，备用。7 分析步骤7.1 试液的制备7. 1. 1 提取称取配合饲料10g;浓缩饲料、添加剂预混合饲料样品5g(精确至0.001g)，置于150rnL具塞锥形瓶中，加入50mL的乙腊(4.2)，于振荡器(5.2)振荡提取30min，离JG，上清液备用。7. 1.2 准确吸取试液(7.1.1)中配合饲料提取液10mL，氯气吹干，加入2rnL乙腊(4.1)润轮泪合器(5.7)烟合30s，过孔径为0.45m的有机掘膜，滤液上机测定。7.1.3 故缩饲料、添加剂预海合饲料提取被直接上液相色谱仪测定。
7、7.2 色谱条件7.2.1 色谱柱具有C18填料的柱子(粒度为5m):柱长250mr刀，内径4.6mmo 7.2.2 流动相(4.3)以1.0mL/min流速梯度洗脱。梯皮条件见表10时间(min)7.2.3 进样噩50Lo 7.2.4 检测器0.00 8.00 8.50 28.0 29.0 35.0 表1洗脱梯度表溶剂(A%) 95 100 100 100 95 95 溶剂(B%) 5 。5 5 紫外检测器和二极管矩阵检测器，检测波长苏丹红I为478nm;苏丹红L苏丹红田、苏丹红N均为520nmo 7.3 测定2 NY IT 1258-2007 7.3.1 定性测定二极管矩阵检测器定性。样品
8、峰只有满足下述条件，才能证实是苏丹红染料:a) 样品峰的保留时间与标准峰的保留时间相同(差异士5%)。如有怀疑，需做标准物添加(即将标准物加到样品中)实验。b) 擅长大于220nm、样品的光谱图应与标准晶光谱图无明显差别，样晶峰与标准峰的最大吸收股长相同，即其差异不大于检测系统分辨率决定的范围(一般是2nm4nm)。7.3.2 定噩测定7.3.2.1 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数。向液相色谱柱中注入待测定苏丹红染料标准液(4.5.3)及试液(7.1)，得到色谱峰面积响应值，用外标法定量。7.3.2.2 结果计算试样中每种苏丹红染料的含量按式(1)分别计算:T Pix v Ci XVs
9、-UJ = ., Pst X m X Vi 式中:Wi一一试样中每种苏丹红的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); 其一一试样榕液峰面积值;V一一样品的总稀释体积，单位为毫升(mL); G一一标准溶液浓度，单位为微克每毫升(g/mL); Vst一一标准溶液进样体积，单位为微升(L); Pst一一标准溶液峰面积平均值;m一一试样质量，单位为克(g)j Vi一一试样榕液进样体积，单位为微升(L)。平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。8 重复性同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。3 NY /T 1258-2007 附录A(资料性附录)苏丹红标准色谱圈DAD 1
10、 B, Sig=520,4 Ref:off(20061218SUOO.0006.D) mAu 苏丹红苏丹红苏丹红8 -1 E AN 6 4 2 。llfW1LJ人ji -2 。5 10 15 20 4 25 30 口llllBON-NFH问Z中华人民共和国农业行业标准饲料中苏丹红染料的测定高效液相色谱法NY / T 1258-2007 ，开中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码:100026 * 9号网址: 中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销号令长* 字数7千字印张0.75开本880mmx 1230mm 1116 2007年1月北京第1次印刷印数:1-500册2007年1月第1版书号:16109 1090 定价:10.00元版权专有僵权必究举报电话:(010) 65005894 NYI
