1、ICS 67.050 B 33 中华人民共和国农业行业标准NY/T 1286一2007花生黄曲霉毒素B1的测定高效液相色谱法Determination of Af1atoxin B1 Content in Peanut High Performance Liquid Chromatography 2007 -04-17发布2007 -07 -01实施中华人民共和国农业部发布NY/T 1286-2007 前言本标准由中华人民共和国农业部提出井归口。本标准起草单位:农业部油料及制品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人:李培武、张文、丁小霞、谢立华、陈小据、李光明、陈洪。I NY /T 1286-
2、2007 花生黄曲霉毒素B1的测定高效液相色谱法1 范围本标准规定了采用高效液相色谱法测定花生黄曲霉毒素B1含量的方法。本标准适用于花生中黄曲霉毒素B1的测定。本方法检出限为1.0g/kgo2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 5491粮食、油料检验杆样、分样法GB 6682 实验室用水规定(GB6682-1992 ,eqv I 3696-1987) 3 原
3、理样品中黄曲霉毒素B1经提取、浓缩、衍生化，反相C18柱分离后，在激发波长365nm，荧光波长440m检测，外标法定量，计算样品黄曲霉毒素B1含量。4试剂下列试剂除注明外均为分析纯，水为GB6682规定的二级水。4.1 甲醇，色谱纯。4.2 乙脯，色谱纯。4.3 甲醇溶液(含4%氯化纳)，称取4g氯化铀(NaCl)溶于70mL甲醇和30mL71的混合溶被。4.4 三氟乙酸。4.5 石油酿(60C90C)。4.6 三氯甲:院。4.7 黄曲霉毒素B1标准储备液，10mg/L。5 仪器设备5.1 天平，感量+1mgo5.2 切片机。5.3 粉碎机。5.4 旋涡混合器。5.5 超声波清洗器，功率不低于
4、50Wo5.6 干热氮吹仪，控温精度50C士2C。5.7 中速定性滤纸。5.8 烘箱，控温精度50C士2C。5.9 0.45m有机相滤膜。1 NY /T 1286-2007 5. 10 Nova-pak C18色谱柱(3.9mmX 150 rnrn) 0 5.11 被相色谱仪(带荧光检测器)。6 取样按GB5491执行。7 试样的制备样品中的水分及挥发物含量超过10%时，在45C左右的条件下通风干燥。将干燥的花生样品在切片机中如片至O.5mm左右，再经粉碎机粉碎，过0.42mr筛。8 分析步醺8. 1 提取称取20g(精确至10mg)样品，置于250mL具塞锥形瓶中，加60mL甲醇榕蔽性.3)
5、050C土2C水恪超声提取5rrun(每隔1rrun取出旋涡棍合1次)，过双层中速定性措纸(5.7)，收集滤掖于小烧杯中，取掠液10mL于试管a中，加人5mL石油酷(4.5)，旋涡棍合30s，静量2rrun，待分层后，弃上层，取下层溶液5mL于试管b中，加入5mL三氯甲:院(4.6)至试管b中，旋涡混合105，静置2Irn，取出上层于试管c中，再加入5mL三氯甲皖(4.6)至试管b中，旋涡棍合10s，静置2min，取上层。合并两次提取植于试管c中。8.2 柱前衍生将提取液置于干热氮吹仪(5.6)50C恒温吹干，加入200L衍生试剂(4.4)，盖好塞子，旋涡棍合30 s，50t烘箱中衍生5min
6、，置于干热氮吹仪(5.6)50C恒温吹干，用1mL流动相榕解，过有机相滤膜(5.9)，撞液用摄相色谱分析。8.3 色i曾分析8.3.1 取黄曲霉毒素B1标准储备液(4.7)，用甲醇(4.1)稀释至20g!L、40g/L、80闯/L、160问/L、320g/L标准使用攘连同样品依次进样，进行准相色谱检测，建立工作曲线。8.3.2 色i曾条件:流动相:乙腊+甲醇+水=13 + 12十75，流速:0 . 8 mL/min，进样量10L，柱温30C, 检测器:EX:365nm,EM:440 nmo 9 结果计算试样中黄曲霉毒素B1含量以质量分数W计，单位以微克每千克表示(g/kg)，按公式(1)t十算
7、:式中:V1 X D.1 OOOX 1000 =mlX一百-X - -m . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . I (1 ) ml一一从工作曲线上计算出进样体积样品中黄曲霉毒素B1质量，单位为微克(g); V1一-加人流动相体积的数值，单位为毫升(mL); V2一-进样体积，单位为微升(L); D一-样攘的总稀释倍数;m一一试样质量，单位为克(g)。计算结果保留小数点后一位。10 精密度测定结果用算术平均值表示。两次平行恻定结果的相对相差小于10%。2 hCON-SNF HMZ 中华人民共和国农业行业标准花生黄曲理毒素B，的测定寓效由相色谱法NY IT 1286-2007 书导中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码:100026 网址:) 中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销争夺9夺争+* 争夺印张0.5字数5千字2007年6月北京第1次印刷印数:1-500册定价:8.00元开本880mmx 1230mm 1116 2007年6月第1版书号:16109. 1203 版权专有侵权必究举报电话:(010) 65005894
