1、ICS 67.100.10 C 53 中华人民共和国农业行业标准NY /T 1332-2007 乳与乳制品中5-控甲基糠醒含量的测定高效液相色谱法Milk and Dairy Products-Determination of hydroxymethylfurfural by HPLC 2007 -04-17发布2007.07-01实施中华人民共和国农业部发布本标准中附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。.L. _.嗣目U吕本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位:农业部食品质量监督检验测试中心(上海)。本标准主要起草人:孟瑾、郑冠树、韩奕奕、吴榕、韩惠雯。NY
2、/T 1332-2007 I NY/T 1332-2007 1 范围乳与乳制品中5-娃甲基糠醒含量的测定高效液相色谱法本标准规定了乳与乳制品中子搓甲基糠醒(5-HMF)含量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于乳与乳制品中子捏甲基糠醒(5-I-Th在F)含量的测定。本方法检出限为o. 005 mg/kgo 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分
3、析实验室用水规格和试验方法3原理乳与乳制品中蛋白质经沉淀除去，惊被中的5-捏甲基糠醒(5-HMF)经反相高放液相色谱柱分离，以紫外检测器检测，外标法定量。4 试剂和材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。4.1 水:GB/T6682规定的一级水。4.2 甲酶(CH30H):色谱纯。4.3 草酸溶掖1c ()()HhJ = 0 .15 mol/L! :准确称取1.8930g草酸(XH)2. 2HzO ，梅解并稀释至100mLo 4.4 亚铁靠在化树榕被:92g/L，准确称取亚铁氧化伺Fe(CN)63H20106.0 g，播解井稀释至1000mL。4.5 乙酸悻榕腋:183 g/L，准确称取219.0
4、g乙酸锦Zn(CH3C)z2H20J，潜解并稀释至1000mLo 4.6 标准溶班4.6.1 标准贮备耀:每毫升含5-提甲基睡醒标准物质O.3mg准确称取质量分数不低于99.0%的子起甲基糠醒标准物质0.03g，充分榕解于10rnL甲醇(4.2)后，用水(4.1)稀释定容至100mL，晦合均匀o该榕液每毫升含5-捏甲基糠醒标准物质0.3mgo冷藏于冰箱中，有效期90do 4.6.2 标准工作溜:每毫升含F提甲基椭醒标准物质3.口问准确吸取标准贮备被(4.6.1)1.0mL，用水(4.1)稀释定容至100mL，槐合均匀。该榕液每毫升含5-捏甲基糠醒标准物质3.0.go冷藏于冰箱中，有效期14do
5、 4.7 定量滤纸:中速，直径约15Cffio 4.8 滤膜:水相，0.45闷。1 NY IT 1332-2007 5 仪器和设备常用实验室仪器及以下各项05.1 分析天平:感量0.0001 g。5.2 高效液相色谱仪:配有紫外检测器。6 分析步骤6.1 试样制备6.1.1 贮藏在冰箱中的待测试样，应在试验前预先取出，并达室握。6.1.1.1 液态试样准确称取试样10g，精确至0.0001 g。置于具塞试管中，待测。6.1.1.2 回态试样准确称取试样1g，精确至0.0001 g。置于具塞试管中，乳粉加入约7.3mL 25t:左右的温水(4.1)，振摇榕解;干酷加人30rnL温水(4.1)，句
6、浆榕解;黄油试样温热融化，待测。6.1.2 试样(6.1.1)中加入5mL草酸搭液(4.3)，掘合均匀，沸水浴中加热25min，冷却至室、温。6.1.3将试样(6.1.2)转移至50rnL容量瓶中，用约10mL甲晖(4.2)分次淋洗，使完全转移。加入3mL亚铁模化饵榕液(4.4)和3mL乙酸铮榕液(4.5)，剧烈振摇后静置15min。用甲醇(4.2)定容、1昆匀，冷却至室温。中速定量滤纸(4.7)过滤，弃去最初的滤液，收集滤液于烧杯中，用滤膜(4.8)过滤，用于高效液相色谱仪(5.2)测定。6.2 液相色谱分析6.2.1 色谱参考条件色谱柱:C:t8 ,250 mmX 4.6 mm，5m。流动
7、相:甲醇+水(15+ 85)。流速:1. 0 mL/mino 检测技长:280nmo 柱温:室温。进样体积:10L。6.2.2 测定准确吸取各不少于2份的10L标准工作液(4.6.2)和10L试液(6.1.3)，分别进样，得到标准工作液和试液中子起甲基糠酶的峰面积，外标法定量。典型色谱图参见附录A中的图A.1。6.3 空白试验以水(4.1)代替待测样品，按6.2.2步骤同时完成空白试验。7 结果计算2 试样中5-瓷甲基糠酶的含量按式(1)计算:Ai V x=互;cs二;. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8、 . . . . . . . . ( 1 ) 式中:X一一试样中5-起甲基糠醒的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); Ai-一试样中子在甲基糠酶的峰面积;As-标准工作液中子起甲基糠醒的峰面积;Cs一一标准工作被中子捏甲基糠醒的浓度，单位为微克每毫升(g/mL); V一-一-试样最终定容体积，单位为毫升(rnL)j m一一试样质量，单位为克(g)。计算结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。注:计算结果应扣除空白值。8 精密度NY/T 1332一2007在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。3 附录A(资料性附录)商效液相色谱法测定于提甲基糠醒典
9、型色谱圈NY IT 1332-2007 高效液相色谱法测定于是甲基糠酶的典型色谱图参见图A.loA.l mAU 40-m寸血.咀35-30-25 , 20; 15-，、10 -j ZJ mm 8 高蚊液相色谱法测定5-捏甲基糠醒典型色i普图6 4 生固A.l 坦4 BON-N凹的?H如Z中华人民共和国农业行业标准事L与乳制品中5-捏甲基糟醒含量的耐定高效擅帽色谱法NY /T 1332-2007 祷中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码:100026 网址:阴阳.ccap. com. cn) 中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销持* 印张0.75字数7千字2007年6月北京第1次印刷印数:1-500册定价:10.00元4非持* 开本880mmx 123mm 1/16 2007年6月第1版书号:16109 1104 版权专有僵权必究举报电话:(010) 65005894
