1、ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 919-2004 饲料中苯并(a )克的测定高效液相色谱法2005-01-04发布Determination of benzo(a)pyrene in feeds -High performance Iiquid chromatography 2005-02-01实施中华人民共和国农业部发布NY /T 919-2004 前言本标准在参阅了国内、外大量文献基础上，经过方法筛选，确立了用高效液相色谱法测定饲料中苯并(a)苗含量。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位:农
2、业部饲料质量监督检验测试中心(沈阳)。本标准起草人:徐国荣、田晓玲、曹东、柏云江、张建勋、田颖、徐世行。I 1 范围饲料中苯并(a)珑的测定高效液相色谱法本标准规定了用高效液相色谱仪测定动物饲料中苯并(a)菌的方法。NY/T 919一2004本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中苯并(a)菌的测定，检测限为2.5glkg。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于
3、本标准。GBf 6682 分析实验室用水规则和试验方法GBf 14699. 1 饲料采样方法3 原理试样中的苯并(a)芭经环己烧提取，再经二甲基亚帆萃取。试样溶液过C8小柱，用环己烧洗脱。将洗脱液于旋转蒸发器上蒸干，残渣用乙睛溶解，于高效液相色谱仪测定。4 试剂和材料除另有规定外，仅使用分析纯试剂。水，GBf6682，二级用水。4.1 Z睛色谱纯。4.2 环己皖加活性炭重蒸馆。4.3 二甲基亚砚4.4 甲醇色谱纯。4.5 标准溶液4.5.1 标准贮备液准确称取苯并(a)苗标准品(纯度二三97%、HPLC级)10mg，置于100mL量瓶中，加乙睛榕解并稀释至刻度，该贮备液浓度为100周/mL。置
4、4C冰箱中保存(可保存2个月)。4.5.2 标准工作液准确吸取1mL的标准贮备液(4.5.1)，置于100mL量瓶中，用乙睛稀释至刻度。分别准确吸取一定体积的该榕液，加乙腊制成浓度为25ng/mL、50ng/mL、75ng/mL 100 ng/mL、150ng/mL、200ng/ mL的标准工作液。5 仪器设备5.1 实验室常用仪器设备NY IT 919-2004 5.2 高效液相色谱仪配紫外检测器。5.3 离心机3000 r/min。5.4 超声波震荡器5.5 旋转蒸发器65 to 5.6 C8净化富集柱250 mgo 5.7 分析天平感量0.0001go 5.8 天平感量0.001go 6
5、 试样制备按照GB/T14699. 1饲料采样方法采样，选取具有代表性的样品，至少500g，用四分法缩减至200 g，经粉碎，全部过1mm孔筛，装人磨口瓶中备用。7 分析步骤7.1 试样溶液的制备称取试样10g，准确至0.002g，置于250mL具塞三角瓶中。加入环己烧(4.2)30mL，超声振荡25mn，倾出上清液。残渣2次分别加入环己烧(4.2)20mL，超声振荡20min。合并3次提取液，离心(3000 r/min)5 min。上清液于旋转蒸发器上(65t)浓缩至约5mL。用吸管将浓缩液转移至100mL 分液漏斗中，用5mL环己烧(4.2)分数次洗涤蒸馆瓶，洗液合并于分液漏斗中。依次用l
6、OmL、5mL二甲基亚枫(4.3)缓慢振摇提取2次，静置10min后，分离二甲基亚枫层(下层)于三角瓶中，加人25mL水，摇匀。过C18净化富集柱(使用前，用20mL甲醇(4.4)、20mL水过柱活化)，用lOmL水淋洗，抽干。用30mL环己烧(4.2)洗脱(洗脱速度为2mL/min。洗脱液于旋转蒸发器上(65t)蒸干，用2mL乙脯(4.1)溶解残渣，过0.45m微孔滤膜，待测。7.2 测定7.2.1 高效液相色谱条件色谱柱:C18柱，柱长200mm，内径4mm，粒度5m。流动相:乙腊-水，75十25。波长:UV296nm。流速:2.0 mL/mino 进样量:10L。7.2.2 定量测定按仪
7、器操作规程操作。取待测液和标准工作液(4.5.2)，作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。8 结果计算8. 1 试样中苯并(a)花的含量按式(1)计算:2 NY /T 919-2004 c X v x=一-.(1) n 式中:工一一试样中苯并(a)蓝的含量，单位为微克每千克(glkg); c一一试样中苯并(a)菌的响应值在标准曲线上对应的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL); m一一试样质量，单位为克(g);u一一试样稀释的体积，单位为毫升(mL)。8.2 测定结果用平行测定的算数平均值表示，保留至小数点后1位。9 重复性同一操作者对同一试样2次平行测定所得结果的相对偏差不大于15%。3 叮gN|5回hz中华人民共和国农业行业标准饲料中苯并(a)花的测定商效在相色谱法NY /T 919-2004 中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店衔18号楼)(邮政编码:100026 网址:) 中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销铃争舍* 争e* * 印张0.5字数5千字2005年4月北京第1次印刷印数:1-2000册定价:6.00元开本880mmx 1230mm 1116 2005年4月第1版书号:16109 524 版权专有僵权必究举报电话:(010) 65005894 NY.厅91
