1、ICS 65.020 B 61 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 973一2006柑楠无病毒苗木繁育规程Criteria for the propagation of citrus virus-free budling 2006一0个26发布2006-04-01实施中华人民共和国农业部发布前言本标准的附录A和B为规范性附录，附录C为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。NY /T 973-2006 本标准起草单位:农业部柑桶及苗木质量监督检验测试中心、中国农业科学院柑桶研究所、四川省农业厅植物检疫站、湖南省农业厅经济作物局、重庆市农业局经济作物技术推广站和广东省农业科学院
2、果树研究所。本标准主要起草人:周常勇、赵学源、蒋元晖、戴胜根、唐科志、杨方云、李太盛、彭炜、丁伟民、吴正亮、唐小浪。I NY /T 973-2006 柑槽无病毒苗木繁育规程1 范围本标准规定了柑桶元病毒苗木繁育的术语和定义、要求、柑桶病毒病和类似病毒病害检测方法、脱毒技术以及无病毒母本园、无病毒采穗圃和无病毒苗圃的建立和管理。本标准适用于全国柑情产区的甜橙、宽皮柑楠、袖、葡萄袖、拧模、来橡、拘橡(佛手)、酸橙和金柑以及以它们为亲本的杂交种的元病毒苗木的繁育。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版
3、均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 5040 柑楠苗木产地检疫规程GB 9659 柑桶嫁接苗分级及检验3 术语和定义3. 1 适栽晶种commercial v町iety适合于当地栽培的柑桶品种。3.2 原始母树original mother t.，配对病毒病和类似病毒病害感染状况尚不明确的母本树。3.3 病毒病和类似病毒病害virus and virus-Iike dise剧创由病毒、类病毒、植原体、螺原体和某些难培养细菌引起的植物病害。3.4 指示植物indicator plant 受某种
4、病原物侵染后，能表现具有特征性症状的植物。3.5 茎尖嫁接sht-tip grafting 将嫩梢顶端生长点连同23个叶原基，长度为0.14mm0.18 mm的茎尖嫁接于试管内生长的陆木的过程。3.6 脱毒virus exciusion 采用茎尖嫁接或热处理+茎尖嫁接方法，使已受病毒病和类似病毒病害感染的植株的无病毒部分与原植株脱离而得到元病毒植株的过程。3.7 无病毒母本树virus-free mother tree 用符合本规程要求的元病毒品种原始材料繁育或经检测符合本规程要求的元病毒的可供采穗用的NY/T 973-2006 植株。3.8 3.9 3.10 无病毒母本园virus-free
5、 mother bl础种植元病毒母本树的园地。无病毒采穗圃virus.free increasing block 用元病毒母本树的接穗繁殖的苗木建立的用于生产接穗的圃地。无病毒苗圃virus.free nurse叮用从无病毒采穗圃或无病毒母本园采集的接穗繁殖苗木的圃地。4 要求4.1 接穗和础木4.1.1 繁殖柑情无病毒苗木所用的接穗和础木的品种都是适栽品种。4.1.2 繁殖柑桶无病毒苗木所用的础木用实生苗。4.2 柑槽无病毒苗木不带有下述病毒病和类似病毒病害4.2.1 国内已有品种的苗木不带黄龙病(huanglongbing)、裂皮病(eXrtis)、碎叶病(tatter leaf) ，柑桶
6、衰退病毒茎陷点型强毒系引起的袖矮化病(pummelodwarf)和甜橙茎陷点病(sweetorange stem-pitting) 以及温州蜜柑萎缩病(satsumadwarf)。4.2.2从国外引进的柑桶苗木，除不带4.2.1所列病害外，还要求不带鳞皮病(psorosis)、木质陷孔病(cachexia)、石果病(impietratura)、顽固病(stubbom)、杂色褪绿病(variegatedchlorosis)和来棱丛枝病(lime witches brm)等各种病毒病和类似病毒病害。4.3 柑桶无病毒苗木不带溃痛病按GB5040规定执行。4.4 柑桶无病毒苗木的生长规格嫁接口高度、
7、干高、苗木高度、苗木径粗和根系生长按GB9659规定执行。5 原始母树的选定5.1 适栽品种(单株系)名单由省级农业行政部门确定。5.2 原始母树用适栽品种的优良单株，或具有该品种典型园艺学性状的其他单株。6 原始母树感染病毒病和类似病毒病害情况鉴定6.1 从原始母树采接穗，在用40目塑料网纱构建的网室内嫁接繁殖4株苗木，以备病毒病和类似病毒病鉴定和脱毒用。6.2 病毒病和类似病毒病害鉴定可采用指示植物法(见本标准7和附录A)，亦可采用快速法，后者包括血清学鉴定、聚丙烯眈胶凝胶电泳鉴定和分子生物学鉴定(见附录C)。6.3 鉴定证明原始母树未感染本标准要求不得带有的病毒病和类似病毒病害，从该母树
8、采接穗在网室内繁殖的苗木(同6.1)，即系柑楠无病毒苗木，可用作柑横无病毒品种原始材料。6.4 鉴定证明原始母树已感染本标准要求不带的病毒病和类似病毒病害，该母树要进行脱毒。7 指示植物鉴定7. 1 鉴定的病害，指示植物种类(品种)，鉴别症状，适于发病的温度和鉴定一植株所需指示植物株数见NY /T 973-2006 附录A。7.2 指示植物鉴定在用40日网纱构建的网室或温室内进行。7.3 指示植物中，Etrog香梅的亚利桑那861或861-S-1选系和凤凰袖用嫁接苗或抨插苗，其他指示植物用实生苗或嫁接苗。7.4 接种木本指示植物用嫁接接种，一般用单芽或枝段腹接，除黄龙病鉴定外，亦可用皮接。接种
9、草本指示植物用汁液摩擦接种。7.5 在每一批鉴定中，鉴定一种病害需设接种标准毒源的指示植物作正对照，设不接种的指示植物作负对照。7.6 指示植物接种时，在一个品种材料接种后，所用嫁接刀和修枝剪用1%次氯酸铀液消毒，操作人员用肥皂洗手。7.7 指示植物要加强肥水管理和病虫防治，以保持指示植物的健壮生长，并及时修剪，诱发新梢生长，加速症状表现。7.8 在适宜发病条件下，每3d10 d观察一次发病情况，在不易发病的季节，每2周4周观察一次。7.9 指示植物的发病情况，一般观察到接种后24个月为止。观察期间，如果正对照植株发病而负对照植株未发病，可根据指示植物发病与否判断被鉴定植株是否带病。在鉴定某种
10、病害的指示植物中有1株发病，被鉴定的植株即判定为带病。8 脱毒8.1 脱毒技术对己受裂皮病、木质陷孔病、顽固病、来橡丛枝病、杂色褪绿病或黄龙病感染的植株，采用茎尖嫁接法脱毒;对已受碎叶病、温州蜜柑萎缩病、衰退病、鳞皮病或石果病感染的植株，采用热处理+茎尖嫁接法脱毒。8.2 茎尖嫁接脱毒技术的操作8.2.1 茎尖嫁接在无菌条件下操作。8.2.2 陆木准备。常用帜橙或帜的种子。剥去内、外种皮，经用0.5%次氯酸纳液(加0.1%吐温20)浸10min后，灭菌水洗3次，播于经高压消毒的试管内MS固体培养基上，在27C黑暗中生长，两周后供嫁接用。8.2.3 茎尖准备及嫁接。采1cm2 cm长的嫩梢，经0
11、.25%次氯酸饷液(加0.1%吐温20)浸5min，灭菌水洗3次后切取顶端生长点连同其下2个3个叶原基，长度为0.14mm0.18 mm的茎尖嫁接于陆木，放入经高压消毒的装有MS液体培养基的试管中，在生长箱或培养室内保持27C、每天16h、1000 Lux光照和8h黑暗条件下生长。8.2.4 茎尖嫁接苗的移栽或再嫁接。试管内茎尖嫁接苗长出3个4个叶片时，可移栽于盛有消毒土壤的盆中，或将茎尖嫁接苗再嫁接于盆栽硝木上，以加速生长。8.2.5脱毒效果的确认。从茎尖嫁接苗取枝条嫁接于指示植物，或取样用快速鉴定法鉴定其感病情况，如果呈阴性反应，证明原始母树所带病原已经脱除。所需鉴定的病害种类与原始母树所
12、感染的相同。8.3 热处理+茎尖嫁接脱毒技术的操作供脱毒的植株每天在40C有光照条件下生长16h和在30C黑暗条件下生长8h，连续10d60 d 后采嫩梢进行茎尖嫁接，其他步骤与8.2同。9 柑槽无病毒晶种原始材料的网童保存9.1 网室用40目网纱构建，网室内工具专用，修枝剪在使用于每植株前用1%次氯酸铀液消毒。工NY /T 973-2006 作人员进入网室工作前，用肥皂洗手;操作时，人手避免与植株伤口接触。9.2 每个品种材料的脱毒后代在网室保存2株4株，用做柑情无病毒品种原始材料。9.3 网室保存的植株除有特殊要求的以外，采用积作陆木。9.4 网室保存植株用盆栽，盆高约30cm，盆口直径约
13、30cm。9.5 网室保存植株每年春梢萌发前重修剪一次，每隔5年6年，通过嫁接繁殖更新。9.6 网室保存植株每年调查一次黄龙病、袖矮化病和甜橙茎陷点病发生情况，每五年鉴定一次裂皮病、碎叶病、温州蜜柑萎缩病和鳞皮病感染情况。发现受感染植株，立即淘汰。10 无病毒母本园的建立与管理10.1 地点10. 1. 1 在黄龙病发生区，柑桶无病毒母本园建立在由40目塑料纱网构建的网室内，或建立在与其他柑桶种植地的隔离状况符合GB5040规定的田间。10. 1 .2 在非黄龙病发生区，柑桶无病毒母本园建立在田间，用围墙或绿篱与其他柑桶种植地隔开。10.2 无病毒母本树的种植株数每个品种材料的无病毒母本树在元
14、病毒母本园内种植2株6株。10.3 管理10.3.1 元病毒母本树启用的时间植株连续结果3年显示其品种固有的园艺学性状后，开始用做母本树。10.3.2 柑情无病毒母本树的病害调查、检测和品种纯正性观察以及处理方法。10.3.2.1 每年10月11月，调查黄龙病发生情况，调查病害的症状依据见附录B。10.3.2.2 每年5月6月，调查袖矮化病和甜橙茎陷点病发生情况，调查病害的症状依据见附录B。10.3.2.3 每隔3年，应用指示植物或RT-PCR或血清学技术检测裂皮病、碎叶病和温州蜜柑萎缩病感染情况。10.3.2.4 每年采果前，观察枝叶生长和果实形态，确定品种是否纯正。10.3.2.5 经过病
15、害调查、检测和品种纯正性观察，淘汰不符合本规程要求的植株。10.3.3 用于柑桶无病毒母本树的常用工具专用，枝剪和刀、锯在使用于每株之前，用1%次氯酸铀液消毒。工作人员在进入柑情元病毒母本园工作前，用肥皂洗手;操作时，人手避免与植株伤l口接触。11 无病毒采穗圃的建立与管理11. 1 地点11 . 1 . 1 在黄龙病发生区，元病毒采穗圃建立在由40目塑料纱网构建的网室内，或建立在与其他柑桶种植地的隔离状况符合GB5040规定的田间。11 . 1 .2 在非黄龙病发生区，元病毒采穗圃建立在田间，用围墙或绿篱与其他柑桶种植地隔开。11.2 管理11.2.1 繁殖元病毒采穗圃植株所用接穗全部采自无
16、病毒母本园。11.2.2 元病毒采穗圃植株可以采集接穗的时间，限于植株在采穗圃种植后的3年内。11.2.3 用于柑桶无病毒采穗圃的常用工具专用，枝剪在使用于每个品种材料之前，用1%次氯酸饷液消毒。工作人员在进入柑桶无病毒采穗圃工作前，用肥皂洗手;操作时，人手避免与植株伤口接触。11.2.4每年5月6月，调查袖矮化病和甜橙茎陷点病发生情况;10月11月，调查黄龙病发生情况，调查病害的症状依据见附录B，调查中发现病株，立即挖除。NY /T 973-2006 12 无病毒苗圃的建立与管理12. 1 地点12. 1 . 1 在黄龙病发生区，无病毒苗圃建立在由40目塑料纱网构建的网室内，或建立在与其他柑
17、桶种植地的隔离状况符合GB5040规定的田间。12.1.2 在非黄龙病发生区，无病毒苗圃建立在田间，用围墙或绿篱与其他柑桶种植地隔开。12.2 管理12.2.1 繁殖苗木所用接穗全部来自元病毒采穗圃或无病毒母本园。12.2.2 用于柑楠无病毒苗圃的常用工具专用，枝剪和嫁接刀在使用于每个品种材料之前，用1%次氯酸铀液消毒。工作人员在进人柑情元病毒苗圃工作前，用肥皂洗手;操作时，人于避免与植株伤口接触。12.2.3 苗木出圃前，调查黄龙病、袖矮化病和甜橙茎陷点病发生情况，调查病害的症状依据见附录B，发现病株，立即拔除。5 NY/T 973-2006 附录A(规范性附录)应用指示植物鉴定柑桶病毒病和
18、类似病毒病害的标准参数病害指示植物种类鉴别症状适于发病的温度鉴定-植株所需(品种)(C ) 指示植物株数裂皮病Etr啤香橡的亚利桑那嫩叶严重向后卷27-40 5 861或861-&1选系碎叶病Rusk积橙叶部黄斑、叶缘缺损18-26 5 黄龙病槛柑或甜橙叶片斑驳型黄化27-32 10 袖矮化病凤凰袖茎木质部严重陷点18-26 5 甜橙茎陷点病madam vinous甜橙茎木质部严重陷点18-26 5 温州蜜柑萎缩病白芝麻叶部枯斑18-26 10 鳞皮病凤梨甜橙、m也mvmous 叶脉斑纹，有时春季嫩梢18-26 5 甜橙、dweet榻橙迅速枯萎(休克)顽固病madam vinous甜橙新叶小，
19、叶尖黄化27-38 10 木质陷孔病用快速生长的时木嫁接嫁接口和第-次重剪后27-40 5 的parson专用桶分枝处充胶石果病dweet楠橙、凤梨甜橙、橡叶症18-26 5 madam vinous甜橙来穰丛枝病墨西哥来橡芽异常萌发引起的枝叶27-32 10 丛生杂色褪绿病伏令夏橙、哈姆林甜橙叶正面褪绿斑，相应反面27-32 10 褐色胶斑6 NY IT 973-2006 附录B规范性附录田间应用目测法诊断黄龙病、抽矮化病和甜橙茎陷点病的症状依据病害症状依据黄龙病叶片转绿后从叶脉附近和叶片基部开始褪绿，形成黄绿相间的斑驳型黄化发病初期，树冠上部有部分新梢叶片黄化形成的黄梢袖矮化病小校木质部陷
20、点严重，春梢短、叶片扭曲甜橙茎陷点病小校木质部陷点严重，小校基部易折裂，叶片主脉黄化，果实变小附录C资料性附录)应用快速法鉴定柑槽病毒病和类似病毒病害方法病害A蛋白酶联免疫吸附法温州蜜柑萎缩病血清学双抗体夹心酶联免疫吸附法碎叶病、鳞皮病双向聚丙烯酷胶凝胶电泳裂皮病和木质陷孔病多聚酶链式反应黄龙病、来橡丛枝病和杂色褪绿病分子生物学反转录多聚酶链式反应裂皮病、木质陷孔病、衰退病和鳞皮病半巢式反转录多聚酶链式反应碎叶病7 CON-SHMZ 中华人民共和国农业行业标准柑桶无病毒苗木繁育规程NYIT 973一2006中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码:100026 网址:) 中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销争舍关当&9号* * 印张0.75字数7千字2006年4月北京第1次印刷印数:1-1000册定价:10.00元开本880mmx 1230mm 1116 2006年4月第1版书号:16109 602 版权专有侵权必究举报电话:(010) 65005894 NY7T973二2006
