1、ICS 67.050 B 50 :才叶|中华人民共和国水产行业标准SC/T 3018-2004 水产品中氯霉素残留量的测定气相色谱法Determination of chloramphenicol residues in fishery products Gas chromatography 2004-01-07发布2004-03-01实施中华人民共和国农业部发布中华人民共和国水产行业标准水产晶中氯理素残留量的测定气相色谱法SC/T 3018-2004 * * * 中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码:100026 网址:) 中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发
2、行各地新华书店经销争e* 快开本880mmX1230mm 1/16 印张0.5字数5千字2004年2月第1版2004年2月北京第1次印刷书号:16109. 305 印数:1-1 000册定价:6.00元版权专有侵权必究举报电话:(010) 65005894 SC/T 3018-2004 前言本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准起草单位:国家水产品质量监督检验中心。本标准主要起草人:冷凯良、李兆新、李晓J11、王联珠、瞿毓秀、陈远惠。I 水产品中氯霉素残留量的测定气相色谱法1 范围本标准规定了水产品中氯霉素残留量的气相色谱测定方法。本标准适用于水产品可食部分中氯霉素残留量的检测。2 规范性引
3、用文件SC/T 3018-2004 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBf 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理样品经乙酸乙酣提取并浓缩，提取物溶于水，用正己皖脱脂，C8固相萃取柱净化，硅:皖化试剂衍生化后，用配有电子捕获检测器的气相色谱仪测定，外标法定量。4 试剂所有试剂在氯霉素出峰处应元干扰峰，最好选择优级纯或色谱纯试剂。4. 1 氯霉素标准品:纯度关99%。4
4、.2 甲醇:色谱纯。4.3 乙酸乙醋:色谱纯04.4 正己皖:优级纯。4.5 氯仿:分析纯。4.6 乙睛:色谱纯。4.7 无水硫酸铀:分析纯，650C灼烧4h，冷却后贮于密闭容器中备用。4.8 氧化铀:分析纯。4.9 4%氯化铀溶液:称取氯化纳20g，加水溶解，稀释到500mLo 4.10氯霉素标准溶液:准确称取氯霉素标准品0.0250 g，用甲醇溶解并定容至50mL，配成浓度为500g/mL的标准贮备液，置4C冰箱中保存，保存期不超过3个月。临用前，取此贮备液，用甲醇稀释成浓度为0.100周/mL的标准工作液。注:通常的玻璃器皿恍涤程序对于从玻璃表面除去痕量氯霉素不总是很有效的，建议使用甲醇
5、淋洗所有玻璃器皿，以避免污染问题。4. 11 衍生化试剂:N，。双(三甲基硅皖基)三氟乙酷胶(BSTFA)/三甲基氯硅皖(TMCS)体积比例:10 4.12 水:实验用水应符合GB/丁6682中级水标准。5 仪器实验室常规仪器、设备及下列各项。5.1 气相色谱仪:配63Ni电子捕获检测器。5.2 电子天平:感量0.0001 go SC/T 3018-2004 5.3 均质机。5.4 离心机。5.5 旋涡氓合器。5.6 电热恒温水浴锅。5.7 旋转蒸发器。5.8鸡心瓶:50mL、100mL，细口。5.9 玻璃离心管:50mL。5.10 刻度离心管:5mL，具塞。5. 11 氮吹仪。5.12 C1
6、8固相萃取柱，填料300mgo 5.13 SPE固相萃取装置。5.14 元水硫酸锅柱:砂芯玻璃层析柱中装无水硫酸纳5go 6 色谱条件6.1 色谱柱:DB-5石英毛细管柱，固定相:SE-54 (聚甲基苯基乙烯基硅氧烧), 30 m x 0.53 mm x 0.5 m;或与之相当的色谱柱。6.2 载气:氮气，线速度29cm/so 6.3 进样口温度:260c。6.4 温度程序:初始柱温150C，维持1min , 15 c Imin升至260C，维持10min或直到氯霉素已经流出，然后设定30c Imin升至280C，维持5min，以确保所有的样品已经流出。6.5 检测器温度:300c。6.6 进
7、样方式及进样量:无分流方式进样，1!lLo 6.7 检测器.63Ni电子捕获检测器。7 测定步骤7. 1 样品预处理鱼去鳞、皮，沿背脊取肌肉;虾去头、壳、附肢，取可食肌肉部分;蟹、中华鳖等取可食肌肉部分;样品切为不大于0.5cmXO.5 cmxO.5 cm的小块后混匀，放置冰箱中冷冻贮存备用。7.2 提取将样品解冻，称取样品5g(精确到0.001g)，置于50mL玻璃离心管中，加入乙酸乙醋20mL，均质机均质1min，分散均匀，提取氯霉素，4000r/min离心3min，将乙酸乙醋层转移到100mL细口鸡心瓶中。再向离心管中加乙酸乙醋10mL，用原均质机均质混合1min , 4 000 r/m
8、in离心3min，合并乙酸乙醋提取液于100mL细口鸡心瓶中，于40c水浴中减压旋转蒸发至干。注:均质机清洗方法，先用大量水浸洗，再用甲醇浸洗，最后用蒸馆水浸洗。7.3 脱脂净化向鸡，心瓶中加1mL甲醇旋涡混合溶解残留物，再加人15mL正己皖和25mL 4%氯化纳溶液，盖塞振荡?昆合1min，充分氓合提取脂肪，转移到另一50mL离心管中，4000r/min的速度离心2min，除去上层正己皖相并弃去。再向水相中加lOmL正己皖，重复提取一遍，弃去正己皖相。水相中加人15mL乙酸乙醋，旋涡说合器混合2min , 3 000 r/min离心3min，吸取乙酸乙醋层，经过无水硫酸铀柱脱水过滤于50mL
9、鸡心瓶中。再向水相中加人5mL乙酸乙酶，重复上述操作。用少量乙酸乙醋淋洗无水硫酸铀柱，合并提取液于50mL鸡心瓶中，在40c水浴中减压旋转蒸发至干。对SC/T 3018-2004 于大部分样品，到此步骤净化效果已可达到要求，对于净化不完全的样品可经C18固相萃取柱进一步净化。加人2mL乙酸乙醋溶解提取物并转移于5mL具塞离心管中，用1mL乙酸乙醋洗涤鸡心瓶，合并乙酸乙醋，于50c 55 c的砂浴中吹氮蒸发至近干，再用1mL乙酸乙醋洗涤离心管壁井吹干。注意防潮。7.4 C18柱净化注意:以下步骤必须连续做完，切莫让吸附剂变干。给每个样品准备一根Cl8柱，顺序用5mL甲醇、5mL氯仿、5mL甲醇和
10、5mL水淋洗活化C18柱，弃掉洗涤液。用5mL体积分数为5%的乙睛水溶液恪解7.3中在40c水浴中减压旋转蒸发至干的提取物，吸取水溶液装人C18柱过柱，弃掉流出液。注意流速保持每秒一滴，否则净化效果和回收率都较差。用1mL水淋洗鸡心瓶2遍，并将淋洗液加人Cl8柱过柱，弃掉流出液。用5mL水淋洗C18柱，让洗涤液完全流出C18柱，用微氮吹干O用乙腊将C18柱中的氯霉素洗脱，洗脱2次，每次1.5mL，合并洗脱液于5 ml具塞离心管中O在温度50c 55 c的砂浴中，用氮气吹除乙睛至近干，再用1mL乙睛洗涤离心管壁并用氮气吹干。注意防潮。7.5 衍生化7.5.1 试样的衍生化向干的残留物中加100L
11、衍生化试剂，盖塞并旋涡混合10s，在70c烘箱中反应30mino再在50 c 55 c砂浴中，用氮气流吹除多余的试剂，至样品管刚好吹干为止(注意:此步过长的吹干时间可导致丢失分析物)。加入0.5mL正己烧，旋涡混合10s，供气相色谱分析用O7.5.2 标准工作液的衍生化取适量标准工作液于5mL具塞离心管中，在温度50c 55 c的砂浴中，用氮气吹除溶剂至干。以下按7.5.1的步骤操作。7.6 样晶测定分别注入1L适当浓度的氯霉素标准硅皖化衍生物溶液及样品提取物硅皖化衍生物溶液于气相色谱仪中，按上述色谱条件进行色谱分析，记录峰面积，响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据标准样品的保留时间定性，
12、外标法定量。7.7 计算样品中氯毒素的含量按公式(1)计算。V一-m s-C一-s -A A-X 、自， 凰/，t、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 式中:X一一样品中氯霉素含量，单位为微克每千克(g/kg); Cs一一标准衍生物溶液相当氯霉素含量，单位为纳克每毫升(ng/mL); A一一试样液中氯霉素衍生物的峰面积或峰高，单位为微伏秒或毫米(VS或mm);V 样品提取物衍生化洛液体积，单位为毫升(mL);As一一氯霉素标准衍生物的峰面积或峰高，单位为微伏秒或毫米(VS或mm);m一一-样品质量，单位为克(g)。注:计算结果需扣除空白值。8 方法回收率标准添加浓度为0.1g/kg20.0g/kg时，回收率二三70%。3 叮CON-5的HumSC/T 3018-2004 方法检测限9 本方法检测限:0.3glkgo允许差10 两次平行测定结果相对偏差运15%。方法的线性范围11 本方法的线性范围:标准衍生物榕液相当氯霉素浓度为0.5ng/mL250 ng/mL。书号:16109. 305 定价:6.00元版权专有侵权必究举报电话:(010) 65005894 争毛sc厅3018-2004
