1、lCS 67.050 B 50 :才叫中华人民共和国水产行业标准SC/T 3023一2004麻痹性贝类毒素的测定生物法Determination of paralysis shellfish poison Bioassay 2004-0个07发布2004一03-01实施中华人民共和国农业部发布SC/T 3023-2004 前言本标准参考了美国公职分析化学家协会公定分析方法(AOAC, 1995年版)中959.08麻痹性贝类毒素生物法。本标准的附录A、附录D为资料性附录，附录B、附录C为规植性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准起草单位:国家水产品质量监督检验中心、中国水产科学研究院东
2、海水产研究所。本标准主要起草人:王联珠、袁琪、李晓;、陈亚瞿、冷凯良、蒋玫。SC/T 3023-2004 麻痹性贝类毒素的测定生物法1 范围本标准规定了麻痹性贝类毒素(PSP)的测定方法一一生物法。本标准适用于软体动物贝类可食部分中麻痹性贝类毒素(PSP)的测定，其他贝类食品中PSP的测定可参照执行。2 原理根据小鼠注射贝类抽取液后的死亡时间，查出鼠单位，并按小鼠体重，校正鼠单位，计算确定每100g贝肉内的PSP的含量。所测定结果代表存在于贝肉内各种化学结构的麻痹性贝类毒素的总量。3 定义下列定义适用于本标准。鼠单位mouse unit,MU 对体重为20g的小鼠腹腔注射1mL麻痹性贝类毒素后
3、，小鼠在15min时死亡所需的最低毒素量。4 试剂4.1 盐酸溶液:0.1mollLo 4.2 盐酸溶液:5mollL。4.3 氢氧化铀溶液:0.1mollL。4.4 麻痹性贝类毒素(Saxitoxin)标准溶液:100周/mL，经酸化，含有20%的乙醇作为保护剂，冷藏保存，无限期稳定。5 仪器和设备5.1 均质器。5.2 天平(感量0.1g)。5.3 离心机。5.4 pHt十。5.5 秒表。5.6 玻璃皿:烧杯、量筒、容量瓶、搅拌棒等。5.7 注射器:1mL。5.8 注射器针头:俨。5.9 小鼠:体重为19g21 g的健康ICR系雄性小鼠，若体重21g，查表C.1的校正系数便可得到实际的死亡
4、时间，体重23g或己用过的小鼠则不能使用。6 ICR系小鼠毒性单位的确定6.1 PSP工作标准溶液用移液管取100/4S/mL缸xitoxin标准液1mL于100mL容量瓶中，加入用盐酸酸化至pH为3的蒸锢SC/T 3023-2004 水并定容。该液为11-45/mL s3.力toxin标准液，pH在2.04.0之间。在3C4C条件下能稳定数周。6.2 测定用标准溶液分别用lOmL、15mL、20mL、25mL和30mL水稀释10mL浓度为1g/mL的Saxitoxin标准液，稀释液的pH应为24o6.3 中值死亡时间的标准液选择6.3.1 将按6.2配制的各浓度的标准稀释液各1mL腹腔注射小
5、鼠数只，选择中值死亡时间为5min7min的浓度。如某浓度稀释液已达到要求，还需以1mL水的增减量进行补充稀释试验。例如:用25mL水稀释的lOmL标准液在5min7 min杀死小鼠，还需进行24mL十10mL和26mL+ 10 mL的稀释度的试验。6.3.2 先将小鼠称重(精确到0.5g)，以10个小鼠为一组。用中值死亡时间在5min7min内的各种浓度的标准稀释液两份(最好是兰份)注射小鼠，测定并记录每只小鼠腹腔注射完毕至停止呼吸的所需死亡时间。6.3.3 记录注射完毕至死亡时间的最短间隔为5s，即7s记为5s,8 s记为10s(见附录B)o6.4 毒素转换系数(CF)的计算6.4.1 小
6、鼠中值死亡时间的选择若注射某浓度标准稀释液的10只小鼠中值死亡时间7min则弃去该组结果;若注射另一浓度标准稀释液的10只小鼠中值死亡时间在5min7 mi口，即使个别小鼠死亡时间7mln，也应使用该组的数据。但是若注射某浓度标准稀释液后，10只小鼠中有3只以上存活，则要另取10只小鼠进行重复试验。6.4.2 校正鼠单位(A)根据注射毒素后中值死亡时间为5min7min的10只小鼠的个别死亡时间，由附录B分别查出鼠单位(M)，再由附录C查出小鼠的重量校正因子(是)，每毫升标准稀释液的校正鼠单位(A)按公式(1)计算。式中:A一一校正鼠单位(MU);M一一鼠单位(MU);走一一小鼠的重量校正因子
7、。6.4.3 毒素转换系数(F)毒素转换系数(F)按公式(2)计算。A=kXM . (1) F=C/A . (2) 式中:F一一毒素转换系数:C一一每毫升实际毒素含量(gSAX/r止); A一一校正鼠单位(MU)。6.4.4 计算每组10只小鼠的平均毒素转换系数值CJ)，再计算各组间的平均毒素转换系数值(F)，并以此为标准做常规检测。6.5 毒素转换系数(F)值的定期检查6.5.1 如PSP检测间隔时间较长，每次测定时要用适当的标准稀释液注射5只小鼠，重新测定F值。如果周有几次检测，则用中值死亡时间5min7 min的标准稀释液每周检查一次，测得的F值应在原测定主值的:t20%范围内。6.5.
8、2若结果不符，用同样的标准稀释液另外注射5只小鼠，综合先前注射的5只小鼠结果，算出y2 SC/T 3023-2004 值。并用同样的标准稀释液注射第二组10只小鼠，将第二组求出的I值和第一组的j值进行平均，即为个新的F值。6.5.3 重复检查的F值通常在原结果的120%之内，若经常发现有较大偏差，在进行常规检测前应调查该方法中是否存在未控制或未意识到的可变因素。7 样晶的测定7.1 检样的制备7.1.1 牡蜻、蛤及贻贝用清水彻底洗净贝类外壳，切断闭壳肌，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙及其他外来杂质，仔细取出贝肉，切勿割破肉体。收集贝肉沥水5min(避免D1肉堆积)，捡出碎壳等杂物，将贝肉均质。开
9、壳前不能加热或用麻醉剂。7.1.2扇贝取可食部分(闭壳肌)用作检测。沥干及均质过程同7.1.1的规定。7.1.3 贝类罐头将罐内所有内容物(包括贝肉组织及汁液)于均质器中均质。大容量的罐头，则过滤分离贝肉及汁液，分别称重，将固形物和汤汁按比例混合，充分均质。7. 1. 4 冷冻贝类在室温下，使冷冻的样品(带壳或脱壳的)呈半冷冻状态，按7.1.1规定的方法清洗、开壳、淋洗、取肉、均质。7.2 提取7.2.1 取100g按7.1处理的样品于800mL烧杯中，加0.1mollL HCl溶液100mL充分搅拌，检查pH(pH应为2.04.0)。需要时，可逐滴加人5mollL HCll容液或O.1 mo
10、l/L NaOH溶液调整pH，加碱时速度要慢，同时需不断搅拌，防止局部碱化破坏毒素。7.2.2 将氓合物加热，并徐徐煮沸5min，冷却j至室温，调节pH至2.04.0(切勿4.5)。将混合物移至量筒中并稀释至200mL。7.2.3 将泪合物倒回烧杯，搅拌至均质状，使其沉降至上清液呈半透明状，不能堵塞注射针头即可，必要时将提合物或上清液以3000r/min离心5min，或用滤纸过滤。保留进行小鼠注射用的足量攘体。7.3 小鼠试验7.3.1 以感量为0.1g的天平将小鼠称重并记录重量。每个样品注射3只小鼠。7.3.2 对每只试验小鼠腹腔注射1mL提取液。注射时若有一滴以上提取液溢出，须将该只小鼠丢
11、弃，并重新注射一只小鼠。7.3.3 记录注射完毕时间，仔细观察并用秒表记录小鼠停止呼吸时的死亡时间(到小鼠呼出最后一口气止)。7.3.4 若注射样品原液后，1只或2只小鼠的死亡时间大于7min，则需再注射至少3只小鼠以确定样品的毒力。7.3.5 若小鼠的死亡时间小于5min，则要稀释样品提取液后，再注射另一组小鼠(3只)，得到5min7min的死亡时间;稀释提取液时，要逐滴加入0.1mol/L或0.01mollLHCI溶液，调节pH至2.04.0。8 结果的计算与判断8.1 毒力的计算8. 1 . 1 根据小鼠的死亡时间，在附录B中查出相应的每毫升注射液的鼠单位数M，将存活鼠的死亡时3 SC/
12、T 3023-2004 间视为大于60min即相当于:21g，则根据附录C查出重量校正系数走。8. 1. 3 样品中PSP的含量按公式(3)计算。2.k,M x=一斗xDx200式中:X一样品中PSP含量，每百克样品中鼠单位(MU/I00g); 扎一-每只小鼠的重量校正系数;M，一一每只小鼠的鼠单位数，鼠单位(MU);D一一样品提取液的稀释倍数;200-样品量，克(g)。8.2 毒力单位转换样品中的毒力单位按公式(4)计算。. (3) FX80g/100 g= 400 MU/100 g . (4) 4 式中:F一一毒素转换系数:80g/100 g一一样品中PSP限量(问/100g); 400
13、MU/I00 g一-一样品中PSP限量(MU/100g)。SC/T 3023-2004 附录A(资料性附录)麻癖性贝类毒素标准物质的浓度及毒性A.l 加拿大海洋研究所麻痹性贝类毒素标准物质的浓度A. 1. 1 石房蛤毒素(STX)的浓度:140月/mLoA.l.2 新石房蛤毒素(Neo)的浓度:140周/mLoA.l.3 膝沟藻毒素1(GTX-1)的浓度:74g/mLoA.l.4 膝沟藻毒素2(GTX-2)的浓度:120g/mLo A.l.5 膝沟藻毒素3(GTX-3)的浓度:29问/mLoA.1.6 膝沟藻毒素4(GTX-4)的浓度:32g/mLo以上6种毒素分别贮存于4个安瓶瓶中，每个安瓶
14、中有0.2mL挥手解于0.1mc】lIL醋酸的各种毒素标准。A.2 麻痹性贝类毒素备成分的毒性强度麻痹性贝类毒素各成分的毒性强度见表A.lo表A.l麻痹性贝类毒素备成分的毒性强度成分毒性相对于STX的毒性lg 5总xitoxin8.3 100 ?咱仅览axitoxin7.3 88 GTX-l 6.0 72 GTX-2 2.3 28 GTX-3 4 48 GTX-4 4.4 53 GTX-5(Bl) 0.42 5.1 GTX-6(B2) 0.27 3.3 C-l 0.03 0.36 C-2 0.5 60 C-3 0.07 。.8C-4 0.29 3.5 dc-STX 5.0 60 dc-Neo
15、4.7 57 dc-GTX-l 3.7 45 dc-GTX-2 4.6 55 dc-GTX-3 5.3 64 dc-GTX-4 3.7 45 5 SC/T 3023-2004 附录B(规范性附录)麻痹性贝类毒素死亡时间一鼠单位的关系表B.l麻痹性贝类毒素死亡时间一鼠单位的关系时间a鼠单位时司a鼠单位时间a鼠单位h矶JMU 岛仅J1: 00 100 30 2.98 6: 00 1. 60 10 66.2 35 2.88 15 1. 54 15 38.3 40 2.79 30 1. 48 20 26.4 45 2.71 45 1.43 25 20.7 50 2.63 30 16.5 55 2.56
16、 7: 00 1. 39 35 13.9 : 15 1. 35 40 11.9 4: 00 2.50 30 1. 31 45 10.4 05 2.44 45 1. 28 50 9.33 10 2.38 55 8 .42 15 2.32 8: 00 1. 25 20 2.26 15 1. 22 2: 00 7.67 : 25 2.21 30 1. 20 05 7.04 30 2.16 45 1. 18 10 6.52 35 2.12 15 6.06 40 2.08 9: 00 1. 16 20 5.66 45 2.04 30 1. 13 25 5.32 50 2.00 30 5.00 55 1.
17、 96 10: 00 1. 11 35 4.73 30 1. 09 40 4.48 5: 00 1. 92 45 4.26 05 1. 89 11: 00 1. 075 50 4.06 10 1. 86 30 1. 06 55 3.88 15 1. 83 20 1. 80 12: 00 1. 05 3: 00 3.70 30 1. 74 05 3.57 40 1. 69 13: 00 1. 03 10 3.43 45 1. 67 15 3.31 50 1. 64 14: 00 1. 015 20 3.19 25 3.08 15: 00 1. 000 6 SC/T 3023-2004 表B.l(
18、续)时间a鼠单位时间a鼠单位时间a鼠单位L饥Jh饥JMU 16:00 0.99 21:00 0.954 30:00 0.917 17:00 0.98 22:00 0.948 40:00 0.898 18:00 0.972 23:00 0.942 60:00 0.875 19:00 0.965 24:00 0.937 20:00 0.96 25:00 0.934 以分秒表示。7 SC/T 3023一2004小鼠重g 10 10.5 11 11.5 12 12.5 13 13.5 14 14.5 15 15.5 16 16.5 17 17.5 18 18.5 19 19.5 20 20.5 21
19、21. 5 22 22.5 23 8 附录(规范性附录)小鼠体重校正表表C.l小鼠体重校正表小鼠的重量校正因子(是)0.50 0.53 0.56 0.59 0.62 0.65 0.675 0.70 0.73 0.76 0.785 0.81 0.84 0.86 0.88 0.905 。.930.95 0.97 0.985 1. 000 1.015 1. 03 1. 04 1. 05 1. 06 1. 07 SC/T 3023-2004 附录D资料性附录)本标准与AOAC959.08: 1995方法的技术差异及原因表D.l为本标准与美国公职分析化学家协会公定分析方法hAOAC，1995年版)中95
20、9.08麻痹性贝类毒素生物法方法的技术差异及原因一览表。表D副1本标准与AOAC959.08的技术差异及原因本标准的章条技术性差异原因封面、前言、标准的全文原方法标准的格式与此完全不同标准格式采用GB/T1.1-2000的规定文字叙述中有部分改动，将原文中按GB/T1. 1-2000的要求，将标准条6章8章文细化，使其更有逻辑性、更有条理，使用的大段文字修改为逐条叙述便捷6、8章中的公式对标准中的计算公式的格式进行了公式的格式采用由IT1.1-20叫规简化，用字母代替具体的内容定，便于标准使用者计算数据冷冻贝类是贝类中的一大类产品，对此7. 1.4 增加了对冷冻贝类样品的制备类产品的规定，能规
21、范标准使用者的操作过程8.2 将原标准中当最终样品中含有的因为此规定不是本标准的范畴，另有产PSP 80g/1g，或PSP400MU/ 品标准或安全限量标准对此规定，本标准100g时，则此贝类产品不适合人类食中列出这两种毒力不同表示单位之间的用。的规定取消，改为毒力转换单关系，便于计算、转换位，以公式计算，Fx 80阅1100g = 400岛饥J/I00g 式中:F一毒素转换系数80罔1100g-一一样品中PSP限量(gl100 g) 400 MU 1100 g-一一样品中PSP限量，(MU/I00 g) 9 寸8N|的NOmHum中华人民共和国水产行业标准麻痹性贝类毒素的测定生物法SCf 3023-2004 中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)今奇快长网址: 中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销(邮政编码:100026 争祷祷字数14千字印张l开本880mmx 1230mm 1116 2004年2月北京第1次印刷印数:1-1 000册定价:10.00元版权专有侵权必究举报电话:(010) 65005894 2004年2月第1版书号:16109. 307 SC!T 3023-2004
