1、ICS 11.020 c50 备案号:15860-2005 明F中华人民共和国卫生行业标准WS/T 244-2005 血小板计数参考方法Reference method for platelet counting 2005-0508发布2005-1201实施叶空头民主主乓不口l丑I主组主音发布前言为了保证血小板的计数结果具有溯洒、性和准确性，特制定本标准。本标准从2005年12月1日起实施。本标准由卫生部提出。本标准起草单位:卫生部临床检验中心。本标准主要起草人:彭明婷、申子瑜、陆红、谷小林、杨振华。本标准由卫生部负责解释。WS/T 244-2005 血小板计数参考方法1 范围本标准规定了血小
2、板计数参考方法的技术要求。本标准适用于血小板计数参考方法的建立。2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。参考方法CReferencemethod) WS/T 244-2005 一种可清楚和准确描述的用于特定检测的技术，该技术要有依据，可提供足够准确和精密的实验数据以评价其他实验方法检测结果的有效性。若有决定性方法，参考方法的准确性必须与决定性方法进行比较。参考方法应溯源至一级计量标准并且须标示不准确度和不精密度。3 总则3. 1 本标准采用间接法计数血小板CPlatelet，PLT)。即用荧光标记PLT后，用流式细胞仪检测红细胞CRedblood cell，RBC)和PLT的比值，同时用单通
3、道阻抗原理的半自动细胞计数仪准确计数RBC，用RBC除以RBC和PLT的比值得出PLT的计数值。3. 2 为了保证参考方法检测结果的精密度和准确性，建立参考方法的实验室必须进行比对。4 血小板计数参考方法的原理首先将EDTA抗凝血标本用无菌缓冲液进行预稀释，再用特定的荧光抗体对PLT进行染色。悔液中己染色的血小板被稀释成计数浓度，用由式细胞仪检测血小板和红细胞，根据荧光强度和散射光强度将阔值设在可从RBC中区分PLT的位置，以检测出RBC和PLT的比值。用RBC的计数值除以RBC/PLT的比值计算出PLT计数值自5 血标本5. 1 用合乎要求的塑料注射器或真空采血系统采集健康人的静脉血标本。5
4、.2标本的收集要求使用EDTA二悍为抗凝剂，抗凝剂的榷度为3.7至5.4mol/ml血(1.5 2. Zmg/ml血)。5.3 盛有标本的试管应有足够的剩余空间以便于血标本的泪匀操作。5.4 标本中不能有肉眼可见的榕血或小凝块。5.5 标本置于18.C2Z0C室温条件下，取血后4小时之内完成检测E5.6 为了保证RBC和PLT分布的均一性，在预稀释和加标记抗体前动作轻柔地将采血管反复颠倒，充分混匀标本。6 容器和器皿为避免血小板黠附于储存容器或稀释器皿上，在标本检测的整个过程中必须使用聚丙烯或聚苯乙:精容器，不得使用玻璃容器和器皿。7 仪器的性能7. 1 使用流式细胞仪，通过前向角散射光和荧光
5、强度来检测PLT和RBC。仪器在检测异硫靠在酸荧光l WS;T 244-2005 素标i己的直径为2m的球形颗粒时必须有足够的敏感度。7. 2 用半自动、单通道、阻抗原理的细胞计数仪检测RBC，仪器小孔管的直径为80100m，小孔的长度为直径的70%100%，计数过程中股人稀释标本体积的准确度在1%以内(溯掘至国家或国际计量标准)。8 试剂8. 1 稀释液用磷酸盐缓冲破(PBS)作为稀释液，推度为O.Olmol/L, pH值7.27. 4，含O.1归的牛血清白蛋白CBSA) ，配制方怯如下:8. 1. 1 将1.15g元翩翩二铀CNg附号:;二化学分析:努晴为142.0)加到约750ml去离子
6、水或蒸惰水中并使之梅解巳8. 1. 2向210mg纯，分子量为58.44) , 去离子水或蒸情水至18. 1. 3用1ij;8. 2染液9. 1月1在中。9.2加5i9. 3 15分钟后，和RBC充分氓匀。9. 4用流式细胞规保证每秒计数少于3为RBC-PLT重叠，直方图或点图均可10 RBC浓度的计数浩据中华人民共和国卫生行业标准11 血小板计数值的确定使用流式细胞仪确定RBC/PLT的比值R=RBC/PLT 用RBC数除以R值得到PLT计数值12 重叠Og氧化铀CNaCl;化学分析Og BSA的混合物中加入自nb/illa复合够高的血小板的析，将血/J叶反从PB&BSA稀释5分钟。混匀以保
7、证PLT式细胞仪的设定必的荧光信号应被视和白细胞计数参考方法。一旦设定了理想的检测条件，则不绩再次进行重叠计数的校准。2 WS/T 244-2005 13 示精密度血小板检测结果的不精密度CCV)要求3%。3 町CON-寸寸N伊旨dr国华人民共和卫生行业标准血小板计数参考方法WS/T 244 - 2005 中印张:O. 75 2006年5月第1版第l次印刷* 出版发行:人民卫生出版社(中继线67616688) 地址:(100078)北京市丰台区方庄芳群园3区3号楼网址:http:/w.仰.pmph. com E回mail: 印刷:北京新丰印刷厂经销:新华书店开本:880 x 1230 字数.15千字版次:26年5月第1版书号.14117 .7 定价:4.元著作权所有，请勿擅自用本书制作各类出版物，违者必究(凡属印装质量问题请与本社销售部联系退换)1/16 ws厅244四2005
