1、ICS 65. 160 X 87 备案号:17296-2006 中华人民共和国烟草行业标准YC/T 202-2006 烟草及烟草制品多酣类化合物绿原酸、蔑若亭和芸香苦的测定Tobacco and tobacco products一Determinationof polyphenols一Chlorogenic acid , scopletin and rutin 2006-02-23发布2006-03-01实施国家烟草专卖局发布060831000094 本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由国家烟草专卖局提出。前本标准由全国烟草标准化技术委员会(TC144)归口。本标准起草单位:中国烟草总
2、公司郑州烟草研究院、中国烟草标准化研究中心。本标准主要起草人:谢复炜、李栋、王异、吴鸣。YCjT 202-2006 I 1 范围烟草及烟草制品多酣类化合物绿原酸、荒薯亭和芸香昔的测定YC/T 202-2006 本标准规定了烟草和烟草制品中三种多酣(绿原酸、莫若亭和芸香背)的测定方法。本标准适用于烟草和烟草制品。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 560
3、6. 1卷烟第1部分:抽样GB/T 19616 烟草成批原料取样的一般原则(GB/T19616-2004 , ISO 4874:2000 ,MOD) YC/T 31 烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法3 原理用50%甲醇水溶液萃取烟草和烟草制品中的多酣类化合物，萃取液经0.45m滤膜过波、后，通过高效液相色谱(HPLC)定量分析检测其中三种多酣类化合物的含量。4 试荆除特别要求以外，均应使用分析纯级试剂，水应为蒸馆水或同等纯度的水。去离子水(R5M .Q, 使用前经0.45m滤膜过滤)。4. 1 去离子水(R5M，Q)。4.2 甲醇:色谱纯。4.3 乙酸:分析纯。4.4 绿原酸(纯度97
4、%)。4. 5 1it若亭(纯度97%)。4.6 芸香昔(纯度97%)。4. 7 萃取溶液:制备1+1(体积分数)的甲醇(4.2)十水(4.1)溶液。4.8 多酣标准榕液4.8. 1 一级标准溶液在50mL烧杯中称量100mg左右绿原酸(4.4)、5mg左右莫若亭(4.5)、100mg左右芸香昔(4. 6) ，准确至0.1mg，加入约30mL甲醇(4.2)完全溶解后，转移到100mL的容量瓶中，加萃取溶液(4. 7)稀释至刻度(一级标准溶液贮存条件:40C冰箱内可保存3个月)。4.8.2 二级标准溶液将10mL一级标准榕液(4.7.1)移至100mL容量瓶中用萃取溶液(4.7)稀释至刻度。4.
5、9 多酣校准溶液:分别准确移取1mL、2mL、5mL二级标准溶液(4.8.2)，1mL、2mL、5mL一级标准溶液(4.7.1)至100mL容量瓶中用萃取溶液(4.7)稀释至刻度，此六个标准溶液以及二级标准溶液(4.8.2)为系列标准校准溶液(多酣校准溶液应在使用前配制，不能长时间保存)。YC/T 202-2006 5 仪器常用实验仪器以及下述各项。5. 1 分析天平:感量0.1mg。5.2 高效液相色谱仪:具有柱温箱、梯度洗脱功能、紫外检测器和自动进样器(自动进样器为可选件)。推荐色谱柱:250 mmX4. 6 mm色谱柱，固定相Cl8填料粒度5m。5.3 水相洁、膜:0.45mo5.4 超
6、声波振荡器。6 分析步骤6. 1 抽样按GB/T5606. 1和GB/T19616抽取样品。6.2 烟草样晶制备按YC/T31制备试样，测定水分含量。6.3 测定次数每个样品应平行测定两次。6.4 样品分析6.4. 1 样晶萃取称取100mg左右样品，准确至0.1mg.置于50mL锥形瓶内，再准确加入20.0mL 50%甲醇十水溶液，置于超声波振荡器(5.4)超声(频率:40kHz)提取20mino取约2mL萃取液经O.45m的水相滤膜过滤。6.4.2 高效液相色谱仪按照仪器说明书对高效液相色谱仪进行操作。较适合的色谱条件如下:流动相A:水十甲醇十乙酸=88+10+2(体积分数)流动相B:水十
7、甲醇十乙酸=10+88+2(体积分数)柱温:30oC柱流量:1 mL/min 进样体积:10L梯度:0min: A: 100% 16.5 min: A:80% .B:20% 30 min: A:20% .B:80% 检测器:检测波长:340nm 分析时间约为40min。典型烟草样品色谱图参见图A.2。6.4.3 测定参比波长:480nm 用高效液相色谱测定一系列多酣校准榕液(4.的，得到三种多酣的积分峰面积，用峰面积作为纵坐标，多酣浓度作为横坐标分别建立三种多酣的校正曲线。对校正数据进行线性回归(R20.99)。然后测寇烟草萃取样品，从样品中多酣的峰面积计算每一个烟草萃取样品中三种多酣的浓度(
8、mg/mL)。7 结果计算以干基计的三种多盼的含量，按式。)计算:2 cX 20 -mX (l -w) .( 1 ) 式中:p一一一每克试样的多酣含量，单位为毫克每克(mg/g); c一一萃取样品中多酣的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL); 20一一萃取溶液体积，单位为毫升(mL);m一一试样的质量，单位为克(g); w-一试样的水分百分含量。以两次测定的平均值作为测定结果，结果精确至0.01mg/g。8 精密度、回收率和检出限本方法的精密度、回收率和检出限试验研究结果参见表B.L9 测试报告YC/T 202-2006 测试报告应包含采用的方法和得到的结果(mg/g)。应分别列出每种多酣的含
9、量。报告还应包含样品信息和本方法未规定的、或是选择性的操作条件，以及可能对结果产生影响的其他情况。3 YC/T 202-2006 附景A (资料性附录)色i曾图示例A.l 多酣校准溶液(3门色谱图，见图A.l。Nom 10 60 3 40 30 1 2 10 。5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5 25 t/min 1 绿原酸;2-1王若亭;3 芸香背。图A.l多酣校准溶液(3#)色i蕾圄A.2 典型烟草样品中多酣色谱图，见图A.2。Norm 3 60 50 40 30 11 2 10 。气-一一-t-一-T7. 1 一_-一-5 7.5 10 12.5 15 17.5
10、20 22.5 25 t/min 1 绿原酸p2-1主若亭;3 芸香音。固A.2典型烟草样晶中多酣色谱圈4 YC/T 202-2006 附录B(资料性附录)本方法的精密度试验研究结果本方法的精密度、回收率和检出限试验研究结果，见表B.l。表B.l本方法的精密度试验研究结果低浓度中浓度高浓度变异系数/检出限/多盼加入量/回收率/加入量/回收率/加入量/回收率/C%) Cmg/g) Cmg/g) C%) Cmg/g) C%) Cmg/g) C%) 绿原酸0.50 105.9 1. 25 100.7 2.50 99. 2 1. 85 0.028 莫若亭0.50 94. 1 1. 25 104.9 2
11、.50 103.4 1. 08 o. 016 I 芸香昔0.50 108. 9 1. 25 103. 3 2. 50 102.2 2.05 二一一一一5 YCjT 202-2006 参考文献1J左天觉著，朱尊权等译.烟草的生产、生理、生物化学M.上海:上海远东出版社，1993.2J Chotin山hit，P. , and S. vorabhleuk. Studies on Phenolic Compounds in Thai Flue-cured Tobac co. Thaij. Agr. Sci. 1986 ,19 :1 47-154. 3J Schlotzhauer, W.丘，R. M.
12、Martin , M. E. Snook, and R. E. Williamson. Pyrolytic studies on tobacco leaf constituents to the formation of smoke catechols. Tob. Sci. 1981 ,30:372-374. 4J Hecht , S.丘，S. Carmella, H. Mori , and D. Hoffmann. A study of tobacco carcinogenesis. xx. Role of catechol as a major cocarcinogen in the we
13、akly acidic fraction of smoke condensate. J. Natl. Cancer Inst. 1981 ,66 :1 63-169. 5J Weston, T. J. Studies on the synthesis of chlorogenic acid in tobacco leaves during flue-curing. Tob. Sci .1969 ,13:82-85. 6J Wright , H. E. , Jr. , W. W. burton, and R. C. Berry, Jr. 1 Soluble browning reaction p
14、igments of aged burley tobacco. 1. The nondialyzable fraction. Arch. Biochem. Biophys. 1960 , 86: 94-101. 7J Glennie , C. W. , and J. G. Nel. The polyphenol of flue-cured tobacco. Agrochemophysica 1973 , 5:75-76. 8J Court, W. A. high-performance reverse-phase liqu山idchromatography of naturally occur
15、ring phe陀eno旧oliccompounds. J. Chromatogr. 1977 ,130:287-291. 9J Snook , M.丑，P. F. Mason, and V. A. Sisson. Polyphenols in the Nicotiana species. Tob. Sci. 1986 , 30: 43-49. 6 OON-NONHuh 中华人民共和国烟草行业标准烟草及烟草制晶多酣类化合物绿原酸、竟薯亭和芸番苦的测定YC/T 202-2006 * 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045网址电话，6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销峰印张o.75 字数11千字2006年6月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2006年6月第一版每定价10.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号，155066.2-16880 YC/T 202-2006
