1、中华人民共和国国家提准GB 15193. 7一牛94小鼠精子畸形试验S吩ermshape abnormality担stin mice 1 ；！；：梅内容与适用范阻本标准规定了小鼠精子畸形试验的基本技术要求。本标准适用于梭测环境有害物质对雄性生殖细胞的遗传毒性。2 颜理小吉克裙子普普形受攀登主控辈革，具有高度遗传性，许多常染色体及X、Y诠染色体蔡海直接或湾主盖地决定精子形态。精子的畸形主要是指形态的异常，已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。网此形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。小鼠精子畸形试验可检测环绕因予对精子生成、发育的影响，而且对已知的生磁细胞致突变物有高度敏感性，
2、故本试验可用作检测环境因子在体内对生委主短跑的致突变作题。3仪器及试剂全部试)flj除注明外，均为分析纯，试验用水为蒸馆水。3. 1 实验室常用设备。3.2 生物显微镜。3. 3 甲醇。3. 4 1%2%伊红染色液z称取1红l2g，溶于100mL蒸馆水备用4 实验步骤4, 1 动物68周龄（体意2535g。4. 2 剂量分组设一个阴性对然溶剂）组个限性对黑忽及三三个试验组，每级至少有5只存活动物。!IE性物可采用环磷酸胶4060mg/ (kg d）或帮基磺酸Efll普（MMS)50mg/(kg 心，丝裂霉素（；（MMC)1.台1. 5 mg/(kg. d)o盖盖高剂量可取盖章大耐受量，或分别取
3、1/2、1/4和1/8J,050作为剂量组。经口给予，连续5d。4.3操作步骤4, 3. 1 动物处死慰问：各幸中致突变物作用于穗子的不同发育阶段，王军在接触菜矜致突变物后不问时间出现精子畸形，故有条件时，可给予受试物后第一、四、十周处死动物，检查精子形态。因为大部分化学致突变物对精原细胞胎期或初级精母细胞早期的生殖细胞较为敏感，故一般均是子首次给受试物后的第35 d处死。4.3.2 用颈椎戴白法处死小鼠，取出二靠在意！擎，放入盛有适量生理盐水（1ml，）的小烧杯中或放入盛有中华人民共和医卫线部199408”10批准1994-0810实施Sb3 GB 15193. 7 94 2 mL生理盐水的
4、平皿中a用ll!l科剪将宙i塞纵向剪12刀，静ll:3 5 min，轻轻摇动。用四擦擦镜纸或合成纤维血网袋过滤，吸滤液涂片。空气于燥后，用甲醇固定5min以上干燥。Jjj1%2%伊红染色1h !fl水轻冲，干燥。4. 3. 3 镜检在1连信镜下用绿色滤光片找到背景清晰精子3重叠较少的部佼，J有离倍镜荒草j芋检查精子形态，汁数结构完整精子。精子有头无尾轮哥哥不清）或头部与其他精子或碎片翠叠，或明显矮人为剪碎者，均不计算，每只动物至少检查1000个精子。精子畸形，交要表现在头部，其次为尾部，畸形类型可分为无钩、香蕉形、胖头、无定形、路折叠、双头、双尾等e异常穗子均应记录鼓微镜的坐标数，以备查询。并
5、分别记录异常类型，以便统计稿子畸形率及精子畸形类裂的构成比判断双头、双尾畸形时，要浊意与二条精子的部分重叠相鉴别，判断无定形时要与人为剪碎及折叠相鉴别。5统计方法及缔果如j定每个剂量组成分别与相应的阴性对照组进行参数统计方法比较，如用Wilcoson秩和检验法评价精子畸形阳性的标准是，畸形率至少为阴性对照级的倍量或经统计有显著意义，并有剂量反应关系。一般阴性对照组的精子异常率为o.8% 3. 4%，供参考。fl!应有本实验案所用实验动物的自发畸形率作参考。附加说晓z本标准出中华人民共和理卫生部主生监督司提出e本标准由Jl.1部食品卫生监督检验所、浙江省医学科学院负责起草。本标准主要起草人徐晋康、龚幼菊、陈似主生。本标准由卫处部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。566
