1、ICS 13.tw画。.30z gB 中华人民共和国国家标准GB 18466- 2005 代替GB18466-21 部分代替GB8叨8-1蜘医疗机构水污染物排放标准m民ha鸣;estandard of water poUutants for medilor回皿Z8tion25-07-27发布2)6 - 01 -01实施国家环境保护总局国家质量监督检验检窥总J1111111111111111111 国家环境保护总局公主七口2005年第35号为贯彻中华人民共和国环境保护法机加强对医疗机构污水、污水处理站废气、污泥排放的控制和管理，预防和控制传染病的发生和流行，保障人体健康，加强环境管理，现批准医疗
2、机构水污染物排放标准为国家污染物排放标准，并由我局和国家质量监督检验检疫总局联合发布。标准编号、名称如下:GB 18466-25 医疗机构水污染物排放标准本标准自实施之日起，代替污水综合排放标准(GB 8978一1996)中有关医疗机构水污染物排放标准部分，并取代医疗机构污水排放要求(GB 1归6621)。上述标准为强制性标准，由中国环境科学出版社出版，自2(胁年1月1日起实施。标准信息可在国家环境保护总局网站(附w.sepa. gov. cn)和中国环境标准网站(www.四.org. cn)上查询。特此公告。25年7月27日GB 18466-25 目次V-1-11444556678592叫7
3、-a句，?Mq法方算计荷负放法川川川呻方法法法向验方方川方肩检验验u验时的检检检5群的的法的D菌菌菌方菌如肠氏氏验杆I大门贺检核旧粪沙志的结中中中卵中(泥泥泥虫泥物污污污蛐污染和和及中和污水水水泥水水污污污污污污构构构构构构机机机机机机疗疗疗疗疗疗医医医医医医求置要测测测督)求求处毒监监监监录录录录录录文u要要与消u与与与i附附附附附附用义u放放制与测样样样施性性性的性性引定容排排控艺监取取取实脆脆脆耐Mm性和内水气泥工与水气泥的。川UU付仆仆围范语术污废污理样污大污准AB巳DEF言范规术技123处取123标录讯和-tt和前1234444.566667附附附附附附iii GB 18466-25
4、 前言为贯彻中华人民共和国环境保护法、中华人民共和国水污染防治法机中华人民共和国海洋环境保护法、中华人民共和国大气污染防治法机中华人民共和国传染病防治法，加强对医疗机构污水、污水处理站废气、污泥排放的控制和管理，预防和控制传染病的发生和流行，保障人体健康，维护良好的生态环境，制定本标准。本标准规定了医疗机构污水及污水处理站产生的废气和污泥的污染物控制项目及其排放限值、处理工艺与消毒要求、取样与监测和标准的实施与监督等。本标准自实施之日起，代替GB8978一1996 95 95 95 5.1 医疗机构病区和非病区的污水，传染病区和非传染病区的污水应分流，不得将固体传染性废物、各种化学废液弃置和倾
5、倒排人下水道。5.2 传染病医疗机构和综合医疗机构的传染病房应设专用化粪池，收集经消毒处理后的粪便排泄物等传染性废物。5.3 化粪池应按最高日排水量设计，停留时间为24-36h。清掏周期为180-3do 5.4 医疗机构的各种特殊排水应单独收集并进行处理后，再排人医院污水处理站。5.4.1 低放射性废水应经衰变池处理。5.4.2 洗相室废液应回收银，并对废液进行处理05.4.3 口腔科含隶废水应进行除隶处理O5.4.4 检验室废水应根据使用化学品的性质单独收集，单独处理。5.4.5 含油废水应设置隔油池处理。5.5传染病医疗机构和结核病医疗机构污水处理宜采用二级处理+消毒工艺或深度处理+消毒工
6、艺。5.6 综合医疗机构污水排放执行排放标准时，宜采用二级处理+消毒工艺或深度处理+消毒工艺;4 GB 18466-25 执行预处理标准时宜采用一级处理或一级强化处理+消毒工艺。5.7 消毒剂应根据技术经济分析选用，通常使用的有:二氧化氯、次氯酸铀、液氯、紫外线和臭氧等。采用含氯消毒剂时按表1、表2要求设计。5.7.1 采用紫外线消毒，污水悬浮物浓度应小于10mglL，照射剂量30-40叫Icm2，照射接触时间应大于lOs或由试验确定。5.7.2 采用臭氧消毒，污水悬浮物浓度应小于20mglL，臭氧用量应大于10mglL，接触时间应大于12 min或由试验确定。6 取样与监测6.1 污水取样与
7、监测6.1.1 应按规定设置科室处理设施排出口和单位污水外排口，并设置排放口标志。6.1.2表l第16-22项，表2第15-21项在科室处理设施排出口取样，总、总卢在衰变池出口取样监测。其他污染物的采样点一律设在排污单位的外排口。6.1.2 医疗机构污水外排口处应设污水计量装置.并宜设污水比例采样器和在线监测设备。6.1.3 监测频率6. 1. 3.1 粪大肠菌群数每月监测不得少于1次。采用含氯消毒剂消毒时，接触池出口总余氯每日监测不得少于2次(采用间歇式消毒处理的，每次排放前监测)。6.1.3.2肠道致病菌主要监测沙门氏菌、志贺氏菌。沙门氏菌的监测，每季度不少于1次;志贺氏菌的监测，每年不少
8、于2次。其他致病菌和肠道病毒按6.1.3.3规定进行监测。结核病医疗机构根据需要监测结核杆菌。6.1.3.3 收治了传染病病人的医院应加强对肠道致病菌和肠道病毒的监测。同时收治的感染上同一种肠道致病菌或肠道病毒的甲类传染病病人数超过5人、或乙类传染病病人数超过10人、或丙类传染病病人数超过20人时，应及时监测该种传染病病原体。6.1.3.4理化指标监测频率:pH每日监测不少于2次，COD和臼每周监测1次，其他污染物每季度监测不少于1次。6.1.3.5采样频率:每4小时采样1次，一日至少采样3次，测定结果以日均值计。6.1.4监督性监测按目IT91执行。6.1.5 监测分析方法按表5和附录执行。
9、6. 1. 6 污染物单位排放负荷计算见附录Fo表57.1 1600 13 GB 18466 - 2005 表A.2污泥中粪大肠菌群最可能数(MPN)检索表(污泥样品接种量为3份0.1g泥样，3份0.01g泥样和3份o.1g泥样)阳性管数阳性管数阳性管数接种每1g 接种每1g 接种每1g 接种接种泥样中接种接种泥样中接种接种泥样中0.1 g 0.01 g o.H g MPN 0.1 g 0.01 g o.1 g MPN 0.1 g 0.01 g O.1 g MPN 污样管污样管污样管污样管污样管污样管污样管污样管污样管。 1 1 。3.6 2 2 。21 。7.2 2 2 28 。2 11 2
10、 2 2 35 。3 15 2 2 3 42 1 。7.3 2 3 。29 1 11 2 3 36 2 15 2 3 2 44 3 19 2 3 3 53 A.6 检验结果报告根据粪大肠菌群MPN值，报告1L污水或1g污泥样品中粪大肠菌群MPN值。14 8.1 仪器和设备8.1.1 高压蒸汽灭菌器。8.1.2 于燥灭菌箱。8.1.3 培养箱。8.1 .4 恒温水浴箱。8.1.5 电炉。8.1.6 天平。8.1.7 灭菌平皿。8.1.8 灭菌刻度吸管。日1.9酒精灯。8.2 培养基和试剂附录B(规范性附录)医疗机构污水和污泥中沙门氏茵的检验方法8.2.1 亚晒酸盐增菌液(8F增菌液8.2.1.1
11、 成分膜蛋白陈(或多价陈)磷酸氢二铀(NaHP03)磷酸二氢铀(NaH2P03)乳糖亚晒酸氢铀蒸馆水8.2.1.2 制法lO g 16 g 2.5 g 4g 4g l)()u GB 18466 - 2005 除亚晒酸氢铀外，将以上各成分放入蒸锚水中，加热溶化。再加入亚晒酸氢锅，待完全榕解后，调整pH到7.0-7.1，分装于三角烧杯内。121c灭菌15min备用。8.2.2 二倍浓度亚晒酸盐增菌液(二倍浓度8F增菌液)8.2.2.1 成分除蒸馆水改为5时外，其他成分同附录B.2.1.1o8.2.2.2 制法制法同附录B.2.1.20日2.388培养基8.2.3.1 基础培养基8.2.3.1.1
12、成分牛肉膏示陈三号胆盐琼脂蒸馆水8.2.3.1.2 制法5g 5 g 3.5 g 17 g 1仪)()u15 GB 18466 - 2005 将牛肉膏、示陈和胆盐恪解于4M蒸馆水中。将琼脂加到n蒸馆水中，煮沸使其溶解。再将二者棍合，121 c灭菌15min，保存备用0B.2.3.2 完成培养基B.2.3.2.1 成分基础培养基l栅时乳糖lO g 拧橡酸纳8.5 g 硫代硫酸铀8.5 g 10%拧攘酸铁溶液10 n 1%中性红溶液2.5 n 0.1%煌绿榕液0.33 n B.2.3.2.2 制法加热洛化基础培养基，按比例加入除中性红和煌绿溶液以外的各成分，充分混合均匀，调整pH到7.0，加入中性
13、红和煌绿溶液，倾注平板。注:制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱内于18h内使用。煌绿溶液配好后应在10d以内使用。B.2.4 亚硫酸铿琼脂培养基(BS培养基)B.2.4.1 基础培养基B.2.4.1.1 成分蛋白陈牛肉膏氯化制琼脂蒸榴水B.2.4.1.2 制法10 g 5 g 5 g 20 g 1)()n 加热溶解各成分，按每份1n的量分装于250ml三角瓶中，121 c灭菌20min备用。B.2.4.2 亚硫酸锚贮备液B.2 .4.2.1 成分拧攘酸钝、镀亚硫酸铀磷酸氯二锅葡萄糖蒸馆水B.2.4.2.2 制法2g 20 g lO g lO g 2n 将拧攘酸锵镀溶解于50n沸水中，同时将压
14、硫酸铀溶解于1n沸水中，混合两液并煮沸3mln，趁热加入磷酸氯二锅搅拌至、溶解。冷却后，加入剩余的50n葡萄糖水溶液，贮存于冰箱中。日2.4.3拧橡酸铁煌绿贮备液B.2 .4.3.1 成分拧橡酸铁2g 煌绿(1%水溶液)25时蒸馆水2时B.2 .4 .3.2 制法将上述成分溶解于水中，盛于已灭菌的玻璃瓶内，贮存于冰箱。B.2 .4.4 完成培养基B.2.4.4.1 成分16 GB 18466一25基础培养基l时亚硫酸锐、贮备液20 ml 拧穰酸铁煌绿贮备液4.5 ml 8.2.4.4.2 制法加热融化基础培养基并冷却至50t，同时分别加热亚硫酸铅贮备液和拧攘酸铁煌绿贮备液至50。在无菌操作下将
15、后者加入到前者去，充分混合，元菌倾人已灭菌的培养皿中。8.2.5 三糖铁琼脂培养基(TSI培养基)8.2.5.1 成分蛋白脏、20 g 牛肉膏5 g 乳糖lO g 糖10g 葡萄糖1 g 氯化锅5g 硫酸亚铁镀0.2 g 硫代硫酸铀0.2 g 琼脂酣红蒸饵水8.2.5.2 制法12 g 0.025 g l)()ml 将除琼脂和酣红以外的各成分潜解于蒸馆水中，调pH到7.4。加入琼脂，加热煮沸，再加人0.2%酣红水榕液12.5时，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121t灭菌15min。放置高层斜面备用。8.2.6 沙门氏菌诊断血清8.3 检验程序检验程序见图Blo8.4 操作步骤
16、8.4.1 样品处理和增菌8 .4.1. 1 污水污水样品处理:过滤1 r 污水样品处理:稀释+ 增菌:将样品接种于二倍浓度5F37(;、培养24h平板分离:将增菌培养液分别接种于55和B537(;、培养24-48h平板分离:挑选可疑菌落接种于TSI37 (;、培养18- 24 h 图81污水、污泥中沙门氏菌检验程序取2d污水，用灭菌滤膜进行抽滤，用1时二倍浓度SF增菌液把滤膜上截留的杂质洗脱到17 GB 18466 - 2005 灭菌三角烧瓶内，充公摇匀，置于37c恒温培养箱，增菌培养12- 24 ho 注:若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用5%硫代硫酸饷溶液充分中和余氯o8.4.1
17、.2 污泥用灭菌匙称取污泥20g，放人灭菌容器内，加入2ml灭菌水，充分棍匀，制成1:10混悬液。吸取上述1:10 t昆悬液l时，加入到装有ld二倍浓度5F增菌液的己灭菌的三角烧瓶内，摇匀，置于37c恒温培养箱，增菌培养24ho 注:若样品为经过氯消毒的污泥.应在采样后立即用5%硫代硫酸铀溶液充分中和余氯。8 .4 .2 平板分离取上述增菌培养液，分别接种于自培养基平板和BS培养基平板，置于37c培养箱中，培养24-48h。观察各平板上生长的菌落形态。挑取在55培养基平板上呈元色透明或中间有黑心，直径1-2mm的菌落;挑取在B5培养基平板上呈黑色的菌落或灰绿色的可疑肠道病原菌菌落。每个平板最少
18、挑取5个菌藩，接种于TSI培养基中，置于37c培养箱中，培养18- 24 ho 8.4.3 鉴定8.4.3.1 血清学试验在TSI培养基中，如不发酵乳糖，发酵葡萄糖产酸产气或只产酸不产气，一般产生硫化氢，有动力者，先与沙门氏A-F群0多价血清作玻璃片凝集，凡与多价。血清凝集者，再与0因子血清凝集，以确定所属群别，然后用H因子血清，确定血清型。双向菌株应证实两相的H抗原，有Vi抗原的菌型(伤寒和丙型副伤寒沙门氏菌)应用Vi因子血清检验。8 .4 .3.2 生化试验应进行葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、庶糖、能基质、硫化氢、动力、尿素试验。沙门民菌属中除伤寒沙门氏菌和鸡沙门氏菌不产气外，通过发酵葡萄
19、糖、产气、均发酵甘露醇和麦芽糖(但猪沙门氏菌、雏沙门氏菌不发酵麦芽糖)，不分解乳糖、照糖，尿素酶和能基质为阴性，通常产生硫化氢。除鸡、雏沙门氏菌和伤寒沙门氏菌的0型菌株元动力外，通常均有动力。如遇多价。血清不凝集而一般生化反应符合t述情况时，可加做侧金盏花醇、水杨素和氨化饵试验，沙门氏菌均为阴性。日5检验结果报告根据检验结果，报告-定体积的样品中存在或不存在沙门氏菌。18 C.2 培养基和培养液C.2.1 革兰氏阴性增菌液(GN增菌液)C.2.1.1 成分膜蛋白陈(或多价陈)葡萄糖甘露醇拘橡酸铀去氧胆酸饷磷酸氧二押磷酸二氢饵氯化铀蒸馆水C.1 仪器和设备C.1.1 高压蒸汽灭菌器C.1.2 干
20、燥灭菌箱。1.3培养箱。C.1 .4 恒温水浴箱。C.1.5 电炉。C.1.6 天平。C.1.7 灭菌平皿。C.1.8 灭菌刻度吸管。C.1.9 酒精灯。GB 18466 2005 附录C(规范性附录)医疗机构污水及污泥中志贺氏菌的检验方法20 g pbohupb 125 0.5 g 16 g 2.5 g 5 g l)()ml C.2.1.2 制法将以上各成分加入蒸锚水中梅化，调整pH至7.0，煮沸过滤，115 c灭菌20uno贮存于冷暗处备用。C.2.2 二倍浓度革兰氏阴性增菌液(二倍浓度GN增菌液)C.2.2.1 成分除蒸馆水改为5时外，其他成分同附录C.2.1.1oC.2.2.2 制法制
21、法同附录C.2.1.2。C.2.3 88培养基同附录B.2.30C.2.4 伊红亚甲基蓝琼脂培养基(EMB培养基)同附录A.2.3。C.2.5 三糖铁琼脂(T81培养基)同附录B.2.5。19 GB 18466 - 2005 C.2.6 志贺氏菌诊断血清C.3 检验程序检验程序见图C10C.4 操作步骤C .4 .1 样品处理和增菌培养C .4 .1.1 污水L!_i水样品处理:过滤I I 污水样品处理:稀些增菌:将样品接种于双倍浓度GN37(;、6- 8 h培养板分离:将增菌培养液分别接种子ss和EM37(;、培养24h平板分离:挑选可疑菌落接种于TS137(;、培养18-24 h 鉴定:生
22、化、血清学试验圈C1污水、污泥中志贺氏菌检验程序取2d污水，用灭菌滤膜进行抽滤。用1时二倍浓度GN增菌液把滤膜上截留的杂质洗脱到已灭菌的三角烧瓶内，摇匀，置于37t恒温培养箱，增菌培养6-8h。注:若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用5%硫代硫酸铀溶液充分中和余氯0C.4.1.2 污泥取污泥30g，放人灭菌容器内，加人3叫灭菌水，充分混匀制成1:10 t昆悬液。吸取上述1:10 1昆悬液1时，加入到装有1ml二倍浓度GN增菌液的己灭菌的三角烧瓶内，搅匀，置于37c恒温培养箱中，增菌培养6- 8 ho 注:若样品为经过氯消毒的污泥，应在采样后立即用5%硫代硫酸铀溶液充分中和余氯。C .4
23、.2 分离取上述增菌培养液，分别接种55培养基平板和EMB培养基平板，置于37c培养箱中培养24ho 挑取在55培养基平板和EMB培养基平板上呈无色透明，直径1-1.5时的可疑肠道病原菌菌落。每个平板最少挑取5个菌落，接种于1弓I培养基，置于37c培养箱中培养18- 24 ho 挑取在151中，葡萄糖产酸不产气，元动力，不产生硫化氢，上层斜面乳糖不分解的菌株，可做血清学和生化试验。C.4.3 鉴定。4.3.1血清学试验志贺氏菌属分为四个群，先与多价血清作玻璃片凝集试验，如为阳性，再分别与A、B、C、D群血清凝集，并进一步与分型血清做玻璃片凝集，最后确定其血清型。C.4.3.2 生化试验应进行葡
24、萄糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、照糖、青定基质、硫化氢、动力、尿素试验。志贺氏菌属能分解葡萄糖，但不产气(福氏志贺氏菌6型有时产生少量气体)，一般不能分解乳糖和廉糖，宋内氏志贺氏菌对乳糖和煎糖迟缓发酵产酸。志贺氏菌属均不产生硫化氢，不分解尿素，无动力。对甘露醇、麦芽糖的发酵及麓基质的产生，则因菌株不同而异。如遇多价血清玻璃片凝集试验为阴性，而生化反应符合上述情况时，可加做肌醇、水杨酸、20 v-p、梅酸盐、氧化钢等试验。志贺氏菌属均为阴性反应。C.5 检验结果报告根据检验结果，报告一定体积的样品中存在或不存在志贺氏菌。GB 18466到刀521 GB 18466 - 2005 0.1 仪器和设备。
25、1.1 离心机。1.2金属筛:目。0.1.3 显微镜。0.1.4 恒温培养箱。0.1.5 高压蒸汽灭菌器。0.1.6 冰箱。0. 1.7 振荡器。0.2 培养基和试剂附录D(标准的附录)医疗机构污泥中蛐虫卵的检验方法0.2.1 3%福尔马林榕液或3%盐酸溶液0.2.2 饱和硝酸铀溶液(比重1.38-1.40)或饱和氯化铀榕液0.2.3 30%次氯酸铀溶液0.3 检验程序蛐虫卵检验程序见图Dl。0.4 操作步骤0.4.1 采样及样晶处理姻虫卵收集(分离):加氢氧化纳溶液振荡翩虫卵收集(水洗):加蒸馆水离心倒去上清液蝴虫卵收集(漂浮):加饱和硝酸销溶液离心吸取上层浮膜姻虫卵收集(沉淀):加蒸馈水离
26、心圄01污泥申蛐虫卵检验程序样品采集后应立即送到实验室检验。若不能立即检验时，可在1g污泥中加入5n 3%福尔马林或3%盐酸溶液，在4-1OC冰箱内保存。若样品为经过氯消毒的污泥，应在现场取样后立即用5%硫代硫酸纳溶液充分中和余氯。0.4.2 蛐虫卵收集0.4.2.1 分离将1g污泥样品和50n 5%氢氧化饷溶液，分别注人三角烧杯内，置于振荡器上，以2-322 次/min速度振荡30min，然后静置30min，以使捆虫卵不再蒙古附在污泥上。0.4.2.2水洗GB 18466-25 将上述样品分装在离心管内，以2刷-25r/min的转速离心5mino倒去离心管上部的液体，加入容量为沉淀物10倍的
27、蒸馆水，混匀，以2泊-25r/min的转速离心5min，如此反复数次，直至沉淀物上面的液体接近透明。0.4.2.3漂浮离心管内注入饱和硝酸铀溶液或饱和氯化铀榕液，搅匀，以2仪泊-25r/min的转速离心5mmo 注1:由于蚓虫卵的相对密度小于饱和硝酸销溶液和饱和氯化铀溶液的相对密度，管内绝大多数的蛐虫卵会浮聚在液面上。注2.氯化饷溶液投加量以大于沉淀物量20f音为直。注3:根据污泥性状，可以调整离心转速或时间。0.4.2.4沉淀反复吸取管中浮膜转移至另一离心管中，加入10倍水量的蒸馆水，搅匀，以5则r/min的转速离心5min，慢慢吸去上清液。注:由于蛐虫卵比水的相对密度大，姻虫卵将沉在管底内
28、。0.4.3 培养在离心管中，加人2-3时无菌的生理盐水或自来水和几滴3%福尔马林溶液，摇匀，转移至试管或直接置于24- 26 c恒温箱，培养20d。培养中，若榕液量少于2时时，应及时补充生理盐水或自来水。0.4.4 镜检培养后，将样品静置30rnl后吸去试管内上层较浑浊的液体，加人约为沉淀物两倍量的蒸馆水或30%次氯酸铀溶液，混匀，在显微镜下计数死活烟虫卵数。注1:活虫卵经过20d的培养会逐渐发育到幼虫期，而死虫卵则在同一条件下仍然保持单细胞期或停留于某一发育阶段，故可以区别。注2:30%次氯酸铀溶液能使虫卵最外层蛋白质壳逐渐溶解，便于在显微镜下清晰观察卵内的幼虫。0.5 捆虫卵死亡率计算按
29、下式计算蛐虫卵死亡率:式中:A一一蛐虫卵死亡率(%); m一一死亡捆虫卵数;n一一存活捆虫卵数。0.6 检验结果报告A = -旦一x1 m+n 根据检验结果，报告1g污泥中烟虫卵死亡率。23 GB 18466 2005 附录E(规范性附录)医疗机构污水和污泥中结核杆菌的检验方法E.1 仪器和设备E.1.1 电炉。E.1.2 恒温水浴箱。E.1.3 高压蒸汽灭菌器。E.1.4 滤菌器。E.1.5 离心机。E.1.6 恒温培养箱。E.1.7 乙酸纤维膜:孔径为0.3-0.7mE.1.8玻璃漏斗G2:孔径为10-15m E.1.9玻璃漏斗G4:孔径为3-4mE.1.10酒精灯E.2 培养基和试剂E.
30、2.1 改良罗氏培养基E.2.1.1 成分磷酸二氧饵硫酸镇拘橡酸镇谷氨酸饷甘油淀粉蒸馆水鸡蛋液(包括蛋清和蛋黄)20%孔雀绿E.2.1.2 制法2.4 g 0.24 g 0.6 g 1.2g 12 n 30 g 6n l)()n 20 n 将磷酸二氢拥、硫酸镇、拘橡酸纳、谷氨酸纳、甘油及蒸馆水混合于烧杯内，放在沸水浴中加热溶解。加入淀粉继续加热1h，摇动使其溶解，待冷却至50c加鸡蛋液及孔雀绿，溶解，混匀。制成斜面，保持温度90吃，灭菌1ho E.2.2 小川氏培养基E.2.2.1 成分甲液:无水磷酸二氢饵味精蒸馆水乙液:全蛋液甘油2%孔雀绿E.2.2.2 制法24 1 g 1 g l时2n
31、6n 6ml 甲、乙两液混合分装试管内。制成斜面，保持温度9OC灭菌1h。E.2.3 pH为7.0的磷酸盐缓冲液(1moL)。E.2 .4 10%吐温(Tween)80水溶液加等量30%过氧化氢溶液。巳2.54%硫酸搭液。E.3 检验程序结核杆菌检验程序见图E10E.4 操作步骤E.4.1 集菌!污水集菌:过滤离心法或直接离心法II污泥集菌:过滤离心法|培养:接种于罗氏培养基或小JiI氏培养基37(.、培养8周初步鉴定:对可疑菌落作抗酸染色，染色阳性者再作分离传代固E1结核杆菌检验程序污水集菌可采用过滤离心法或直接离心法，污泥集菌可采用过滤离心法。E.4.1.1 污水样品GB 18466-21
32、5 过滤离心法:用经煮沸消毒的乙酸纤维滤膜(孔径0.3-0.7阳)抽滤，安装严密后，取污水样5时抽滤，根据悬浮物的多少，一份水样需更换数张滤膜，将同一份水样滤膜集中于小烧杯内。根据滤膜的多少用1-21时4%硫酸溶液反复冲洗，静置30min后，收集洗液于离心管中，3 ()()() r/min，离心30min，弃去上清液，沉淀物中加1rr灭菌生理盐水混合均匀后，供接种用。直接离心法:水样5时，分装于50rr或2rr灭菌离心管中，3000n，离心30min。同一份水样的沉淀物集中于试管内，加等量4%硫酸处理30min，供接种用。如体积过大，再次离心浓缩后接种。注:若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后
33、立即用5%硫代硫酸铀溶液充分中和余氯oE.4.1.2 污泥样品过滤离心法:取污泥10g加1时蒸馆水冲洗过滤(滤纸漏斗)，再经玻璃漏斗G2(孔径10-15m)和(孔径3- 4 f-illI)抽滤，最后经滤膜(孔径0.45-0.7m)抽滤。取下滤膜，用4%硫酸3时，充分振摇冲洗30mino 注:若样品为经过氯消毒的污呢，应在采样后立即用5%硫代硫酸铀溶液充分中和余氯。E.4.2 接种污水的集菌液:全部接种于改良罗氏培养基或小川氏培养基培养管内斜面上，每支培养管接种0.1 rr o 污泥的集菌液:吸取两个0.1时，分别接种于改良罗氏培养基或小川氏培养基培养管内斜面上。巳4.3培养已接种的培养基置于3
34、7c培养箱内培养。培养2周后开始观察结果，每周观察2次。一般需要培养8周。分离菌株:在罗氏培养基上呈淡黄色或元色的粗糙型菌落，作抗酸染色，阳性者作分离传代。分离传代菌株如生长速度在两周以上，则需作菌型鉴定;应用耐热触酶试验和传代培养于28C培养25 GB 18466 - 2005 2-4周，观察是否生长，用此方法即可进行初步鉴定。E.4.4 致病力试验耐热触酶反应阴性，28C不生长之菌落为可疑结核杆菌。于小白鼠尾静脉接种lmg菌量(5mg/ 时菌液，每只动物接种0.2时)，死亡时观察病变或8周后解剖脏器发现典型结核病变者可确认为检出结核杆菌。其耐热触酶试验方法如下:取菌落3-5 mg分散于0.
35、5时磷酸盐缓冲液中，置68c水浴中20min后取出.冷却后加吐温80h和过氧化氢洛液混合液0.5时。发生气泡为阳性，30 min不产生气泡者为阴性。人型、牛型结核杆菌，胃分枝杆菌和海鱼分枝杆菌为阴性，其他非典型抗酸菌和非致病抗酸菌为阳性。人型、牛型结核杆菌在28c培养不生长，胃分枝杆菌和海鱼分枝杆菌28c培养能生长。E.5 检验结果报告根据检验结果，报告一定体积的样品中存在或不存在结核杆菌。26 GB 18466 - 2005 附录F(规范性附录)医疗机构污水污染物(D、BOD、55)单位排放负荷计算方法水污染物单位排放负荷计算公式:式中:L = C x Q/N L一一水污染物单位排放负荷，g/ (床.d); C一一污染物排放浓度，mg/L; Q一一日排水量，m3/d; N一一床位数，床。27 中华人民共和国国家标准医疗机构水污染物排放标准GB 18466-25 * 中国环境科学出版社出版发行(1脂2北京崇文区广渠门内大街16号)网址:h即:/www.c回电子信箱: 电话:010- 11 12738 传真:01 -6 7112738 北京市联华印刷厂印刷版权专有违者必究 25年9月第1版开本880x 1230 1116 2005年9月第1次印刷印张2.25印数1-4侧字数75千字统一书号:138但09.028定价:24.00元回叫阁。
