1、组B中华人民共和国国家标准GB 22255-2014 h食品安全国家标准食品中三氯藤糖（蔚糖素的测定ae.- 2015-07-28实施2015”。1-28发布中华人民共和国也世国家卫生和计划生育委员会. , 飞J、rm俨idMdiiJ吨 . . 嘈前本标准代替GB/T22255-2008食品中三氯藤糖蔚糖素的测定。本标准与GB/T22255-2008相比，主要变化如下E一一标准名称修改为“食品安全国家标准食品中三氯蔚糖（藤糖素的测定气一一增加了示差检测器的应用z增加固相萃取柱净化、分离的试样制备步骤z一一增加发酵酒、配制酒、不含蛋白的饮料的试样制备步骤。GB 22255-2014 I 食品安全
2、国家标准食品中三氯藤糖（藤糖素）的测定1 范围本标准规定了食品中三氯蘸糖蔚糖素）的测定方法。本标准适用于食品中三氯蘸糖的测定。2原理GB 22255-2014 试样中三氯藤糖用甲蹲水溶液提取，除蛋白、脂肪，经固相萃取柱净化、富集后用高效液相色谱仪、反相C1a色谱柱分离，蒸发光散射检测器或示差检测器检测，根据保留时间定性，以峰面积定量。3 试剂和材料注z除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水3.1 试剂3. 1.1 甲回事（CH30H）。3.1.2 乙腊（CHaCN）：色谱纯。3.1.3 正己烧（CsH14）。3.1.4 乙酸铮Zn(CHaC00)2 2H2 O
3、J. 3.1.5 亚铁氧化饵K4Fe(CN)6 3H20. 3.1.6 中性氧化铝(100目200目。3.2 试剂的配制3.2.1 乙酸铮溶液（219g/L）：称取21.9g乙酿铮，加3mL乙酸，加水溶解至100mL。3.2.2 亚铁氟化饵溶液(106g/L) I称取10.6g亚铁氟化饵，加水溶解至100mL. 3.2.3 甲障水溶液（75+25）：量取75mL甲晖，加25mL水，混匀。3.2.4 乙睛水溶液01+89）：量取11mL乙睛，加89mL水，棍匀。3.3 标准晶三氯蔚糖标准品（C12Hl9 C1a Oa): CAS编号56038-13-2，纯度注99%。3.4 棕准溶攘的制备3.4
4、.1 三氯藤糖标准贮备溶液(10.0mg/mL) z称取三氯藤糖标准品0.25g（精确至0.0001 g）于25mL 容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，其中三氯藤糖浓度为10.0mg/mL.贮备液置于4冰箱中保存，保存期为6个月。3.4.2 三氯藤糖标准中间被（l.00mg/mL) z吸取5.00mL三氯藤糖标准贮备榕液于50mL容量瓶中，GB 22255-2014 用水定容至刻度，混匀，其中三氯藤糖浓度为LOOmg/mL.置于4冰箱中保存，保存期为3个月。3.4.3 三氯藤糖标准工作液分别吸取0.200mL、0.500mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL三氯藤糖中间液于10mL容量瓶
5、中，用水定容至刻度。其中三氯藤糖工作液榷度分别为0.020 0 mg/ mL、0.050 0 mg/ mL、0.100mg/mL、0.200mg/mL、0.400mg/mL。3.5 材料固相萃取柱（200mg，类型为N乙烯基毗咯烧固和二乙烯基苯亲水亲脂平衡型填料使用前依次用4mL甲醋、4mL水活化。4 仪器和设备4.1 高效液相色谱仪z配示差检测器或蒸发光散射检测器。4.2 天平z感量为0.1mg和1mg. 4.3 涡旋混合器。4.4 离心机转速3000 r/min. 4.5 离心机z转速注10000 r/min. 4.6 超声波清洗仪z工作频率35kHz. 4.7 水播锅。5 分新步骤5.1
6、 试样制备5.1.1 含蛋白脂肪试样5.1.1.1 称取精碎均匀后固体试样1g 2 g（精确到0.001剖，混匀后液体试样1g 5 g（精确到0.001 g）置于50mL离心管中，加入5mL水，祸旋掘合器上振荡3min后加入15mL甲露，继续振荡30 s，超声波提取20min，以3000 r/min离心10min，将上请寄E移入50mL离心管中。沉淀物加入5.0 mL甲薛水禧被（75+25），玻棒搅拌均匀后，涡旋混合器上振荡30s，以3000 r/min离心10min，重复提取2次，将上清被合并于150mL分液漏斗中。5.1.1.2 在150mL分液漏斗内，加入30mL正己饶，振摇2min，静
7、置分层，20min后，下层水相移置于50mL蒸发皿。蒸发皿于沸水搭上蒸发，当蒸发皿中被体在1mL左右时用9mL水分三次冲洗蒸发皿，冲洗液合并移置于15mL离心管中，超声波处理5min，以3000 r/min离心10min. 5.1.1.3 取全部上清液移人已活化的固相萃取柱，控制液体流速不超过每秒1滴，柱上液面为2mm左右时加入1mL水，继续保持被体流速为每秒1滴，到柱中被体完全排出后，用3mL甲蹲洗脱，收集甲薛洗脱液。洗脱被置于50mL蒸发皿内，于沸水踏上蒸干，残渣用1.00mL乙腊水榕液01+89）溶解（如溶液有挥浊现象可将其移人离心管，10000 r/min离心5min），榕滚过0.45
8、m滤膜，攘攘为制备的试样溶液，备用注z果冻类样品经提取后的上清液需50水浴加热后趁热过柱，否则易堵塞萃取柱5.1.2 酱及酱制品、醋、酱油称取混匀后试样2g（精确到0.001g），置于50mL离心管中，加入1.0g中性氧化铝，加人3mL 水，涡旋混合器上振蔼3min后加入15mL甲晖，以下步骤自5.1.1.1“继续振荡30s，超声波提取20 min，以3000 r/min离心10min”开始，到5.1.1.3“滤液为制备的试样溶液，备用f为止依次处理 GB 22255-2014 5.1.3 含酒精的试样（发酵酒、配制酒）称取混匀后试样5g（精确到0.001g），置于50mL蒸发皿中，于沸水浴上
9、蒸干，残渣用1.00mL乙膳水椿被（11+89）榕解，需液过0.45p.m滤膜，滤被为制备的试样榕液，备用。5.1.4 钦料称取混匀后试样5g（精确到0.001g），置于15mL离心管中，加入5mL水，涡旋混合器上振荡30 s.以3000 r/min离心10min。以下步骤按5.1.1.3处理5.1.5 凤昧发酵乳、奶荼称取混匀后试样lg5g（精确到0.001g）置于切mL离心管中，如人5mL水，涡旋混合器上振荡3 min后加人15mL甲蹲、0.50mL乙酸铮榕液、0.50mL亚铁氟化拥溶液，以下步骤自5.1.1.1“继续振荡30s，超声波提取20min，以3000 r/min离心10min”
10、开始，到5.1.1.3“滤液为制备的试样榕液，备用。”为止依次处理。不同试样的前处理需要同时做试样空白试验。5.2 仪器参考条件5.2.1 色谱柱1C1s柱（4.6mm 150 mm, 5 p.m）或性能相当者。5.2.2 流动相，水乙睛89+11.注z当检测样品基质复杂，强保留物质影响后续检测时，可采取洗脱程序蒸发光散射检测器适用，参见附录A.5.2.3 流速z1.0 mL/min. 5.2.4 柱温135a5.2.5 示差检测器条件z一一检测池温度：35：一一灵敏度：16.5.2.6 蒸发光散射检测器条件z挂不同品牌蒸发光散射检测器在高水相流动相条件下的要求设置。直日SEDEX15 : 雾
11、化压力：3.5Bar；增益：8J蒸发温度：40。或性能相当者。5.2.7 进样量：20.0p.L。5.3 标准曲缉的制作5.3.1 示差检测器取三氯藤糖标准工作液分别进样20.0p.L，在上述色谱条件下测定峰面积，然后作峰面积三氯藤糖浓度（mg/mL）标准曲线，曲线方程依示差检测原理，见式（1):y=ax +b 式中zy 一一峰面积za、b一一与检测地温度、流动相性质等实验条件有关的常数px 一一三氯蔚糖的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）。5.3.2 蒸发光散射栓测器. ( 1 ) 取三氯蔚糖标准工作液分别进样20.0p.L，在给定的色谱条件下测定峰面积，然后作峰面积三氯藤3 GB 222
12、55-2014 糖浓度（mg/mL）标准曲线，曲线方程依蒸发光散射检测原理，见式（2):y =bx0 式中zy 一一峰面积sa,b一一与蒸发室温度、流动相性质等实验条件有关的常数zx 一一三氯藤糖的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）。按仪器数据处理软件的处理方式不同，也可作对数方程，即lgy=b+algx.5.4 试样藩璋的测定 ( 2 ) 取制备的试样溶液和空白试样榕液各20.0L进样，进行高效液相色谱分析。以保留时间定性，以峰面积外标法定量，见附录B.6 分析结果的表述试样中三氯藤糖含量按式（3）计算zX一（c-co）V1000 - m 1 000 ( 3 ) 式中zx 一一试样中三氯藤
13、糖的含量，单位为克每千克（g/kg);c 一一由标准曲线查得试样进样液中三氯蘸糖的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL);Co 一一由标准曲线查得空白试样进样被中三氯蔚糖的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL);v 试样定容体积，单位为毫升（mL);m 试祥质量，单位为克（g);1 000 换算系数。结果保留三位有效数字。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8 其他当取样量2.00g，定容至1.00mL时，捡出限均为0.0025 g峙，定量限均为0.0075 g问。4 GB 22255-2014 附录A复杂情况下的渡相色谱洗脱程序（蒸发光散射检测器适
14、用当检测样品基质复杂，强保留物质影响后续检测时，可采取洗脱程序，见表A.1。表A.1 灌相色谱洗脱程序（蒸发光散射检测器适用）时间超纯水体极分数乙脯（体积分数mm % % 。89 11 14 89 11 15 10 90 22 10 90 23 89 11 26 89 11 5 GB 22255-2014 B 录附三氯藤糖（藤髓蠢高效渡相色谱圈三氯蔚糖（藤糖素标准溶液（0.200mg/mL）的液相色谱图蒸发光散射检测器）见图B.1.三氯琼糖目。gsm州省AH仁Ili仁川门ii200 198 mAU 俨J196 194 192 ti min 16 14 12 10 8 6 4 2 三氯藤糖（蔚糖
15、蠢标准溶麓的遭相色谱圈（蒸发光散射桂测器三氯葳糖（藤糖素标准溶液（0.200mg/mL）的液相色谱图（示差检测器见图B.2.图B.1自j一一二一）L 句幽幽陈糖mAU 98 96 94 92 90 8日86 84 ti min 14 12 三氯藤糖（蘸辅素）标准溶攘的液相色谱圈（示差栓副器10 8 6 4 2 圄B.26 立足mmNNN阂。华人民共和国家标准食品安全国家标准食品中三氯蘸糖藤糖蠢的测定GB 22255-2014 国中铸中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平墨西街甲2号(100029)北京市西城区三里河北街16号(10004日网址总编室：（010)68533533发行中心，（010)51780238读者服务部，（010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销 印张0.75字数14千字2015年7月第一次印刷开本88012301/16 2015年7月第一版* 书号z155066 1-49848定价16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话z(010)68510107 GB 22255-2014 打印日期：2015年7月8日F002A
