1、GB 504085 本规程适用于所有柑桔苗圃。 1 名词解释 1.1 产地检疫指苗木生产过程中的全部检疫工作，包括培育无检疫性病害的苗木和苗木生长期间田间检疫检验及必要的室内检验等。 1.2 同品种同批号嫁接的苗木，指同一来源地、同一时间采集的同一品种的接穗繁殖出来的苗木。 2 检疫对象 柑桔黄龙病学名待定 柑桔溃疡病xanthomonas citri（Hasse）Dowson 3 无检疫对象苗木的培育 3.1 苗圃地的选定 3.1.1 必须选用无病地。 3.1.2 在黄龙病区，苗圃地要符合下列条件之一： 3.1.2.1 在平原区，周围3公里以上无柑桔类植物。 3.1.2.2 在有高山、大河、
2、湖泊等自然屏障的地区，周围1.5公里以上无柑桔类植物。 3.1.3 在溃疡病区，苗圃地周围1000m以上无柑桔类植物。 3.2 繁殖材料的采集和消毒 3.2.1 种子消毒 3.2.1.1 器材 a.超级恒温器（或恒温水浴锅），1台； b.水桶，1个； c .保温茶桶，1个； d.煮水锅，1个； e.种子铁网笼（或纱网袋），1个； f.标准温度计，1只； g.普通温度计，1只。 页码，1/7GB 5040852006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbnN504000A.htm 3.2.1.2 消毒步骤 a.在恒温器或水浴锅内注入5556热水，并使之自动控制在550
3、.3之内，若用保温茶桶则注入水温略高一点的热水，使桶内水温达到5557（不高于57）； b.柑桔种子用铁网笼或纱网袋装好，置于5052热水中预浸56min； c.取出立即投入恒温器或保温茶桶内，投入种子后注意并记录水温变化，使水温保持在550.3之内处理50min； d.处理完毕取出立即摊开冷却，稍晾干，即可播种或贮藏。 3.2.1.3 凡接触已消毒种子的人员，必须先用肥皂洗手消毒，盛种子器皿必须保证不带溃疡病菌。 3.2.2 接穗采集和消毒 3.2.2.1 采集，接穗来自无病区、病区内隔离健康老树或6年生以上轻病果园中的健株。 3.2.2.2 消毒 3.2.2.2.1 器材 a.水桶，1个；
4、 b.水盘，1个； c.消毒用塑料盘（或桶），4个； d.方盘，2个； e.放大镜，3个； f.量筒（或量杯）500mL，1个； g.四环素，1盒； h.链霉素，若干； i.洗衣粉，适量； j.酒精，适量； k.草纸，适量。 3.2.2.2.2 消毒步骤 a.用放大镜逐条检查接穗，淘汰带病芽条； b.配1000单位/mL盐酸四环素液备用； c.把接穗置于四环素液中浸2.5h； 页码，2/7GB 5040852006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbnN504000A.htm d.晾干或用草纸吸干接穗上的水分，置于50苯来特或50多菌灵（180011000）液中浸
5、2030min，取出静置2030min，清水冲洗，吸干转入e； e.在700单位/mL硫酸链霉素和1乙醇的混合液中浸30min，取出静置2030min，清水冲洗摊开晾干表面水分，用清洁草纸包装保湿贮藏或嫁接。 3.2.2.2.3 凡需接触消毒后接穗的人员，必须先用肥皂水洗手消毒。包装材料不带溃疡病菌。 3.2.3 苗圃应创造条件建立母本园，消毒技术见附录B（补充件）。 3.3 苗圃防疫措施 3.3.1 禁止携带未经消毒的柑桔种子、苗木和果实进入苗圃； 3.3.2 苗圃工具要新置专用； 3.3.3 严格防除柑桔木虱； 3.3.4 凡外出到别的苗圃或柑桔园归返人员或外来人员进入苗圃前，要换穿备用工
6、作服。 3.3.5 苗圃周围种植非芸香科植物围篱。 3.4 疫情处理 3.4.1 发现黄龙病株立即拔除烧毁，与该苗同一品种、同一批号接穗、嫁接的其他苗木力争在短期内作一般苗木出圃。 3.4.2 发现溃疡病株立即挖除烧毁，并对周围苗木喷布杀菌剂。 4 检查、签证、出圃 4.1 检查 4.1.1 田间检查 4.1.1.1 由植检人员会同有关单位技术人员在苗木夏梢转绿后、秋梢转绿后和出圃前进行产地检查。 4.1.1.2 在全面目测检查的基础上，用随机取样法检查（取样在10个以上）。苗木在1万株以下查全部，1万株至10万株查30，10万株以上查15。 4.1.1.3 田间症状鉴定：黄龙病以是否表现“黄
7、梢”和叶片的“斑驳型黄化”为依据；溃疡病以枝条和叶片是否呈现病斑为依据，见附录C（参考件）。 4.1.1.4 记录检查结果，并载入苗圃检查档案卡，见附录A（补充件），详细填写产地检验记录表。 4.1.2 室内检查 对溃疡病可疑病株进行室内检查鉴定。 页码，3/7GB 5040852006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbnN504000A.htm 4.1.2.1 病理解剖 选取幼小病斑连同健组织切成小片（徒手切片）将小片放到显微镜下观察，有细菌溢出，叶片组织细胞膨大、破裂，可确定为溃疡病。 4.1.2.2 分离培养 选取叶上幼小病斑一个，连同健全组织切成23mm
8、的小块，分别在0.1升汞液中表面消毒1min，在 75乙醇中洗去升汞毒，灭菌水中连 续浸洗3次，然后将小片组织放在灭菌玻皿内，加1mL灭菌水，用无 菌玻棒捣碎，制成悬浮液1杯，放入第2个灭菌皿内1mL灭菌水中稀释，依次再稀释1次，共得3皿，每次倾 入已溶化的并冷至45的牛肉汁-蛋白-琼脂培养基约10mL，立即与皿内悬浮液混合均匀，待冷却后，放入28温箱内培养，培养3天取出，从标本的第3皿内，选取具有本病特征的单菌落(菌落圆形、黄色、半透明、全绿），作划线培养，进一步纯化，再过两天，从划线培养中，选取单菌落，移植于试管斜面上，作为供试菌种。 4.1.2.3 格兰氏染色 4.1.2.3.1 格兰氏
9、染色反应：菌种在B、P、A试管斜面28培养24h，用灭菌水制成悬浮液，涂片，同一玻片涂一条枯草杆菌作对照菌，涂片干燥后用胡凯氏法染色。 4.1.2.3.2 形态鉴定 a.大小，菌种在B、P、A试管斜面28培养24h，用灭菌水制成悬浮液，涂片，干燥后用石碳酸夫红染色，油镜下镜检并测定50个菌体。 b.鞭毛染色，菌种在B、P、A试管斜面培养1418h，用灭菌水制成悬浮液涂片，干燥后用硝酸银染色。 有条件的地方可进行生理生化和接种鉴定。 4.2 出证，经田间检查和必要的室内检查，未发生黄龙病和溃疡病的苗木可签发产地检疫合格证，准予出圃。 产地检验记录表 年 月 日项目 时期 检查株数 黄龙病株 溃疡
10、病株可疑株检查人黄龙病 溃疡病夏梢转绿后 秋梢转绿后 出圃前 页码，4/7GB 5040852006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbnN504000A.htm 柑桔苗木产地检疫合格证（存根） 产检证号 号 苗圃 年培育 柑（ 桔） 苗 株， 经田间 次或室内检验，未发现柑桔检疫病害，同意出圃。 检疫员 年 月 日 柑桔苗木产地检疫合格证 产检证字 号 苗圃 年培育的 柑（ 桔） 苗 株， 经产地检疫合格，同意出圃. 植物检疫员 检 查 员 （植物检疫机构公章） 19 年月 日 附 录 A 柑桔苗圃产地检疫档案卡片 （补充件） 注： 本证不能代替检疫证书使用。
11、同品种、同批苗木出具的产地检疫合格证当年有效。检查 年 月 日 品种接穗来源采穗时间消毒办法砧木来源田间检查 室内检查疑株检查人砧木 接穗 检疫病害木虱 方法 结果页码，5/7GB 5040852006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbnN504000A.htm附 录 B 母本园接穗消毒技术 （补充件） B.1 器材 a.恒温接穗消毒箱或超级恒温器，1台； b.水桶，1个； c.链霉素，200万单位； d.量筒（500mL），1个； e.标准温度计，1只； f.普通温度计，1只； g.清洁草纸，适量； h.纱布，适量； i.放大镜，3个。 B.2 消毒步骤 B.
12、2.1 用放大镜仔细检查接穗，除去带病斑的芽条。 B.2.2 消毒箱加温（水浴加温），使箱内温热空气达49，并保持490.3温度。 B.2.3 把接穗倒置放入消毒箱内，迅速加盖，待温度回升至49时，开始计算处理时间，保持490.3，并维持50min。 B.2.4 处理完毕，把接穗立即取出，转入3840含1乙醇的700单位/mL链霉素溶液中（即每100mL链霉素加入1mL乙醇），浸30min。 B.2.5 取出后在洁净的器皿上置2030min，冲洗、晾干后用纱布包存待用。 页码，6/7GB 5040852006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbnN504000A.htm附 录 C 田间鉴定黄龙病的症状 （参考件） C.1 黄梢 新梢在生长转绿过程中停止转绿，叶片均匀黄化。 C.2 叶片斑驳型黄化 叶片转绿后从主、侧脉附近和叶片基部开始黄化，黄化部分扩展形成黄绿相间的斑驳，后来可以全叶黄化。 页码，7/7GB 5040852006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbnN504000A.htm
