1、中华人民共和国圆寂标准食品添加剂固定化葡萄糖异构酶制剂Food additive lmmoblll回d, . 四。Diel副蝇preperatlonUDC 661- 733 664 GB 8274一87本标准适用于微生物发.法生成的酶经固定化制成的固定化葡萄糖异构酶1 技术要求1. 1 外观g不结块，无异味1. 2项目和指标项目酶活力u/g 生产能力，t/kg酶活力保存率%】o.5，二个月强度重金属（以Pb计，%铅，%呻以As计，%黄曲霉霉素B,%大局菌群，个！OOg沙门民菌不低于不低于不低于不超过不超过不越过不超过不超过注董生产使用的菌株和固定化鹰葡经毒性鉴定方能使用2 试串串方法2. 1
2、外观s用目视判定。2.2酶活力测定指标2 000 J. 5 85 合格0.004 o. 001 o. 000 3 o. 000 000 5 30 不得撞出中华人民共和国轻工业部1987-10-iS批准1988-02-01寞81 GB 8274-87 2 2. 1 酶促反应方法I（适用于链霉菌产生的葡萄糖异梅麟2.2.1.1 试剂一2 2-1 1-1 70% W /V）葡萄糖溶液s称取70克分析纯葡莓糖加入煮沸的蒸饱水中，再加热使其完全溶解，冷却用蒸细水定容至lOOmL。2-2-1-1-2 pH7.5磷酸缓冲溶液：0. 2M磷酸二氧销（GB1267）溶液z称取31.Zg磷酸二氢销（NaH,PO,
3、 2H,0），用蒸馆水溶解并稀释至1OOOmL。O. 2M磷酸氢二锅（GB1263）溶液g称取7J.6g磷酸氢二销（Na,HPO12H），用蒸馆水溶解并稀释至1OOOmL。取一定量上述二溶液混合，用pH计校正pH至1.5 0 2.2. 1. 1.3 o.sM硫酸镇（GB671）溶液z称取12.3g硫酸镇（MgSO, 7H,0），加蒸馆水溶解，用蒸缩水定容至JOOmL.2-2-1-1-4 o.5M高氯酸（GB623）溶液s量取21mL高氯酸（HCIO，），用蒸馆水定容至500mL。2.2. 1.2 反应z固定称取合适量的酶（用固定化酶完整颗粒，不磨碎，用。.02M磷酸缓冲液(pH7. 5) 1m
4、L在37浸泡16h，加磷酸缓神液J.5mL，硫酸镀溶液。.5mL，葡萄糖理事液J.5mL，再加蒸饱水调整至总体积5mL,70反应由，加高氨酸湾液5mL终止反应，然后测定果糖含量。2.2.2 酶促反应方法I（适用于游动放线菌产生的葡萄糖异构酶）。2.2.2. 1 试剂2. 2. 2.1.1 3. OM葡萄糖溶液z称取分析纯无水葡萄糖54富，加煮沸蒸馆水使其浴解，并定容至JOOmL。2-2-2-1.2 0.3M磷酸缓冲溶液（pH7.0），称取107.4日分析纯磷酸氢二销（Na,HPO, 12日，0），加蒸馆水溶解并定容至IL(A液）：称取46.3g分析纯磷酸二氧纳（NaH,PO, 2H,0) (G
5、B 1267），加蒸锢水溶解，并定容至IL(B液）各取一定量A、B液混合，用pH计校正pH至7.0.2.2.2.1.3 0.03M硫酸镇溶液s称取o.739g分析纯硫峻镇（MgSO, 7H,0），加蒸饱水溶解，并定容至lOOmL02- 2: 2.1. 4 O. 003M硫酸钻溶液：称取o.084 3g分析纯硫酸钻（CoSO, 7H,0），加蒸馆水溶解，并定容至！OOmL.2.2.2.2 反应z固定称取合适量的酶（用固定化酶完整颗粒，不磨碎；用。.03M磷酸缓冲液(pH7. 0) lmL在37C浸泡l饨，加磷酸缓冲溶液o.5mL，硫酸钻溶液o.5mL，硫酸镜溶液O.5mL, 葡萄糖溶液2.5mL
6、，加蒸偏水调E至总体积5mL。75反应th.加高氯酸溶液5mL终止反应，然后测定果糖含量。2. 2. 3 果糖测定法（半脱氨峻咔嗖法12.2.3.1 试剂2- 2- 3.1.1 J. 5% (W/V）半脱氨酸盐酸盐溶液z称取生化试剂纯半眈氨酸盐酸盐o.375g，用蒸馆水溶解，并稀释定容至25ml，。2. 2. 3.1. 2 0. 12% (W /V）咔峪酒精溶液：称取咔喽30.Omg，用无水酒精溶解并定容至25mL，放置在棕色瓶中，24h后使用。2.2.3.1.3 硫酸溶液2量取分析纯浓硫酸450mL，在不断搅拌下徐徐倒入190mL蒸馆水中。2.2.3.1.4 标准果糖溶液：称取预先在55真空
7、干燥至恒童的分析纯果糖125.Omg，用蒸馆水定容至25mL (5mg/mL），存放于冰箱中备用。使用时稀释100倍（50将mL）。2.2.3.2 测定程序2.2.3.2. 1 标准曲线的绘制g取25mL比色管分别加50问mL的果糖标准溶液。，o.2 o. 4 o. 6 o. 8mL，再用蒸馆水分别补竟至lmL，然后每管中加入o.2mL半就氨酸盐酸盐溶液，6mL硫酸溶液，82 GB 8274-87 摇匀后，立即加入O.2mL咔嗖酒精溶液，撼匀，于60水浴中保温lOmin，取出用水冷却呈红紫色用lOmm光径的比色皿，在560nm波长下比色，以吸光度对果糖作图，即得标准曲线2.2.3.2.2 样品
8、测定将2.2.1.2或2.2.2.2的反应终止溶液适当稀稀后，准确吸取1.OmL，使其中果糖含量在1040周范围内，然后按2.2.3.1.2的后步操作进行。根据获得的吸光度在标准曲线图上查得相应的果糖量2.2.3.3计算X品.”. . . . . ( 1 ) 式中：X酶活力，u且u 一酶单位，u;w一样品量，g。注：GIU酶单位的规定2酶在上述方法I或方法的反应条件下，每小时生成！mg果糖的酶量规定为I个单位，以GIU表示将其除以IO.8即为国际单位，此时以！GIU表示果糖（mg/h)根据吸光度在标准曲线图上查得的果糖徽克数稀释倍数1000.2. 3 生产能力生产能力是指在适宜的工作条件下，酶
9、活力降至原来活力的10%时，每公斤绝干固定化酶能转化绝于葡萄糖为果葡糖的量，以t/kg表示。果葡糖中果糖含量为42%(W/Wl。:ZS P甲一”“（2 ) 再 1 000 式中：P生产能力，t/kg;s 转化糖量的总利，kgW一一转化时所用固定化酶的量，kgo2.4 酶活力保存率X,=f x叫. . . . . . . . . . ( 3 ) 式中：x，酶活力保存率，%；E 剩余活力，E, 原酶活力。2. 5强度固定化酶用60蒸馆水浸没，然后缓慢搅动20h，再用两个手指用力压之，放开后不成浆（或极少量成浆）仍硬，为合格。否则，为不合格2-6 重金属测定2. 6. 1 试剂2-6-1-1 硝酸z
10、分析纯；2.6.1.2 硫酸2分析纯$2.6.1.3 盐酸：分析纯：2. 6. 1 3. 1 6N盐酸：量取500mL盐酸，用蒸馆水稀释至1OOOmL; 2 6. 1. 3. 2 lN盐酸z量取83mL盐酸，用蒸偏水稀释至1OOOmL 2.6.1.4 氨水2分析纯，26141 SN氨水：量取333mL氨水，用蒸馆水稀释至lOOOmL;26142 IN氨水z量取66mL氨水，用蒸缩水稀释至lOOOmL1 2.6.1.5 pH3.5的乙酸盐缓冲液z称取25.0g乙酸镀溶于25mL蒸锢水中，加45mL6N盐酸，用稀盐酸或稀氨水调节pH至3.5，用蒸馆水稀释至lOOmL;2.6.1-6 1%盼歌指示液
11、按GB603配制。83 GB 8274-87 2.s.1. 1饱和硫化氢水z按GB603配制此溶液于使用前制备2.s.1.0铅标准癖液（每毫升含O.Olmg铅）I按GB602配制临用前用燕偏水准确精释10倍，便成每毫升相当于O.Olmg铅2. 6. 2 测定手续2.5.2.1 样品处理称取5.0g样品置于250mL凯氏烧瓶或三角烧瓶中，加1015mL硝酸浸润样晶放置片刻（或过夜）后，缓缓加热，待作用缓和后稍冷，活瓶璧加入5mL磺酸再缓缓加热，至瓶中榕液开始变成棕色，不断滴加硝酸（如有必要可滴加些高氯酸）至有机质分解完全，继续加热，至生成大量的二氧化硫白色烟雾，最后癖液应呈无色或徽带黄色冷却后将
12、癖液移入50mL容量瓶中，用水洗涤三角烧瓶，将洗液并入容量瓶中，加蒸铺水至刻度，混匀，每lOmL该溶液相当于lg样品。取同样量的硝酸、硫酸按上述方法作试剂空白试验2. 6. 2. 2 样品测定2. s. 2. 2. 1 癖液A：吸取含铅标准液lmL于50mL纳氏比色管中，加水至25mL混匀，加1滴1%酷歌指示液，用稀盐酸或稀氯水调节pH至中性（酷歌红色褪去）加入pH3.5的乙酸盐缓冲液5mL，用蒸偏水稀释至40mL，混匀备用2. s. 2. 2. 2 溶液B:取一支与溶液A所配套的纳氏比色臂，加入20mL样品液，加燕偏水至25mL混匀，加1滴1%盼歌指示液，用稀盐酸或稀氨水调节pH至中性盼歌红
13、色褪去），加入pH3.5的乙酸盐缓冲液5mL，用蒸锢水稀释至40mL，混匀备用2. 5. 2. 2. 3 癖液c,取一支与榕液A、B所配套的纳氏比色管，加入与癖液B相同量的相同的样品液，再加入与溶液A相同量的铅标准液，加燕锢水至25mL，混匀，加1滴1%酣歌指示液，用稀盐酸或稀氨水调节pH至中性（盼lit红色刚褪去），加入pH3.5的乙醺盐缓冲液5mL，用蒸偏水稀释至40mL，混匀备用。2.2. 2. 4 向各管中加入lOmL新鲜制备的硫化氢饱和液，混匀，放置lOmin后在白色背景下观察，溶液B的色度不得深于榕液A的色度，溶液C的色度应与溶液A的色度相当或深于溶液A的色度。2. 7铅按GB50
14、09. 12 食品中铅的测定方法中的双硫臆单色法执行。样品处理采用硝酸硫酸法。2.9碑按GB5009. 11食品中碎的测定方法中的银盐法执行。样品处理采用硝酸田硫酸法。2. 9黄曲霉毒素B,按GB5009. 22食品中黄曲霉毒素队的测定方法执行。2. 10 大肠菌群按GB4789. 3 食品卫生微生物学检验大肠菌群测定执行。2. 11 沙门氏菌按GB4789. 3 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验执行。3撞骗规则3. 1 产品需经生产厂技术部门检验，并签发合格证方可出厂，生产厂以一批次发罐培养的酶经固化后制得的固定化酶为同一批次的产品。3.2 订货单位若需抽样检验，应从该批酶中抽取两份，按本标
15、准规定的试验方法进行撞撞，若有一个样品或一项指标不符合标准的要求时，应与生产厂协商，再取1倍量的同批样品共同进行复验，如仍不合格时，则全批产品作为不合格产品，退交生产厂处理若产品经复验合楠时，订货方应承担试验费用。84 GB 8274-87 4 标志、包慧、运输、贮存4. 1 固定化葡萄糖异构酶的外包装应用硬纸扳箱，除注明品名、生产厂名、规格、注册商标外，还应注明食品添加剂，箱里并应附有产品检验合格证合格证上印有品名、颗粒说明、所用菌种、批号、数量、规格、生产日期、检验员等4.2 内包装为食品用塑料袋，应印有注册商标、产品名称、规格、重量、生产厂名4. 3本晶含有生物活性物质，对光线、温度、湿度易引起失活，在运输途中应避免日光晒和雨淋，贮存仓库应保持滑稽、阴凉、干燥、通风附加说明g本标准由中华人民共和国轻工业部、E生部提出本标准由轻工业部食品发工业科学研究所、卫生部食品卫生监督检验所归口本标准由轻工业部食品发醉工业科学研究所、天津市防病中心、无锚酶制1fiJ厂负责起草85
