1、ICS 6716020X 50 a雷中华人民共和国国家标准GBT 121432008代替GBT 1214311214331989、GBT 121434121435 1992、GBT 16771 19972008-12-31发布饮料通用分析方法General analytical methods for beverage2009050 1实施丰瞀嬲紫瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会促1”GBT 121432008目 次前言一1范围。2规范性引用文件3总则4饮料中可溶性固形物的测定方法(折光计法)5果蔬汁饮料中氨基态氮的测定方法(甲醛值法)6果蔬汁饮料中L_抗坏血酸的测定方法(乙醚萃取法)7
2、碳酸饮料中二氧化碳的测定方法(蒸馏滴定法)-8浓缩果汁中乙醇的测定方法9橙、柑、桔汁及其饮料中果汁含量的测定附录A(资料性附录) 20时折光率与可溶性固形物含量换算表附录B(资料性附录) 20时可溶性固形物含量对温度的校正表附录c(规范性附录)钾的测定附录D(规范性附录)总磷的测定-附录E(规范性附录)L脯氨酸的测定-附录F(规范性附录)总D一异柠檬酸的测定附录G(规范性附录)总黄酮的测定一工，000o地M坫M加船拍刖 吾GBT 121432008本标准代替GBT 121431 1989软饮料中可溶性固形物的测定方法折光计法、GBT 121432-1989果蔬汁饮料中氨基态氮的测定方法 甲醛值
3、法、GBT 1214331989果蔬汁饮料中卜抗坏血酸的测定方法 乙醚萃取法、GBT 1214341992碳酸饮料中二氧化碳的测定方法、GBT 1214351992浓缩果汁中乙醇的测定方法、GBT 16771-1997橙、柑、桔汁及其饮料中果汁含量的测定。本标准与GBT 1214311214331989、GBT 121434121435 1992、GBT 167711997相比主要变化如下：将GBT 121431121433 1989、GBT 121434121435 1992、GBT 16771 1997六项标准整合为一项标准。本标准的附录C、附录D、附录E、附录F和附录G为规范性附录，附录
4、A和附录B为资料性附录。本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出。本标准由全国饮料标准化技术委员会归口。本标准中“饮料中可溶性固形物的测定方法(折光计法)”、“果蔬汁饮料中氨基态氮的测定方法(甲醛值法)”和“碳酸饮料中二氧化碳的测定方法(蒸馏滴定法)”主要起草单位：中国食品发酵工业研究院；主要起草人：徐清渠、龚玲娣。本标准中“果蔬汁饮料中L抗坏血酸的测定方法(乙醚萃取法)”和“浓缩果汁中乙醇的测定方法”主要起草单位：中国食品发酵工业研究院；主要起草人：龚玲娣、徐清渠。本标准中“橙、柑、桔汁及其饮料中果汁含量的测定方法”负责起草单位：全国食品工业标准化技术委员会、中国食品发酵工业研究院、中国农业
5、大学、浙江省轻工业研究所、四川省轻工业研究所、湖南省食品质量监督检验所、河北省衡水市卫生防疫站，参加起草单位：广东健力宝集团有限公司、海口罐头厂、杭州娃哈哈集团公司、浙江圣达保健品有限公司；主要起草人：徐清渠、郝煜、任一平、张永顺、徐德忠、冯敏、吴卫华、杨代明、元晓梅、陈青俊、霍秀岩。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GBT 1214311989；GBT 121432一1989；GBT 1214331989；GBT 1214341992；GBT 121435-1992；GBT 167711997。饮料通用分析方法1范围本标准规定了饮料通用分析方法的总则和具体分析方法。本标准适用于饮料中特定
6、组分的分析。2规范性引用文件GBT 121432008下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 601化学试剂标准滴定溶液的制备OBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682 2008，ISO 3696：1987，MOD)GB 10789饮料通则3总则31 本标准中所采用的名词术语、计量单位应符合国家相关标准的规定。32本标准中的“仪器”为分析中所必备的仪器，一
7、般实验室常用仪器、设备等不逐项列出。38本标准中所用的水，在未注明其他要求时，应符合GBT 6682中三级以上(含三级)水的规格。所用试剂，在未注明其他规格时，均指分析纯。34本标准中的“溶液”，除另有说明外，均指水溶液。4饮料中可溶性固形物的测定方法(折光计法)41方法适用范围本方法适用于透明液体、半粘稠、含悬浮物的饮料制品。42方法原理在20用折光计测量待测样液的折光率，并用表A1查得或从折光计上直接读出可溶性固形物含量。43仪器实验室常用仪器以及下列仪器：431 阿贝折光计或其他折光计：测量范围o80，精确度土o1。432组织捣碎机。44试液的制备441透明液体制品将试样充分混匀，直接测
8、定。442半粘稠制品(果浆、菜浆类)将试样充分混匀，用四层纱布挤出滤液，弃去最初几滴，收集滤液供测试用。443含悬浮物制品(果粒果汁类饮料)将待测样品置于组织捣碎机中捣碎，用四层纱布挤出滤液，弃去最初几滴，收集滤液供测试用。45分析步骤451测定前按说明书校正折光计，以阿贝折光计为例，其他折光计按说明书操作。1GBT 121432008452分开折光计两面棱镜，用脱脂棉蘸乙醚或乙醇擦净。453用末端熔圆之玻璃棒蘸取试液z滴3滴，滴于折光计棱镜面中央(注意勿使玻璃棒触及镜面)。454迅速闭合棱镜，静置1 min，使试液均匀无气泡，并充满视野。455对准光源，通过目镜观察接物镜。调节指示规，使视野
9、分成明暗两部，再旋转微调螺旋，使明暗界限清晰，并使其分界线恰在接物镜的十字交叉点上。读取目镜视野中的百分数或折光率，并记录棱镜温度。456如目镜读数标尺刻度为百分数，即为可溶性圃形物含量()；如目镜读数标尺为折光率，可按附录A换算为可溶性固形物含量()。将上述百分含量按附录B换算为20时可溶性固形物含量()。46允许差同一样品两次测定值之差，不应大于05。取两次测定的算术平均值作为结果，精确到小数点后一位。5果蔬汁饮料中氨基态氮的测定方法(甲醛值法)51方法适用范围本方法适用于果汁和蔬菜汁类饮料。52方法原理氨基酸为两性电解质。在接近中性的水溶液中，全部解离为双极离子。当甲醛溶液加入后，与中性
10、的氨基酸中的非解离型氨基反应，生成单羟甲基和二羟甲基诱导体，此反应完全定量进行。此时放出氢离子可用标准碱液滴定，根据碱液的消耗量，计算出氨基态氮的含量。其离子反应式如下：NH2 NH2RCHCOOH爿RCHCOO+H+NH。 NHCH20HRCHCOO一+HCHO；R CHCOONHCH2 oH HOH2 CNCH2 OHRCHCOO一+HCHOR CHCOC广53试剂531 30过氧化氢。532中性甲醛溶液：量取200 mL甲醛溶液于400 mL烧杯中，置于电磁搅拌器上，边搅拌边用005 molL氢氧化钠溶液调至pH81。533氢氧化钠标准溶液：01 moIL，按GBT 601配制与标定。5
11、34氢氧化钠标准滴定溶液：005 molL，用01 molL的氢氧化钠标准溶液当天稀释。535 pH68缓冲溶液。54仪器541酸度计：测量范围O14pH，精度土01pH。542电磁搅拌器。543玻璃电极和甘汞电极。55试样液的制备551浓缩果蔬汁在浓缩果蔬汁中加入与在浓缩过程中失去的天然水分等量的水，使其成为果汁，并充分混匀，供测试用。2GBT 121432008552果蔬汁及果蔬汁饮料将试样充分混匀，直接测定。553含有碳酸气的果蔬汁饮料称取500 g试样，在沸水浴上加热15 min，不断搅拌，使二氧化碳气体尽可能排除。冷却后，用水补充至原质量，充分混匀，供测试用。554果蔬汁固体饮料称取
12、约125 g(精确至0001 g)试样，溶解于蒸馏水中，将其全部转移到250 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。充分混匀，供测试用。56分析步骤561将酸度计接通电源，预热30 min后，用pH68的缓冲溶液校正酸度计。562吸取适量试样液(氨基态氮的含量为1 mg5 mg)于烧杯中，加5滴30过氧化氢。将烧杯置于电磁搅拌器上，电极插入烧杯内试样中适当位置。如需要加适量蒸馏水。563开动电磁搅拌器，先用01 molL氢氧化钠标准溶液慢慢中和试样中的有机酸。当pH达到75左右时，再用005 molL氢氧化钠标准滴定溶液调至pH81，并保持1 min不变。然后慢慢加入10mL15mL中性甲醛溶液。
13、1min后用005molL氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH81。记录消耗005 molL氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数。57结果计算试样中氨基态氮含量按式(1)计算：x一!丕!丕丝丕!100 (1)m式中：x一每100 g(或100 mL)试样中氨基态氮的毫克数，单位为毫克每百克或毫克每百毫升(mg100 g或rag100 mL)；c氢氧化钠标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升(molL)；v加人中性甲醛溶液后，滴定试样消耗005 molL氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升(mL)；K稀释倍数；141 mL 1 molL氢氧化钠标准滴定溶液相当于氮的毫克数；m试样的质量或体积，单位为克或毫升(g
14、或mL)。58允许差同一样品以两次测定结果的算术平均值作为结果，精确到小数点后第一位。同一样品的两次测定结果之差：氨基态氮10 rng100 g(或10 mg100 mL)，不得大于2；氨基态氮125时(i一1、2、3、4、6)，应将大于125的组分项删除，其权值按比例分配给剩余组分项；修正后的果汁含量按式(12)计算：y7 5面yl 一12式中：，7修正后的果汁含量，；yi删除异常数据后果汁含量的计算值，；R，一被删除组分项的权值。972当争125时，按l_25计算。973 当囊(；一1、2、3、4、6)象2；或囊(z一1、2、3、4、6)囊o35时，应将其组分项删除，相应的权值按比例分配给
15、剩余组分项，按式(12)计算果汁含量。974 当同时修正3种组分时(总D一异柠檬酸除外)，果汁含量按式(13)计算：，一等100 。(13)式中：，”一用总D一异柠檬酸组分项计算出的果汁含量，。GBT 121432008附录A(资料性附录)20时折光率与可溶性固形物含量换算表表A1 20时折光率与可溶性固形物含量换算表可溶性 可溶性 可溶性 可溶性 可溶性 可溶性折光率 固形物 折光率 固形物 折光率 固形物 折光率 固形物 折光率 固形物 折光率 固形物 1 333 o oo 1354 9 145 1379 3 29o 1406 6 435 1 437 3 58o 1471 3 7251 3
16、33 7 o5 1355 7 15o 1380 2 29 5 1407 6 44o 1 438 5 585 1473 7 73o1334 4 1o 1356 5 155 1381 1 30o 1408 6 445 1439 6 59o 1 472 5 73513351 15 1357 3 16o 1382 o 305 1409 6 45o 1440 7 595 1474 9 74o1335 9 2 o 1 358 2 165 1382 9 31o 1410 7 455 1441 8 60o 1476 2 7451336 7 2 5 1359 o 17o 1383 8 315 1411 7 46
17、 o 1442 9 605 1477 4 75o1337 3 3o 1359 8 175 1384 7 32o 1412 7 46 5 14441 61o 1478 7 75513381 35 1360 6 18o 1385 6 32 5 1413 7 47o 1 445 3 615 1479 9 76o1 338 8 4o 1361 4 185 1386 5 33 o 1414 7 475 1446 4 62o 1 481 2 7651339 5 45 1362 2 19 o 1387 4 335 1415 8 4,8o 1447 5 62 5 1 482 5 77 o1340 3 5 o
18、1363I 19 5 1388 3 34o 1416 9 485 1448 6 63 o 1483 8 77 51341 1 5 5 1 363 9 20o 1 389 3 345 1417 9 49o 1449 7 635 1485 o 78 oI341 8 6 o 1364 7 205 l 390 2 35o 1 418 9 495 1450 9 64o 1486 3 78 5I342 5 6 5 1365 5 21o 1391 1 355 1420 0 50o 1 452 1 645 1487 6 79o1343 3 7o 1366 3 215 1392 0 36o 142l 1 505
19、 1 453 2 65o 1 488 8 795l 344 1 75 1367 2 22o 1392 9 365 14221 51o 1454 4 655 1 490 1 80o1 344 8 8o 13681 225 1393 9 37o 14231 515 1455 5 66 o 1 491 4 80 51345 6 85 1368 9 23 o 1394 9 375 1424 2 52o 1457 o 665 1492 7 81o1346 4 9o 1 369 8 235 1395 8 38O 1425 3 52 5 14581 67o 14941 815134k71 95 1370 6
20、 24o 1396 8 385 1 426 4 53 o 1 459 3 675 1495 4 82ol-347 9 10o 1371 5 245 1397 8 39o 1427 5 535 1 460 5 68o 1496 7 8251348 7 105 1372 3 25o 1398 7 395 1428 5 54o 1461 6 68 5 1498 o 83 o1349 4 11 o 13731 255 1399 7 40 o 1429 6 545 1462 8 69 o 1499 3 83 51350 2 115 1374 o 26o 1400 7 405 1430 7 55o 146
21、3 9 695 1500 7 84o1351 o 12o 1374 9 26 5 140l 6 410 143l 8 55 5 14651 70o 1502 o 8451351 8 125 1 375 8 27o 1402 6 415 I432 9 56o 1466 3 705 1 503 3 85o1352 6 13o 1376 7 275 1 403 6 42o 1434 o 565 1467 6 71o1353 3 135 1377 5 28o 1404 6 425 14351 57o 1468 8 71513541 14o 13781 285 1405 6 43 0 1436 2 57
22、5 1470 o 72o附录B(资料性附录)20时可溶性固形物含量对温度的校正表表B1 20时可溶性固形物含量对温度的校正表CBT 121432008可溶性固形物含量温度0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70应减去之校正值10 050 054 058 061 064 066 068 070 072 073 074 075 076 0 78 079】1 046 049 0 53 0。55 058 0，60 062 064 065 O，66 057 068 069 0，70 07112 042 045 048 050 052 054 056 057 0
23、58 059 060 061 061 063 06313 037 040 042 0 44 046 048 049 050 O5l 052 053 054 054 055 05514 033 O35 037 039 040 O41 042 043 044 045 045 046 046 047 04815 027 029 0 31 033 034 034 035 036 037 037 038 039 039 040 0 4016 022 024 0 25 026 027 028 0 28 029 030 030 030 031 031 032 03217 017 018 0 19 020 0
24、 21 021 021 022 022 023 023 023 023 024 0 2418 012 013 0 13 014 0 14 014 014 01 5 015 01S 015 016 016 016 01619 006 006 006 007 0 07 007 007 008 0 08 008 008 0 08 008 008 O 08应加入之校正值21 006 007 0 07 007 007 0 08 008 008 008 008 008 008 008 0 08 00822 013 O13 0 14 014 0 15 0 15 0 15 015 015 016 016 01
25、6 0 16 01 6 01623 019 020 021 022 0 22 0 23 0 23 0，23 023 024 0 24 024 024 024 02424 O26 027 0 28 029 0 30 0 30 031 031 031 031 031 0 32 032 032 03225 033 035 036 037 0 38 0 38 039 040 040 040 040 0 40 040 040 04026 040 042 043 044 0 45 046 0 47 0 48 048 048 048 048 0 48 048 04827 048 050 052 053 05
26、4 0 55 0 55 056 0 56 056 056 056 056 056 05628 056 057 060 061 0 62 0 63 063 063 064 064 064 064 064 064 0 6429 064 066 068 069 07l 0 72 0 72 073 0 73 073 073 073 073 073 07330 072 074 077 078 079 0 80 080 0 81 0 81 081 O8l 0 81 081 081 0 81GBT 12 1432008附录c(规范性附录)钾的测定c1方法原理钾的基态原子吸收钾空心阴极灯发射的共振线，吸收强度
27、与钾的浓度成正比。将处理过的样品吸入原子吸收分光光度计的火焰原子化系统中，使钾离子原子化，在共振线7665 nm处测定吸光度，与标准系列溶液比较，确定样品中钾的含量。添加适量钠盐，消除电离干扰。C2试剂c21硝酸。c22硫酸。C23 10 gL氯化钠溶液：称取10 g氯化钠，用水溶解后定容至100mL。C24体积分数为10的硝酸溶液：量取1体积硝酸(c21)，注入9体积水中。C25体积分数为50的盐酸溶液：量取I体积盐酸，注入1体积水中。C26钾标准溶液：称取0953 4 g经1504-3烘烤2 h的氯化钾，精确至0000 I g。置于50 mL烧杯中。加水溶解，转移到500 mL容量瓶中。加
28、2 mL盐酸溶液(c25)，用水定容至刻度，摇匀。吸取10OO mL于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。此溶液钾的含量为100 mgL。C3仪器与设备C31原子吸收分光光度计：带钾空心阴极灯。c32空气压缩机或空气钢瓶气。C33乙炔钢瓶气。c34凯氏烧瓶：500 mL。C35天平：感量i0 mg。C36分析天平：感量0i mg。C4试液的制备称取一定量经混合均匀的样品(浓缩果汁100 g200 g；果汁500 glo00 g；果汁饮料200 g500 g；水果饮料和果汁型碳酸饮料500 gi000 g)于500 mL凯氏烧瓶中，加入2粒3粒玻璃珠、10 mL15 mL硝酸(C21)、
29、5 mL硫酸(c22)(称样量大于20 g的样品，应预先加热除去部分水分，待瓶中样液剩余约20 g时停止加热，冷却，再加硝酸、硫酸)，浸泡约2 h或静置过夜。先用微火加热，待剧烈反应停止后，加大火力。溶液开始变为棕色时，立即滴加硝酸(c21)，直至溶液透明，颜色不再变深为止。继续加热数分钟至浓白烟逸出，冷却，小心加入20 mL水，再加热至白烟逸出，冷却至室温。将溶液转移到50 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，备用。取相同量的硝酸、硫酸，按上述步骤做试剂空白消化液，备用。C5分析步骤C51工作曲线的绘制吸取000 mL、I00 mL、200 mL、400 mL、600 mL、800 mL、i
30、000 mL钾标准溶液(c26)，分别置于50 mL容量瓶中，加10 mL硝酸溶液(c24)、20 mL氯化钠溶液(C23)，用水定容至刻16GBT 121432008度，摇匀，配制成00 mgL、20 mgL、40 mgL、80 mgL、120 mgL、160 mgL、20O mgL钾标准系列溶液。依次将上述标准系列溶液吸人原子化系统中，用00mgL钾标准溶液调整零点，于波长7665 rim处测定钾标准系列溶液的吸光度。以吸光度为纵坐标，钾标准系列溶液的浓度为横坐标，绘制工作曲线或计算回归方程。C52测定吸取50 mL200 mL试液(c4)于50 mL容量瓶中，加10 mL硝酸溶液(c24
31、)、20 mL氯化钠溶液(c23)，用水定容至刻度，摇匀。将此溶液吸人原子化系统中，用试剂空白溶液(c51)调整零点，于波长7665 nm处测吸光度，在工作曲线上查出(或用回归方程计算出)试液中钾的含量(“)。按上述步骤同时测定试剂空白消化液中钾的含量()。c6结果计算样品中钾的含量按式(c1)计算鱼二塑一堕二鱼!丕!裔器 ”州l(C1)式中：z一一一样品中钾的含量，单位为毫克每千克(mgkg)；”从工作曲线上查出(或用回归方程计算出)试液中钾的含量，单位为毫克每升(ragL)；一从工作曲线上查出(或用回归方程计算出)试剂空白消化液中钾的含量，单位为毫克每升(mgI。)；仇1样品的质量，单位为
32、克(g)；v，测定时吸取试液的体积，单位为毫升(mL)。C7允许差计算结果精确至小数点后第一位。同一样品的两次测定结果之差不得超过平均值的5o。GBT 121432008附录D(规范性附录)总磷的测定D1方法原理样品经消化后，在酸性条件下，磷酸盐与钒一钼酸铵反应呈现黄色，在波长400 nm处测定溶液的吸光度，与标准系列溶液比较，确定样品中总磷的含量。D2试剂D21硝酸。D22硫酸。D23体积分数为10的硫酸溶液：量取1体积硫酸(D22)，缓慢注入9体积水中。D24钒一钼酸溶液：称取200 g钼酸铵，溶解在约400mL 50热水中，冷却。称取10 g偏钒酸铵，溶解在300mL 50热水中，冷却，
33、边搅拌，边加入1mL硫酸(D22)。将钼酸铵溶液缓慢加到偏钒酸铵溶液中，搅拌均匀后转移到1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。D25磷标准溶液：称取0439 4 g经1052烘烤2 h的磷酸二氢钾，精确至0000 1 g。置于50 mL烧杯中。加水溶解，转移到1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。此溶液磷的含量为100 mgL。D3仪器D31紫外分光光度计。D32凯氏烧瓶：500 mL。D33天平：感量10 mg。D34分析天平：感量01 mg。D4试液的制备按第c4章中的步骤操作。D5分析步骤D51工作曲线的绘制吸取000 mL、100 mL、200 mL、3oo mL、400
34、 mL、500 mL磷标准溶液(D25)，分别置于50 mL容量瓶中，加10 mL硫酸溶液(D23)，摇匀，加lO mL钒一钼酸溶液(D24)，用水定容至刻度，摇匀，配制成00 mgL、20 mgL、40 mgL、60 mgL、80 mgL、100 mgL磷标准系列溶液。在室温下放置10 min。用1 cm比色皿，以00 mgL磷标准溶液调整零点，在波长400 nm处测定磷标准系列溶液的吸光度。以吸光度为纵坐标，磷的含量为横坐标，绘制工作曲线或计算回归方程。D52测定吸取50 mL100 mL试液(第D4章)于50 mL容量瓶中，加硫酸溶液(D23)补足至10 mL，以下步骤按D51操作。以试
35、剂空白溶液调整零点，在波长400 nm处测定吸光度。从工作曲线上查出(或用回归方程计算出)试液中磷的含量(c：)，同时测定试剂空白消化液(第C4章)中磷的含量()。D6结果计算样品中总磷的含量按式(D1)计算：1 8屯一c02“一瓦可丽“丽m2V2GBT 121432008(D1)式中：z：样品中总磷的含量，单位为毫克每千克(mgkg)；c：从工作曲线上查出(或用回归方程计算出)试液中磷的含量，单位为毫克每升(mgL)；从工作曲线上查出(或用回归方程计算出)试剂空白消化液中磷的含量，单位为毫克每升(mgL)；gt。样品的质量，单位为克(g)；V：测定时吸取试液的体积，单位为毫升(mL)。D7允
36、许差计算结果精确至小数点后第一位。同一样品的两次测定结果之差不得超过平均值的50。GBT 121432008附录E(规范性附录)L一脯氨酸的测定E1方法原理Lr脯氨酸与水合茚三酮作用，生成黄红色络合物。用乙酸丁酯萃取后的络合物，在波长509 ilm处测定吸光度，与标准系列溶液比较，确定样品中L一脯氨酸的含量。E2试剂E21乙酸丁酯。E22甲酸。E23无过氧化物乙二醇独甲醚：将数粒锌粒放人乙二醇独甲醚中，在避光暗处放置2 d。E24 30茚三酮乙二醇独甲醚溶液：称取30 g水合茚三酮，溶解在100 mL无过氧化物的乙二醇独甲醚溶液(E23)中，贮存在棕色瓶内，置避光处。此溶液易被氧化，应每周制备
37、一次。E25 L_脯氨酸标准贮备溶液：称取0050 0 g L脯氨酸(生化试剂，C。H。NO。，a口一一83。-85。)，精确至0000 1 g，置于50 mL烧杯中，加水溶解，转移到100 mL棕色容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，贮存在约4冰箱内。此溶液含L脯氨酸为500 mgL。E3仪器E31分光光度计。E32具塞试管：25 mL。E33离心机：转速不低于4 000 rrain，带10 ml，具塞离心管。E34分析天平：感量01 mg。E35天平：感量10 mg。E4试液的制备称取一定量混合均匀的样品(浓缩汁100 g；果汁500 g；果汁饮料、水果饮料和果汁型碳酸饮料1000 g2000
38、 g)于200 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，备用。E5分析步骤E51工作曲线的绘制E511显色吸取000 mL、050 mL、100 mL、250 mL、400 mL、500 mL L脯氨酸贮备溶液(E25)于50 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，配制成00 mgL、50 ragL、100 mgL、250 mgL、400 mgL、500 mgL的L_脯氨酸标准系列溶液。吸取上述标准系列溶液各10 mL，分别置于6支25 mL具塞试管(E 32)中，各加1 mL甲酸(E22)，充分摇匀，加2 mL茚三酮乙二醇独甲醚溶液(E24)，摇匀。将6支试管同时置于l 000 mL烧杯的沸水浴中
39、(电炉与烧杯间应垫石棉网，水浴液面应高于试管液面)。待烧杯中的水沸腾后，精确计时15 rnin，同时取出6支试管，置于2022水浴中冷却10 rain。E512萃取、测定吸光度在上述6支试管中各加100 mL乙酸丁酯(E21)，盖塞，充分摇匀，使黄红色络合物萃取到乙酸2nGBT 121432008丁酯液层中。静置数分钟，将试管中的乙酸丁酯溶液分别倒人10 mL具塞离心管中，盖塞。以2 500 rrain转速，离心5 rain。将上层清液小心倒人1 cm比色皿中，以试剂空白溶液调整零点，在波长509 nm处测定各上层清液的吸光度。以吸光度为纵坐标，L-脯氨酸的浓度为横坐标，绘制工作曲线或计算回归
40、方程。E52试液的测定吸取10 mL试液(第E4章)于25 mL具塞试管(E32)中，以下步骤按E51操作。从工作曲线上查出(或用回归方程计算出)试液中L一脯氨酸的含量(“)。E6结果计算样品中L脯氨酸的含量按式(E1)计算： ：。一L一趔翥1o 弛(E1)式中：z。样品中L_脯氨酸的含量，单位为毫克每千克(mgkg)；“从工作曲线上查出(或用回归方程计算出)试液中L-脯氨酸的含量，单位为毫克每升(ragL)样品的质量，单位为克(g)。E7允许差计算结果精确至小数点后第一位。同一样品的两次测定结果之差不得超过平均值的50。GBT 121432008附录F(规范性附录)总D一异柠檬酸的测定F1方
41、法原理在异柠檬酸脱氢酶(ICDH)催化下，样品中的D一异柠檬酸盐与烟酰胺腺嘌呤一双核苷酸磷酸(NADP)作用，生成NADPH的含量，相当于D一异柠檬酸盐的量。在波长340 nm处测定吸光度，确定样品中总D一异柠檬酸的含量。D-柠檬酸盐+NADP三旦已a一氧化戊二酸盐+NADPH+c02+HF2试剂F21组合试剂盒：l号瓶：内含咪唑缓冲液(稳定性)30 mL，pH一71 52号瓶：内含p一烟酰胺一腺嘌呤一双核苷酸一磷酸二钠45 mg、硫酸锰10 mg；3号瓶：内含异柠檬酸脱氢酶2 mg，5(u)个活力单位。注：组合试剂盒型号为Cat No414433。F22 NADP溶液：将F21中1号瓶内的溶
42、液升温至2025，倒人2号瓶中，使2号瓶的物质全部溶解，混合均匀。F23异柠檬酸脱氢酶溶液：用18 mL水溶解3号瓶的物质，混合均匀。F24 4 molL氢氧化钠溶液：称取16 g氢氧化铺，加水溶解，定容至100 mL。F25 4 molL盐酸溶液：量取334 mL盐酸，用水定容至100 mL。F26 300 gL氯化钡溶液：称取30 g氯化钡，溶解于热水中，冷却后定容至100mL。F27 71 gL硫酸钠溶液：称取71 g无水硫酸钠，溶解于水中，定容至l 000 mL。F28缓冲溶液：称取24 g三羟甲基氨甲烷和0035 g乙二胺四乙酸二钠，用80 mL水溶解。先用4 molL的盐酸调整pH
43、一72左右，再用l molL盐酸溶液调整pH一7o(N酸度计测定)，用水定容至100mL。F29氨水。F210丙酮。F211洗涤溶液：量取150mL水，加入10mL氨水(F29)、100mL丙酮(F210)，混匀。F3仪器与设备F31紫外分光光度计：带石英比色皿，光程1 CFII。F32酸度计：精度01pH单位。F33离心机：转速不低于4 000 rmin，离心管容积大于80 mL。F34微量可调移液管：10“L50*L，允许误差：48；0*L1 000 pL，允许误差：100 pL，20；500 vL，10；1 000 vL，士10。F35玻璃棒或塑料棒：自制，直径约3 mm，一端带钩。F3
44、6分析天平：感量01 mg。F37天平：感量10 mg，500 mg，1 g。22GBT 121432008F4试液的制备F41果汁型碳酸饮料称取500 g样品于1 000 mL烧杯中，加热煮沸，在微沸状态下保持5 rain，并不断搅拌。待二氧化碳基本除净后冷却至室温，称量。用水补足至加热前的质量，备用。F42浓缩果汁、果汁、果汁饮料、水果饮料混匀后备用。F5分析步骤F51水解按表F1规定的取样量称取试液。浓缩汁、果汁：将试样称取在50 mL烧杯中，加5 mL氢氧化钠溶液(F24)。用玻璃棒搅拌均匀，在室温放置10 min，使之水解。将溶液移人离心管(F33)中，用5 mL盐酸溶液(F25)和10 mL20mL水，分数次洗涤烧杯，并人离心管中，使总体积约为30 mL，搅拌均匀。果汁饮料、水果饮料、果汁型碳酸饮料：将试液称取在离心管(F，33)中，加5 mL氢氧化钠溶液(F24)，用玻璃棒搅拌均匀，在室温放置10rain，使之水解。加5 mL盐酸溶液(F25)，搅拌均匀。表F1水解时取样量和比色测定时吸取量样品名称 水
