1、GB 1308691 本标准参照采用国际标准ISO 68661985动物饲料中游离的和总棉酚的测定方法。 1 主题内容与适用范围 本标准规定了饲料中游离棉酚的测定方法。 本标准适用于棉籽粉、棉籽饼（粕）和含有这些物质的配合饲料（包括混合饲料）中游离棉酚的测定。 2 原理 在3-氨基-1-丙醇存在下用异丙醇与正己烷的混合溶剂提取游离棉酚，用苯胺使棉酚转化为苯胺棉酚，在最大吸收波长440nm处进行比色测定。 3 试剂和溶液 除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。 3.1 异丙醇（CH3）2CHOH，HG 31167。3.2 正己烷。 3.3 冰乙酸（GB 676）。 3
2、.4 苯胺（C6H5NH2，GB 691） ：如果测定的空白试验吸收值超过0.022时，在苯胺中加入锌粉进行蒸馏，弃去开始和最后的10蒸馏部分，放入棕色的玻璃瓶内贮存在（04）冰箱中，该试剂可稳定几个月。 3.5 3-氨基-1-丙醇（H2NCH2CH2CH2OH）。3.6 异丙醇-正己烷混合溶剂 ：64（ V/V）。 3.7 溶剂A ：量取约500mL异丙醇、正己烷混合溶剂（3.6）、2mL3-氨基-1-丙醇（3.5）、8mL冰乙酸（3.3）和50mL水于1 000mL的容量瓶中，再用异丙醇-正己烷混合溶剂（3.6）定容至刻度。 4 仪器、设备 4.1 分光光度计：有10mm比色池，可在440
3、nm处测量吸光度。 4.2 振荡器：振荡频率120130次/min（往复）。 4.3 恒温水浴。 4.4 具塞三角烧瓶 ：100、250mL。 4.5 容量瓶：25mL（棕色）。 4.6 吸量管：1、3、10mL。 页码，1/3GB 13086912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130860A.htm4.7 移液管：10、50mL。 4.8 漏斗：直径50mm。 4.9 表玻璃：直径60mm。 5 试样制备 采集具有代表性的棉籽饼样品，至少2kg，四分法缩分至约250g，磨碎，过2.8mm孔筛，混匀，装入密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。 6
4、测定步骤 6.1 称取12g试样（精确到0.001g），置于250mL具塞三角烧瓶（4.4）中，加入20粒玻璃珠，用移液管（4.7）准确加入50mL溶剂A（3.7），塞紧瓶塞，放入振荡器（4.2）内振荡1h（每分钟120次左右）。用干燥的定量滤纸过滤，过滤时在漏斗（4.8）上加盖一表玻璃（4.9）以减少溶剂挥发，弃去最初几滴滤液，收集滤液于100mL具塞三角烧瓶（4.4）中。 6.2 用吸量管（4.6）吸取等量双份滤液510mL（每份约含50100 g的棉酚）分别至两个25mL棕色容量瓶（4.5）a和b中，如果需要，用溶剂A（3.7）补充至10mL。 6.3 用异丙醇-正己烷混合溶剂（3.6）
5、稀释瓶a至刻度，摇匀，该溶液用作试样测定液的参比溶液。 6.4 用移液管（4.7）吸取2份10mL的溶剂A（3.7）分别至两个25mL棕色容量瓶（4.5）a0和b0中。 6.5 用异丙醇-正己烷混合溶剂（3.6）补充瓶a0至刻度，摇匀，该溶液用作空白测定液的参比溶液。 6.6 加2.0mL苯胺（3.4）于容量瓶b和b0中，在沸水浴（4.3）上加热30min显色。6.7 冷却至室温，用异丙醇-正己烷混合溶剂（3.6）定容，摇匀并静置1h 。 6.8 用10mm比色池，在波长440nm处，用分光光度计（4.1）以a0为参比溶液测定空白测定液b0的吸光度，以a为参比溶液测定试样测定液b的吸光度，从试
6、样测定液的吸光度值中减去空白测定液的吸光度值，得到校正吸光度 A。 7 测定结果 7.1 计算公式 式中 ： X游离棉酚含量，mg/kg；A 校正吸光度；m 试样质量，g；页码，2/3GB 13086912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130860A.htm7.2 结果表示 每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 结果表示到20mg/kg。 7.3 重复性 同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的差值： 在游离棉酚含量小于500mg/kg时，不得超过平均值的15； 在游离棉酚含量大于500mg/kg而小于750mg/kg时，不得超过75mg/kg； 在游离棉酚含量超过750mg/kg时，不得超过平均值的10。 V 测定用滤液的体积，mL；a质量吸收系数，游离棉酚为62.5cm-1g-1L。页码，3/3GB 13086912006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbkK130860A.htm
