1、G!T 14924. 10 2001 前: 本标准的全部技术内容为推荐性的。本标准从G814924-1991(头验动物全价营养饲料J中分离出米.形成独立的标准向牛L标准规定f实验功物配合饲料中三种色氨酸的测定方法:第4法高效液相/L，第二i1;荧光分光Jt度/，第法分光光度讼。第法为仲裁/.L丰标准放其配套标准臼实施之日起.代替G81492419940 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。牛;标准起草单位:中国实验动物学会。木标111主雯起草人张瑜、周瑞华、贾建斌、王国栋、刘素梅、郑陶、文IJ秀梅。本标准由国家科学技本部委托技术归口单位中国实验动物学会负责解释。本标准于1994年1月首
2、次发布。三11 1 范围中华人民共和国国家标准实验动物配合饲料氨基酸的测定Laboratory animals-Formula feeds Determination of amino acids 丰标准规定了实验动物配合饲料中氨基酸的测定方法。GB!T 14924.10 2001 代替GllH9211091丰标准适用于实验动物小鼠、大鼠、兔、豚鼠、地鼠、犬和猴的配合饲料及其原料中氨基酸的测定。2 引用标准l、伊IJ标准所包含的条文.通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时.所示版本均为有放所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。C!T 14965-
3、1994 食物中氨基酸的测定方法(;l!T 15400 1994 饲料中色氨酸的测定方法分光光度法GB!T 1246200(J 饲料中氨基酸的测定3 测定方法3. 1 配合饲料中练慕酸的测定投(;)!T1816、GB厅14965中相关规定执行。3. 2 阳介饲料中色氨酸的测定3- 2 1 第一法色氨酸的测定J在GB!T 15400 .1994中的规定执行。3. 2. 2寄:法荧光分光光度法3.2.2.1 原理创料1蛋白质在酸水解过程中.其色氨酸极易被水解。本法用碱水解蛋白质直接测定色氨酸的犬然化J(;俨在蛋白质水解液中，只有色氨酸和酷氨酸可以检测到荧光。在pH为11时，色氨酸的荧光强度比附氨酸
4、大100倍.且两种氨基酸的荧光峰相差40nm以上。根据该特点.可在有大量酶氨酸存在f，检测包氮龄的含量。3.2.22 i式flJ3.2.2.2.1 氮氧化例j容液(5mol!L) ，将20g氢氧化纳用。.5%可溶性淀粉榕解并定容至100mL，临用lj制。3. 2. 2 2. 2 尿素溶液(4mol!L)由apH到lL3.2.2.2.350%盐酸，j份浓盐酸(优级纯)加1份重蒸水。3.2.2.2.4 澳白望自If在水溶液(.5g/L)，O.lg7亮!Jl.盼蓝指示剂，加O.1 mol/1.号:氧化纳溶液中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001- 08 -29批准2002 - 05 -01实
5、施G8/T 14924.10 2001 .(ml.自己成终浓度为1).5g/L的水溶液。3.2.2.2.5 内纯氮(含量99.99 %)。3. 2.2.2.6 半醇Ip苯烧液含1辛醇巳3. 2.2.2.7 色氨酸标准贮备液(1mg/mU，准确称取色氨酸100mg，用。005mol儿，氮氧化f111溶液溶解并定窑军1(11) m1.。3. 2.2.2.8 包氨酸标准应用液(0.2mg/mLl，准确吸取色氨酸标准贮备液10mL于50mL容量瓶中月1水稀稀至刻度，使用时现配。3. 2.2.3 仪器荧光分光光度计、减压蒸发器、聚囚氟乙烯管(5mL)。2.2.4 样品处舰植物性样品粉碎后，贮于样品瓶中备
6、用。3.2.2.5 分析步骤3.2.2.5.1 样品制备2准确称取含粗蛋白质约5mg的样品.置于聚囚氟乙烯管中。加含可1容性淀粉b mol/L氧氧化纳溶液ImL.加入滴辛醇，将样品管放在一容器内。该容器外加冰、盐降温，抽真宇1.:, kPa(10 mmHg)以下，保持15rntnc充氮气再减庄，反复进行三次。将充氮减压容器密封，放人110( 炊箱rjr ，碱水解样品22人样品冷却后加(1, 1)盐酸。.7mL，用重馈水将样品分JjIJt人25mL容量瓶, I r .月11真面噎盼蓝作指示剂调pH至中性，用重蒸馆水定辛辛至刻度。3. 2.2.5.2 测定吸取样品液1mL，于10mL带塞刻度试管中
7、，加4mol/L尿素溶液(pHll)稀释至1 (J mL。于激发波长280nm，发射波长360nm下测定荧光强度，从标准曲线t查出该样品中包氨酸的命肘。3. 2. 2. 5. 3 标准曲线的绘制z取双份聚四氟乙烯试管分别取色氨酸标准应用液。.0.0.5.1.5.2. 0 mL , 圳、T色氨酸含量。0，0.1，0.3，0.4mg，按样品制备的同样步骤进行碱水解(3.3.1.5.1)，以测出的标准系列的荧光强度为纵坐标.以色氨酸标准含量为横坐标，绘制标准曲线。3.2.2.61t赁见式(1 )。x = c x f =一X100 m ) 1 ( 式rj，X-色氨酸含量，mg/lOOg; 4 从标准曲线查色氨酸含量，mg;/ 稀释倍数;川样品质量，g，3.2.2.7 允许差宝内量复测定相对标准偏差:;10%, 3.2. 3第三法分光光度法战GB/T15400规定执行。
