1、GB/T 14926.1594 1 主题内容与适用范围 本标准规定了肺炎链球菌检验，适用于实验小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠和兔的检验。 2 引用标准 GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂 3 材料和试剂 3.1 血琼脂 GB 4789.28中3.6。 3.2 葡萄糖肉浸液肉汤 3.2.1 成分 3.2.2 制法：上述各成分混合，加热溶解，调pH7.6，分装中试管，每管10mL，115 15min灭菌备用。 3.3 革兰氏染色法 GB 4789.28中1.2。 3.4 荚膜染色 3.4.1 成分 取一定量印度墨汁，按2加入甲醛，混合备用。 革兰氏染色液复染用石炭酸复红液。
2、3.4.2 染色法 将培养于血清肉汤中的细菌取一白金环放载物玻片上，然后取一白金环2甲醛印度墨汁与其混合，推成薄片，自然干燥，火焰固定。 滴加碳酸复红液，染色30s，吸去多余液体，干燥，油镜观察。 3.5 10去氧胆酸钠溶液 3.5.1 成分 牛肉浸液肉汤 1000mL蛋白胨 10g磷酸氢二钠 2g氯化钠 3g葡萄糖 1gpH 7.6 去氧胆酸钠 10g页码，1/3GB/T 14926.15942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92615K.htm3.5.2 制法：溶解即可。 4 检验程序 5 操作步骤 5.1 采样，采取气管分泌物或病灶标本。 5
3、.2 分离培养：检样用接种环直接分离于血琼脂平皿上361，10CO2，下培养24h；同时接种葡萄糖肉浸液肉汤，同上培养和分离。然后挑起可疑菌落。其菌落形态为圆形、扁平，似子母扣样，其周围有狭窄草绿色溶血环（a溶血）。挑取后分纯于血平皿上，以备进一步鉴定。 5.3 鉴定试验 5.3.1 革兰氏染色：肺炎链球菌为革兰氏阳性双球菌，钝头相对，尖头相背，似矛头状；有时呈短链排列。 5.3.2 荚膜染色，印度墨汁染色法。鉴定菌株，接种兔血清肉汤中，361温箱培养12h。取其一环滴于载玻片上的一端，另取一环2福尔马林印度墨汁，与菌液混合，推成薄片，自然干燥，火焰固定，再加革兰氏染色液中的石碳酸复红染液，染
4、色30s，吸取多余液体，使其干燥，油浸镜检。背景呈黑色，菌体染成红色，其周围有一较宽的无色透明环，即荚膜染色阳性。 5.3.3 胆盐溶解试验，取上述培养物1mL，加入10去氧胆酸钠34滴（0.2mL），放室温5、10、30min观察结果。肺炎链球菌可被溶解。 蒸馏水 100mL页码，2/3GB/T 14926.15942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92615K.htm5.3.4 肺炎链球菌和甲型链球菌的鉴别，见下表。 肺炎链球菌和甲型链球菌的鉴别 6 报告结果 凡符合上述各项实验结果，均可发出报告。否则可报告阴性。 肺炎链球菌 甲型链球菌生长特
5、性 普通琼脂斜面 不生长 生长普通肉汤 不生长 肉汤清或微混浊底层有颗粒沉淀0.1葡萄糖肉汤 均匀混浊生长，无沉淀肉汤清微混浊，底部有大量颗粒沉淀1血清肉汤 均匀混浊生长 同上 10羊血琼脂斜面 生长良好 生长良好菌落特点乙型溶血灰色，半透明，钮扣样，边缘整齐，表面光滑湿润，大小为11.5mm甲型溶血 米黄色，不透明，圆形突起大小0.51mm，边缘整齐，表面光滑5羊血平皿革兰氏染色阳性双球菌，钝头相对，尖头相背，呈矛头状，短链排列阳性球菌，圆形或卵圆形，呈短链或长链排列，似串珠状也有散在菌体胆盐溶解试验 阳性 阴性菊糖发醇试验 阳性 阴性荚膜染色 阳性 阴性页码，3/3GB/T 14926.15942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92615K.htm
