1、GB/T 14926.294 1 主题内容与适用范围 本标准规定了实验动物单核细胞增多性李氏杆菌的检验方法。适用于大鼠、小鼠、豚鼠和兔的检验。 2 引用标准 GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂 3 材料和试剂 3.1 血琼脂 GB 4789.28中3.6。 3.2 营养琼脂 GB 4789.28 中3.7。 3.3 CRT 液体培养基。 3.3.1 成分： 3.3.2 制法：将上述成分加热溶解，调pH分装三角瓶，12115min，灭菌备用。 3.3.3 抑制剂（加入上述培养基中），原液配制： 250mL上述培养基中加入：硫堇5mL，重铬酸钾4.15mL，三氧化铬0
2、.5mL，萘啶酮酸2.5mL，混匀后，再将pH调到7.2。 3.4 三糖铁琼脂 GB 4789.28 中3.24。 3.5 尿毒琼脂 GB 4789.28 中2.15。 3.6 硝酸盐培养基 GB 4789.28中2.17。 3.7 氧化酶试剂 GB 4789.28 中2.18。 3.8 半固体琼脂 GB 4789.28 中3.28。 牛肉膏粉 3g葡萄糖 2g氯化钠 5g蛋白胨 10g蒸馏水 1000mLpH 7.6硫堇 25mg/10mL（1/5甘油70溶解）重铬酸钾 500mg/10mL（加热溶解）三氧化铬 1000mg/10mL萘啶酮酸 100mg/10mL（1N NaOH 滴定溶解）
3、页码，1/3GB/T 14926.2942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92602K.htm3.9 磷酸葡萄糖胨水 GB 4789.28 中2.4。 3.10 李氏营养琼脂 CRT 液体培养基为基础液，加入琼脂（日本琼脂粉）15g，调pH值至7.2，121 15min灭菌，倒平皿。 4 检验程序 页码，2/3GB/T 14926.2942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92602K.htm斜光照射快速鉴别李氏杆菌示意图 5 检验步骤 5.1 采样：鼻咽部或气管分泌物、盲肠内容物、阴道分泌物和病变组织。
4、 5.2 分离培养：将接种的血平皿置361温箱培养2448h。增菌液置30 温箱培养1824h。血平皿上挑取圆形、光滑湿润，直径12mm并有狭窄透明溶血环的小菌落，转种到李氏营养琼脂平皿。取增菌液一环也同样接种该平皿，置37培养 1824h。 5.3 斜射光镜检查：将解剖镜、光源、平面镜如图所装置，使光源45度角照射到平面镜反射为解剖镜光源。平皿置载物台上，通过目镜观察，李氏杆菌呈现蓝绿色或灰绿色，圆形稍凸起，边齐小菌落。挑取可疑菌落进行纯培养。 5.4 形态与染色：李氏杆菌为革兰氏阳性小杆菌，大小0.40.50.52.0 m，通常成双排列，偶可见双球状，病变组织触片，有时见有弧形，单个排列，
5、“V”形 排列，两端浓染。 5.5 动力试验：将上述可疑培养物接种两支半固体，一支22，另一支37培养1824h后，22有鞭毛能运动，37无鞭毛不运动。 5.6 生化试验：将上述可疑培养物接种生化培养基，37培养1824h。李氏杆菌的生化特性及与相关菌种的区别见下表。 李斯特氏菌属菌种鉴别特征 V：反应不一致；：阳性；：阴性。 5.7 结果报告：综合以上生物学特性，生化试验结果，符合本菌要求作出阳性报告，不符合要求作出阴性报告。 菌 种 溶血试验 硝酸盐 甘露醇 鼠李糖 木 糖 MR VP 尿素单核细胞增 多性李氏菌 - - + + + -绵羊李氏菌 + - - - + + + -英氏李氏菌 - - - V + + + -威氏李氏菌 - - - V + + + -西尔李氏菌 + - - - + + + -格氏李氏菌 - - + - - + + -默氏李氏菌 - + + V - + + -页码，3/3GB/T 14926.2942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92602K.htm
