1、中华人民共和家标准畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量测定方法(高效液相色谱法)Method for determination of oxytetracyline tetracyline and chlortetracycline residues in meat (HPLC) 1 主题内容与适用范围本标准规定了畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的检测方法。GB/T 1 4931 . 1- 94 本标准适用于各种食用畜禽肉中士霉素、四环素、金霉素残留量的测定。最低检出浓度为，0.15 , 0.20,0.65 mg/kg. 2 原理样品经提取，微孔滤膜过滤后直接进样，用反相色谱分离，紫外检测
2、器检测，与标准比较定量，出峰顺序为土霉素、四环素、金霉素。标准加法定量。3试lliJ3. 1 乙脯(分析纯)。3. 2 O. 01 mol/L磷酸二氢销溶液.称取1.56 g( +0.01 g)磷酸二氢销(NaH，PH. 2H，O)榕于蒸馆水中，定容到100mL，经微孔滤膜(0.45m)过滤，备用。3. 3 土霉素(OTC)标准溶液z称取土霉素。.0100g(士O.000 1日)，用0.1mol/L盐酸溶液每毫升含土霉素1mg. 3. 4 四环素(TC)标准溶液z称取四环素。0100g(+O.OOI g)，用。.01mol/L盐酸溶液溶解并定容10.00 mL，此溶液每毫升含四环素1mg. 3
3、. 5 金霉素(CTC)标准溶液z称取金霉素。.0100g(士O.000 1日).溶于蒸馆水并定容成10.00mL，此溶液每毫升含金霉素1mg. 以上标准品均按1000单位/mg折算。3.33. 5溶液应于4C以下保存，可使用1周。3. 6 混合标准溶液=取3.3、3.4标准溶液各1.00 mL，取3.5标准溶液2.00mL，置于10mL容量瓶中，加蒸馆水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四环素各0.1mg，金霉素0.2mg，临时现配。3.7 5%高氯酸溶液。4 仪器4. 1 高效液相色谱仪HPLC)，具紫外检测器。5 色谱条件5. 1柱，ODS-C18(5m) 6.2 mmX15 cm。5.2
4、检测波长，355nm.中华人民共和国卫生部1994-01-24批准452 1994-08-01实施5.3 灵敏度0.002AUFS. 5.4 柱温=室温。5. 5 流速，1.0 mL/min。5. 6 进样量，10L。CB/T 1 4 931 . 1 - 94 5.7 流动相z乙腊/0.01mol/L磷酸二氢销溶液(用30%(V /V)硝酸溶液调节pH2.5) .35 65(V /1), 使用前用超声波脱气10min。6操作方法6. 1 样品测定s称取5.00 g (士0.01g)切碎的肉样(5mm).置于50mL锥形烧瓶中，加入5%高氯酸25.0mL，于振荡器上振荡提取10min，移入到离心
5、管中，以2000 r/min离心3min，取L.肯液经0.45m滤膜过滤，取溶液10L进样，记录峰高，从工作曲线上查得含量。6.2 工作曲线z分别称取7份切碎的肉样，每份5.00 g (士0.01日)，分别加入混合标准溶液。、25、50、100、150、200、250L(舍土霉素、四环素各为0、2.5、5.0、10.。、15.0、20.。、25.0阅，含金霉素。、5.。、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0g)，按6.1方法操作、以峰高为纵坐标，以抗生素含量为横坐标，绘制工作曲线。6.3 计算式中，X一一样品中抗生素含量.mg/kg;x = A X 1 000 一m X 1 000 A 样品溶液测得抗生素质量，吨m 样品质量，g。附加说明=本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由辽宁省食品卫生监督检验所、大连卫生检疫所、沈阳市卫生防疫站、辽宁省卫生职工医学院负责起草。本标准主要起草人霍永信、阎勇、卫锋、吴伯禄、马勇。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生食品部食品卫生监督检验所负责解释。453
