1、ICS 67.040. 10 C 53 GB 中华人民共和国国家标准G/T 18625-2002 茶中有机磷及氨基甲酸醋农药残留量的简易检验方法酶抑制法Method for simple determination of organophosphorus and carbamate pesticide residues in tea 一-Enzymeinhibition method 2002 - 01-28发布2002 - 06-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局GB/T 18625-2002 前-一一同本标准在制定过程中主要参考了以下标准:美国公职分析化学师协会AOAC12
2、由29.049-29.055食品中有机磷农药残留测定胆碱醋酶抑制法。本标准的附录A是规范性附录。本标准由辽宁省质量技术监督局提出。本标准由沈阳农业大学、拢阳市质量技术监督局苏家屯分局负责起草。本标准主要起草人:周艳明、高淑英、张会娟、王晓光、李亮亮、吴小琳、牛森。1 范围茶中有机磷及氨基甲酸醋农药残留量的简易检验方法酶抑制法GB/T 18625-2002 本标准规定了用酶抑制法测定茶中有机磷农药及氨基甲酸醋农药残留的简易检验方法。本标准适用于荼中有机磷农药及氨基甲酸醋农药残留的测定。2 原理有机磷农药及氨基甲酸酣类农药对胆碱醋酶的活性有抑制作用，在一定条件下，其抑制率取决于农药种类及其含量。在
3、pH8的溶液中，腆化硫代乙酷阻碱被胆碱醋酶水解，生成硫代胆碱。硫代胆碱具有还原性，能使蓝色的2.6-二氯能酣褪色.褪色程度与胆碱醋酶活性正相关，可在600nm比色测定，酶活性愈高时，吸光度值愈低。当样品提取液中有一定量的有机磷农药或氨基甲酸醋类农药存在时，酶活性受到抑制，吸光度信则较高。据此可判断样品中有机磷农药或氨基甲酸醋类农药的残留情况。样品提取液用氧化剂氧化，可提高某些有机磷农药的抑制率，因而可提高其测定灵敏度，过量的氧化剂再用还原剂还原，以免于扰测定。3 试剂3. 1 底物榕破:2%腆化硫代乙酷胆碱水洛液.1g腆化硫代乙酷胆碱，加缓冲破溶解并定容至50mLo 3.2 缓冲液pH8的三起
4、甲基氨基甲烧(Tris)-盐酸缓冲破:50 mL O. 1 mol/L Tris加29.2 mL O. 1 mol/L盐酸加水定容至100mL。3. 3 显色剂:0.04%2.6-二氧蘸酣水溶液。3.4 氧化剂:0.5%次氯酸钙水溶被。3. 5 还原剂:10%亚硝酸铀水溶液。3- 6 胆碱醋酶液:0.2g酶粉(其制备方法见附录A)加10时，缓冲液溶解。3. 7 脱色剂z活性炭。3.8 丙酣:分析纯。3. 9 碳酸钙:分析纯。4 仪器分光光度计c5 分析步骤5.1 样品提取取0.:1g荼置于10mL烧杯中，加5rnL丙在M浸泡5rnin.不时振摇，再加0.2g碳酸钙。注2以上操作应在Jfi1S(
5、温度下进行。GB/T 18625-2002 5.2 氧化取0.5mL丙酬提取液于5mL烧杯中，吹于后加0.3mL缓冲液溶解。加入氧化剂。.1mL，摇匀后放置10mino再加入还原剂。.3mL，摇匀。5.3 酶解加入酶掖0.2mL，摇匀，放置10min，再加入底物溶液0.2mL，显色剂0.1mL，放置5min后测定。5.4 剖定6 结果6.1 测定结果的使用当测定值在1.0以下当测定值在1.0.-.，1当测定值为1.3测定值与农药残6.2 方法最低栓出本方法最假检2 农药敌敌畏甲基对硫磷乐果辛硫磷内吸磷乙It甲胶磷峡喃丹抗蜿威出浓度5.0 2.0 A.1 试剂A. 1. 1 0.1 mol/L
6、pH6. 0磷酸缓冲液附录A(规范性附录)胆碱醋酶粉的制备GB/T 18625-2002 0.1 mol/L磷酸氢二铀溶液:17.56g磷酸氢二铀(NazHP04 2HzO)溶于1000 mL水中。0.1 mol/L磷酸二氢铀溶液:13.80g磷酸二氢铀(NaHzP04 2HzO)溶于1000 mL水中。将12.3mL O. 1 mol/L磷酸氢二铀溶液与87.7mL O. 1 mol/L磷酸二氢铀溶液混合，即为O. 1 mol/L pH6. 0磷酸缓冲液。A. 1. 2 0.005 mol/L pH6. 0磷酸缓冲液取50mL O. 1 mol/L pH6. 0磷酸缓冲液(A.1. 1)，加
7、水稀释至1000 mLo A. 1- 3 0.5 mol/L氢氧化铀-0.5mol/L氯化铀溶液1. 0 mol/L氢氧化锅溶液:取40g氢氧化锅溶于1000 mL水中。1. 0 mol/L氯化铀溶液:取58.5g氯化铀溶于1000 mL水中。将上两液1: 1混合，即得0.5mol/L氢氧化纳-0.5mol/L氧化纳溶液。A. 1- 4 O. 5 mol/L盐酸-0.5mol/L氧化铀溶液1.0 mol/L盐酸溶液z取83.33mL浓盐酸溶于1000 mL水中。将1.0 mol/L盐酸溶液与1.0 mol/L氯化铀溶液1:171昆合，即得0.5mol/L盐酸。.5mol/L氯化铀溶液。A.1.
8、5 搂甲基纤维素(CM-纤维素)干粉A.2 装置A.2.1 梯度混合器:两瓶连通式，每瓶容量200mL。A.2.2 柱层析系统:1. 5 X 40 cm玻璃层析柱，流量可达2mL/min蠕动泵。A. 2. 3 冷冻干燥机。A.3 程序A.3.1 搂甲基纤维素的处理取10g竣甲基纤维素(CM-纤维素)于粉置于烧杯中，加入100mL 0.5 mol/L氢氧化锅。.5mol/L氯化锅溶液，混匀，静置15min后，用布氏漏斗抽滤，水洗捷饼至中性。将此滤饼再悬浮于100 mL 1 mol/L盐酸溶被中，混匀，静置10min后再用布氏漏斗抽攘，水洗滤饼至中性。再将滤饼悬浮于100mL O. 5 mol/L
9、盐酸0.5mol/L氯化纳溶液中，混匀，静置15min后用布氏漏斗抽滤，水洗椿饼至中性。将滤饼悬浮于O.005 mol/L pH6. 0磷酸缓冲液(A.1. 2)中。A. 3. 2 胆髓醋酶的提取取5Og新鲜食用面粉置三角瓶中，加25Om叫丑吐1过L蒸榴7水1c，振荡30m丑llll静置30min以上，取上清液经500o r旷/min离心2却omi扫in0 。收集上清液用冷冻干燥机浓缩至20mL左右，为胆碱醋酶粗提掖，保存于冰箱中待纯化。A. 3. 3 胆醋醋酶粗提液的纯化将处理好的竣甲基纤维素悬浮液加入层析柱中，加150mL O. 005 mol/L pH6. 0磷酸缓冲液 . NOON-mN俨GB/T 18625-2002 (A. 1. 2)于梯度混合器的初始液瓶中，加150mL 0.1 mol/L pH6. 0磷酸缓冲液(A.1. 1)于梯度提合器的高浓度液瓶中。连接柱层析装置，以2mL/min流速做梯度洗脱，收集后/2流出被cA. 3. 4 冷冻干燥将A.3.3中的流出液用冷冻于操机干燥成于粉，以0.2g/瓶封装于安部瓶中备用，于4C冰箱中可保存1年有效。同阁。a 侵权必究书号:135066 .1-18310 定价:800元句民版权专有GB/T 18625-2002 a
