1、ICS 67. 220. 10 B 36 GB 中华人民共和国国家标准GB/T 22293-2008/ ISO 13685 : 1997 姜及其油树脂主要刺激成分测定HPLC法Ginger and its oleoresins-Detcrmination of the main pungent components-Method using high-performance liquid chromatography lSO 13685 : 1997 ,Ginger and its oleoresins一Determinatio n of the main pungent components
2、Cgingcrols and shogaols)一Method using high-performance liquid chromatography , IDT 2008-08-12发布2009-03-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检菠总局中非中国国家标准化管理委员会战叩G/I、22293-2008/ISO13685: 1997 刚昌本标准等同采用ISO13685:1997英文版。本标准等同翻译ISO13685 :1 997 0 为便于使用，本标准做了下列编辑性修改:a) 本国际标准一词改为本标准;b用小数点代替作为小数点的逗号c) 将I巳SO13685中的部分脚注和警示语融入本标
3、准条文中B本标准的附录八、附录B、附录C、附录D、附录E均为资料性附录.本标准由中华全国供销合作总社提出.本标准由中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究院归口.本标准起草单位:中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究院。本标准主要起草人:陈仕荣、张卫明.1 GB/ T 22293-2008/ISO 13685: 1997 姜及其油树脂主要剌激成分测定HPLC法1 范围本标准规定了测定于姜及姜汕树脂中姜醉、姜酣(简写为6;、8G、lOG、6S、8J-S、10S)的反相HPLC测定方法。本标准适用于干姜和姜讪树脂中姜醇、安酣的测定，注:姜醉和i姜盼化学结构式参见附录A.2 规范性引用立件
4、下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。儿是注目期的引用文件，其随后所有的修改lP-(不包括却J误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准述成协议的各方研究是甜可使用这些文件的革新版本。儿是不住:r期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 12729. 3香辛料和调昧品分析用粉末试样的制备(GB/T12729. 3- 2008 , IS0 2825: 1981,MOD) GB/T 12729.6香辛料和l调昧品水分含量的测定(蒸馆法)(GB/ T 12729. 6 2008 , IS0 939 : 1980 ,NEQ) 3 原理在常温、常压下，用rp醉苹取于姜粉中
5、的刺激性成分，减压浓缩萃取物，所得浓缩液直接用反相HPLC法进行分析。用去酸香草酸j段(NVA)作外标进行定量。4 试剂分析纯试剂，除特别说明外，均用HPLC级纯水。4. 1 外标圭酸香卫在自克服(NV八)的黯点为42C44 c之间，在本标准规定条件下，用HPLC分析时，得到单一色i普峰出峰时间在3min8 min之间，峰丽积至少为总而积的98%).4.2 溶剂4.2.1 甲醉:HPLC级.4.2.2 币醇t分析纯。4.2.3 乙腊:HPLC级。4.2.4 冰乙酸。5 仪器通用实验室仪器，其他仪器如下。5.1 色谱仪可用于HPLC分析的色谱仪，其配置如下:a) 进样系统:能准确进样20，.lL
6、的样品EM 固定波长(280nm)紫外检测器;GB/T 22293-2008/ISO 13685: 1997 c) 具有基线校正功能、灵敏度为0.25a. u. f. SO. 5 a. u. f. s.能精确测量峰面积的记录仪或积分仪。5.2 不锈钢柱:250mmX归.6mm、内充填5mC1sCODS)。5. 3 旋转式真空蒸发器。5. 4 真空过滤器。5. 5 FH型微膜过滤器t孔径0.5m，用于有机禧剂。5.6 HA型微膜过滤器z孔径0.45m，用于含水溶剂。5. 7 移液管:容量20mLo 5. 8 巴士德吸管。5. 9 容量瓶:5mL、25mL、1005. 10 圆底烧瓶:100mLo
7、 5. 11 分析天平:感量土o.Qil 6 样品的制备6.2 姜油树脂取样前应将7 检测方法7. 1 NVA标准7.2 NVA样品溶7.2.1 干姜称取1.000 g姜放置12h以上，用吸管旋转式真空蒸发器于10胁用巴士德吸管(5.8)转刻度，盖好容量瓶后剧烈振摇。7.2.2 姜油树脂称取0.500g姜油于100mL容量瓶(刀柿啥呢楞质量，用甲醇(4.2.2)稀至刻度，最好井剧烈振摇。对每个样品均制备两份溶液，以mg/mL标明实际浓度。7.3 色谱分析7.3. 1 流动相(乙睛与含1%乙酸的水、除气前的比例65: 35) 用真空过滤装置(5.4)将520mL乙腊(4.2.3)经FH型微膜过滤
8、器过洁、.将水和冰乙酸按99: 1 (体积比)的比例混合，将此混合液280mL经HA型微膜过滤器(5.的过滤到已过洁、的乙腊溶液中;将流动相在磁力搅拌下减庄(压力30kPa)除气5min.然后将流动相转移至色谱仪贮液池中，设定流速为1. 0 mL/mirr。7.3.2 晌应因子的测定阔整记录仪/积分仪直至进样时基线不波动，此时开始记录积分信号(通常为进样后3min)，将检2 GB/ T 22293-2008/ISO 13685: 1997 测器和记录仪调节至合适灵敏度。每份NVA标准陪液重复进样20L，记录运行时间为NVA保留时间(通常为1min-5 min)外加1min范围内的包谱图(参见附
9、录白，每份标准溶掖至少进样三汰。标明各个色谱图上的NVA的峰面积，计算不同NVA浓度下(约0.2mg/mL和0.4mg/mL)的平均峰面积，按式(1)计算NVA的响应因子:nu nu一唱aEA-A 一川m-A Nc-一V N K . ( 1 ) 式中:CNV/ -NVA的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mU;A.、一一在相应浓度下NVA的平均峰面积。为了确保线性，两个浓度下测得的K川八值相差不得大于2%，标准曲线参见附录C。然后按式(2)式(7)分别计算每个姜醇和姜酣的K值:口一lqJ-A吐可u一-AUAt-qJnu nHd-ny 。，-nLti AA VV XN KK ，一-K ( 2 ) 式
10、中:291. 38一一姜畴-町的相对分子质量;293. 11一-NVA的相对分子质量。同理:K(严(;= KVA X 1.099 KI G -:. (:-I, X 1. 194 KSI s = K川八xO. 942 K .M1:-: .;_ K:-;v/ X 1. 037 K ICl S = K ,_ v X 1. 133 ( 3 ) ( 1 ) ( 5 ) . ( 6 ) . ( 7 ) 7.3.3 样品分析7.3.3. 1 干姜将各个浓度.1按7.2.1制备的萃取物性人色ii?仪，按7.3.2调节仪器，将记录时间延长至17min, 按保留时间顺序记录得到6J-G、8J-G、6J击和IL10
11、G相应的峰面积(典型色讲图参见附录D)。化合物8-S和I口oJ-S通常在二|工姜中很少出现，而保留时间接近于NVA的6J-G峰，在色谱图中通常是最高的.对于样品而言，其浓缩萃取物给出的L6J-G峰的面积大于浓度为0.1mg/mL的外标物NVA的峰面积，将按7.2.1得到的未浓缩萃取物注入色谱系统，采用色谱图来测定L6-Go7.3.3.2 姜油树脂将由7.2.2i例备的各姜油树脂溶液导人色谱系统，仪器调节同7.3.2，维持更长的操作时间约10 min)，按保留时间长短顺序记录得到对应于6J-G、8-G、6-S、10G、8-S、10J-S的峰面积(典型色谱剧见附录D)。叫-G和I6-S通常是最高的
12、色i普峰，6J-G的保留时间接近于NVA峰。对于町-G峰面积大于浓度为0.4mg/mL的标准NVA峰面积的样品，制备并向色谱系统中导人合适稀释皮的溶液，便可利用色谱图测定6Go8 结果表示按式(的分别计算干姜和姜汕树脂中姜醉和姜酣的浓度，其样品中6J-G的含量X以质量分数计，数值以%表示:x=-A:誓Ir.XK飞二-C . ( 8 ) 3 G/T 22293- 2008/ISO 13685: 1997 式中:A.仆G-样品色谱图中6J-G的峰面积EK飞1c. 6J-(;的响应因子;C一-一样品溶液中干姜或姜泊树脂的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mU。9 重现性相|司操作者.用同样的仪黯在同一实
13、验室、在较短的时间间隔内，用相同的测定材料和测定方法，测得的两个平行结果之间的绝对误差不得大于主牛牛品品JJ.L6J-G的误差为参照;要油树脂以61-(;或6J-S的误差为参照) 注=实验室间测定结果参见附4 GB/ T 22293-2008/ ISO 13685: 1997 附录A(资料性附录姜醇和姜酣化学结构CU. 011 姜醇化学结构b GB/T 22293-2008/ISO 13685: 1997 附录B(资料性附录NVA典型色谱图相对强度T主Z 。5 lO 图B.1NVA典型色谱图6 t/ min . . , ，、20 :0 5 15 10 +1电F D 。H .J_ :-V I主
14、Ii l.iII 1 B 1/ / GB/ T 22293- 2008/IS0 13685 : 1997 附录C(资料性附录姜醇、姜酣标准曲线.,- k 啕坠阳剖-.-同.E画军-罔. 1/ 回.I二哥、17 俨-f: 且，呻k1 -Y I _:t:t二1- H 町再JO.,Jl .-协.3。，4 , 回C1 岳醇声.棒准曲蜡Lr 旷一飞一7 GB/ T 22293-2008/ ISO 13685: 1997 附录(资料性附录)姜醇、姜酣典型色谱图D 的由。，E。，mw相对强度,1m; 的O-。.O-35 30 25 姜醇、姜酣典型色谙图20 15 10 图D.l5 。8 G8/T 22293
15、-2008/ISO 13685 : 1997 附录E(资料性附录)姜油树脂不同实验室测定结果表E.l测定1:用二氧化醋CC02)萃取的姜油树脂实验室 6J-(; 81-(; 10心总姜醇6-S 8 S 10-S 总姜盼11. 6 2. 5 3.6 17.7 4.5 1. 2 1. 5 7. 2 2 15.8 3.9 5.1 25.1 5. 6 0.8 6. -1 6.1 一3 18.6 4. 6 4.5 27.7 6. 8 1. 5 8. 3 8. 3 d 4 13. 7 1. 9 1. 9 17.5 3.2 O. :l 。.23. 7 一一一:J 13. 1 2.2 3.2 18.5 1.
16、-1 O. 7 5. 1 卜一6 15. 1 2. 2 2.0 18.5 3.9 0. 3 O. 6 1 . 8 7 13.3 2. 1 1. 1 16.8 1.4 0. 2 0. 2 -1 . 8 卜一平均值11. 5 2. 8 3.0 20.3 4.7 O. 7 2.9 5.8 最大偏差4. 1 1. 8 2.1 7.1 2. 1 0. 8 I 5. 1 I 2. 5 表E.2测定1:姜油树脂A实验室r GJ-G 刷|叫(;总姜醇6J-S 8 S l _-S 总姜酌5.1 1. 1 2. 3 8. 8 4. 1 1. 0 6.9 2 8. 8 2. 1 2.1 J:J. 6 5. :l 1
17、. 1 I寸-一飞63 0.1 2. 3 2.8卡25. 5 1. 1 6.6 4 5. 6 O. 9 1. 2 7.7 2. 9 O. :l O. :l 3.5 U 6. .1 1. 2 2. 0 9. 6 4. 5 。.85.3 一一-6 6. -1 1. 2 1. 0 8. 1 3. ; 0. 5 1. 0 5.0 一-一7 6.2 1. 3 0. 5 8.0 4咽。0.8 O. 5 5. 3 一一一.一一一 -.四回国-、-平均值6. 9 1. 5 1. 7 1 . 1 -1 . 3 。.8。.85.6 最大偏差3. 2 O. 9 1. 2 5. 1 l. 4 。.5O. 7 2. 1
18、 表E.3ooJ定1:姜油树脂B实验军6J|凶。10J心总姜E享l6-S L8J可S10J S 总姜盼1. 5 1. 1 2. 1 7.7 1. 2 1. 0 1. 2 6. 4 2 6.4 1. 3 2. 3 10 1. :1 1. 2 一:J . :J 3 主卡二2. 3 10. 2 1.1 l. 1 一5.5 一一一一一-一一-一卜一一一一一。.96.5 2. 8 O. :1 。.a 3.1 一一一一;:, 1. 3 6. 1 3.5 O. 9 1.1 卜一一卜一-6 。.96. 2 3. 3 O. 1 1. 0 1. 7 一一一一一7 5.1 1. 1 O. 7 G. 9 1.0 O.
19、 7 0.9 5.6 平均值5. 2 1. 1 1. 5 7.7 3.8 O. 8 0.9 S. 段大偏差1. 2 。.30.8 2.5 1. 0 O. 5 0. 6 1. 7 9 G/ T 22293-2008/ ISO 13685: 1997 表E.4测定2:用二氧化碳(C02)萃取的姜油树脂实验宝6G 8 G )O-G 总姿醇6J-S 8 S 10 S 总姜盼l 11. 8 3.0 1. 8 J 6.6 2.4 0.2 O. 3 2.9 -2 12. 1 3. 1 1. 8 17.3 2.4 0. 3 0.3 2. 7 JI.6 2.7 4. . 2 2 J. 5 3. 2 0. 6 3
20、.8 - 4 11. 5 3. 5 4.3 22.3 3. 5 0.6 1 . 1 ._-一5 13.9 1. 8 1. 6 17.3 2. 2 0.2 0.2 2. 6 平均值13.44 2.82 2. 74 19.0 2. 74. 0.38 0.26 4.34 -级大偏差J. 64 J. 02 l. 56 3.3 O. 76 0.22 0.6 l. 74 表E.5测定2:姜油树脂C实验穰 6J-G 8J-G IOJ-G 总il- 6S 8 S IO -S 总姜盼1 3. 7 0.9 1. 0 5. 6 3.3 0. 4 0.9 4.6 一-_ , 2 4.0 1. 0 1. 6 6.6 3.3 0. 5 0.9 4. 7 f-一-3 1. 2 O. 7 1. 5 6. 4 1. 1 0. 8 1 . 9 H一4 5. 1 1. 5 1. 4 8. 3 4. 2 0. 8 - 5. 0 - 一一5 1 . 0 O. 7 O. 7 5.4 3.0 0.1 0.3 3. 7 -平均值1.26 0.96 1.24 6. 1 6 3. 58 O. 58 O. 70 t . 58 -一.u大偏差l. 14 0. 54 0.54 1. 81 0. 58 0. 22 0.40 0.88 10
