1、ICS 67040X 80 a目中华人民共和国国家标准GBT 22729-20082008-12-31发布海洋鱼低聚肽粉Oligopeptides powder of marine fish2009080 1实施车瞀鹃紫瓣警襻瞥星发布中国国家标准化管理委员会“”。刖 昌GBT 22729-2008本标准的附录A为规范性附录。本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出。本标准由全国特殊膳食标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国食品发酵工业研究院、浙江海氏生物科技有限公司、北京中食海氏生物技术有限公司、北京同仁堂健康药业股份有限公司、江南大学分析测试中心。本标准主要起草人：蔡木易、易维学、陈岩、
2、戴军、张宏、徐亚光、谷瑞增、张如民。海洋鱼低聚肽粉GBT 22729-20081范围本标准规定了海洋鱼低聚肽粉的产品分类、技术要求、试验方法、检验规则以及标签、包装、运输和贮存。本标准适用于海洋鱼低聚肽粉产品的生产、检验和销售。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 2733鲜、冻动物性水产品卫生标准GBT 47892食品卫生微生物学检验菌落总数测定GBT 47
3、893食品卫生微生物学检验大肠菌群测定GBT 47894食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GBT 47895食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验GBT 478910食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GBT 478915食品卫生微生物学检验霉菌和酵母计数GBT 50093食品中水分的测定GBT 50094食品中灰分的测定GBT 50095食品中蛋白质的测定GBT 500911食品中总砷及无机砷的测定GBT 500912食品中铅的测定GBT 500915食品中镉的测定GBT 500917食品中总汞及有机汞的测定GBT 500992食品中钙的测定GBT 5009124食品中氨基酸的测定GBT 9695
4、23 肉与肉制品羟脯氨酸含量测定3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。31海洋鱼低聚肽粉oligopeptides powder of marine fish以海洋鱼皮、鱼骨或鱼肉为原料，用酶解法生产的、相对分子质量低于l 000 U的低聚肽(短肽)为主要成分的粉末状产品。32胶原collagen鱼、牛、猪等动物的皮、骨等组织中一类含特有的羟脯氨酸的无支链纤维蛋白质。】GBT 22729-20084产品分类41分类原则产品按原料分为三类。42类别421海洋鱼皮胶原低聚肽粉以海洋鱼皮为原料生产的低聚肽粉产品。422海洋鱼骨胶原低聚肽粉以海洋鱼骨为原料生产的低聚肽粉产品。423海洋鱼肉低聚肽粉以
5、海洋鱼肉为原料生产的低聚肽粉产品。5技术要求51原辅材料海洋鱼皮、海洋鱼骨、海洋鱼肉：应符合GB 2733规定的要求。其他原辅材料应符合相应的国家标准或行业标准。52感官特性产品的感官特性应符合表1的规定。表1项 目 特 性形 态 粉末状，无结块色 泽 白色或淡黄色杂 质 无正常视力可见的外来杂质53理化指标产品的理化指标应符合表2的规定。表2指 标项 目海洋鱼皮肢原低聚肽粉 海洋鱼骨胶原低聚肚粉 海洋鱼肉低聚肽粉总氮(以干基计) 145 135 135低聚肽(以干基计) 85O 75O 80o羟脯氨酸 3o 2o钙(mgkg) 400灰分蹦 70 7 0相对分子质量小于1 000 u的蛋白质
6、850水解物所占比例“ 干燥失重“ 7054污染物指标产品中污染物指标应符合表3的规定。2表3GBT 22729-2008项 目 指 标无机砷(mgkg) 05铅(mgkg) 05镉(mgkg) 01甲基汞(mgkg) o555微生物指标产品中微生物指标应符合表4的规定。表4项 目 指 标菌落总数(CFUg) 5 000大肠菌群(MPNIOOg) 30霉菌(CFUg) 25酵母(CFUg) 25致病菌(沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌) 不得检出6试验方法61感官检验称取10 g样品，散放在白色搪瓷平盘中，在自然光下直接观察样品的形态、色泽和杂质。62总氨按照GBT 50095规定的方法测定
7、。测定结果不进行蛋白质系数换算，以总氮质量分数表示。63低聚肽631方法提要低分子质量的蛋白质水解物(包括低聚肽及游离氨基酸)可溶于三氯乙酸溶液；高分子质量的蛋白质在三氯乙酸溶液中易沉淀。样品经三氯乙酸溶液溶解后，离心分离出沉淀蛋白质，收集离心清液。按照GBT 50095规定的方法测定离心清液的酸溶蛋白质水解物含量，清液的酸溶蛋白质水解物含量减去游离氨基酸含量得到低聚肽的含量。632分析步骤6321酸溶蛋白质水解物含量的测定称取2 g(精确至0001 g)样品，加入10mLl5三氯乙酸溶液，混合均匀，静置10rain。将样品溶液在4 000 rrain下离心10 rain后，取全部离心清液，按
8、GBT 50095规定的方法测定清液的蛋白质水解物含量，计算出样品中酸溶蛋白质水解物含量。蛋白质换算系数为625，检验结果根据样品的干燥失重，折算为干基。6322游离氨基酸含量的测定63221氨基酸自动分析仪测定法称取002 go03 g样品，精确至00001 g，用35磺基水杨酸溶液溶解均匀。将样品溶液转移至50 mL容量瓶中，定容。将样品溶液在转速为4 000 rrain离心机上离心5 rain，取离心清液，再用045”m微孔滤膜过滤离心清液，将滤液转移至50 mL容量瓶中，定容摇匀备用，然后按照GBT 5009124规定的方法，用氨基酸自动分析仪测定其游离氨基酸含量。3GBT 22729
9、-200863222高效液相色谱仪测定法632221方法提要用三氯乙酸沉淀蛋白质后，以邻苯二甲醛(0PA)和氯甲酸芴甲酯(FMOC-CI)分别作为一级氨基酸和二级氨基酸的衍生反应试剂，采用柱前自动衍生化反相高效液相色谱法测定海洋鱼低聚肽粉中的游离氨基酸总量。632222仪器a)高效液相色谱仪：配四元梯度泵，紫外检测器，自动进样器和化学工作站软件及在线脱气机。b)分析天平：感量0000 1 g。c)pH计。632223试剂三乙胺、四氢呋喃、乙酸、硼酸，均为分析纯；甲醇、乙腈、氨基酸标准晶、邻苯二甲醛(OPA)、氯甲酸芴甲酯(FMOC-C1)均为色谱纯；超纯水。632224测定称取样品05 g，精
10、确至00001 g，于25mL容量瓶中，加5三氯乙酸10mL沉淀2 h，定容摇匀，过滤，于10 000 rmin离心15 rain，取上清液上机，采用外标法进行测定。色谱条件：分析柱：Hypersil AAODS，5 ktm，200 mE21 ram(内径)。流动相：A液：含0018三乙胺(TEA)的20mmolL乙酸钠缓冲液，用稀乙酸调至pH72，加03四氢呋喃(THF)；B液：20的100mmolL乙酸钠缓冲液，用稀乙酸调至pH72，加40乙腈和40甲醇。梯度洗脱程序：0 rain时A液为100，在17 rain内B液由0至60；18 rain时B液为100，并保持至24 rain；25r
11、ain时B液回到0。流速：181 rain前为045 mLmin；185 rain升至08 mLmin，并保持至239 rain；24 rain降回至045 mLmin。紫外检测：测定一级氨基酸用338 nril，二级氨基酸用262 nm(15 rain后)。荧光检测：测定一级氨基酸激发波长340 nrrI，发射渡长450 nm；145 rain后将波长切换到266 rim(激发)和305 nm(发射)进行二级氨基酸的测定。633结果计算低聚肽含量x-按式(1)计算：XjXzX3 (1)式中：X z样品中低聚肽含量(以于基计)，；X。样品中酸溶蛋白质水解物含量(以干基计)，；xs样品中游离氨基
12、酸含量(以干基计)，。64相对分子质量小于1 000 U的蛋白水解物所占比例按照附录A规定的方法测定。65羟脯氨酸按照GBT 969523规定的方法测定。66钙按照GBT 500992规定的方法测定。67干燥失重按照GBT 50093规定的方法测定。68灰分按照GBT 50094规定的方法测定。69无机砷按照GBT 5009II规定的方法测定。4GBT 22729-2008610铅按照GBT 500912规定的方法测定。611镉按照GBT 500915规定的方法测定。612甲基汞按照GBT 500917规定的方法测定。613菌落总数按照GBT 47892规定的方法检验。614大肠菌群按照GBT
13、 47893规定的方法检验。615霉菌和酵母按照GBT 478915规定的方法检验。616致病菌沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌分别按照GBT 47894、GBT 47895、GBT 478910规定的方法检验。7检验规则71检验分类711出厂检验出厂检验的项目包括：感官特性、总氮、低聚肽、相对分子质量小于1 000 u的蛋白质水解物所占比例、干燥失重、灰分(海洋鱼骨胶原低聚肽粉除外)、菌落总数、大肠菌群。712型式检验型式检验的项目包括52、5，3、54、55中规定的全部项目。常年生产的产品每年应进行一次型式检验，但有下列情况之一时亦应进行型式检验：新产品投产时；原料、工艺有较大改变时；长
14、期停产后恢复生产时；出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时；质量监督机构提出进行型式检验的要求时。72抽样721组批同一班次生产的，同类型的产品为一批。722抽样方法和数量从每批产品中随机抽取不少于3个最小包装单位样品，用取样工具伸入每袋的34处取样，所取试样不得少于100 g。将采取的试样混匀，装入清洁、干燥、带磨口玻璃瓶中，瓶上粘贴标签，注明生产班次、产品类别、批号、取样日期和地点。微生物检验按无菌操作取样。73判定规则731 出厂检验判定和复检7311 出厂检验项目全部符合本标准要求的产品判为合格品。7312出厂检验项目中微生物指标不符合本标准或发现恶性杂质(如玻璃、金属、昆虫等)，
15、不得复检，判为不合格品。SGBT 2272920087313出厂检验项目中除7312提到的指标外，其他指标不符合本标准，可在同批产品中加倍抽样，对不合格项目进行复检，复检结果仍不符合本标准规定，判为不合格品。732型式检验判定和复检7321 型式检验项目全部符合本标准要求的产品判为合格品。7。322型式检验项目中微生物指标不符合本标准或发现恶性杂质(如玻璃、金属、昆虫等)，不得复检，判为不合格品。7323型式检验项目中除732提到的指标外，其他指标不符合本标准，可在同批产品中加倍抽样，对不合格项目进行复检，复检结果仍不符合本标准规定，判为不合格品。8标签、包装、运输和贮存81标签8，TT产品标
16、签上应标示产品名称、净含量、制造者及经销者的名称和地址、生产日期、生产批号、保质期、产品标准号等。812产品名称应符合第4章中的要求。82包装包装容器应符合食品容器和包装材料的卫生标准。83运输运输产品的工具、车辆应清洁、卫生、干燥，无污染物。运输产品过程中，应有遮盖，防雨防晒，不能与有毒、有害、有异味的物品混运。84贮存841产品不应露天堆放。成品仓库应清洁、干燥、通风，无鼠虫害。842产品堆放应有垫板，离地10 cm以上，离墙20 cm以上。843产品不应与有毒、有害、有异味、易腐败变质或潮湿的物品同仓库存放。6A1方法提要附录A(规范性附录)相对分子质量小于1 000 u的蛋白质水解物所
17、占比例(商效凝胶过滤色谱法)GBT 22729-2008相对分子质量小于1 000 u的蛋白质水解物(包括低聚肽和少量游离氨基酸)所占比例，采用高效凝胶过滤色谱法测定。即以多孔性填料为N；gN，依据样品组分分子体积大小的差别进行分离，在肽键的紫外吸收波长220 nm条件下检攫4，使用凝胶色谱测定相对分子质量分布的专用数据处理软件(即GPC软件)，对色谱图及其数据进行处理，计算得到蛋白质水解物的相对分子质量大小及分布范围，进而得到相对分子质量小于1 000 u的蛋白质水解物(包括低聚肽和少量游离氨基酸)所占比例。A2试剂A21乙腈：色谱纯。A22三氟乙酸：分析纯。A23水：超纯级或二次蒸馏水。A
18、24相对分子质量校正曲线所用标准品细胞色素C(cyyochrome，M,12500)。抑酞酶(aprotinin，M。6500)。杆菌酶(bacitracin，M，1450)。乙氨酸一乙氨酸一酪氨酸一精氨酸(M，451)。乙氨酸一乙氨酸一乙氨酸(Mr 189)。A3仪器和设备A31 高效液相色谱仪：配有紫外检测器和含有GPC数据处理软件的色谱工作站或积分仪。A32流动相真空抽滤脱气装置。A33超声波振荡器。A34分析天平：感量0000 1 g。A4 色谱条件与系统适应性实验色谱柱：TSKgel G2000 SWXL 300 minx 78 mm或性能与此相近的同类型其他适用于测定蛋白质和多肽的
19、凝胶柱。流动相：乙腈：水；三氟乙酸为45 t 55：01(体积比)。检测波长：UV220 nm。流速：05 mLmin。柱温：30。进样体积：10 pL。为使色谱系统符合检测要求，规定在上述色谱条件下，凝胶色谱柱的柱效即理论塔板数(N)按三肽标准品(乙氨酸一乙氨酸一乙氨酸)峰计算不低于5 000，低聚肽的分配系数(Kd)lg：E o1之间。，23454444422222AAAAAGBT 22729-2008A5相对分子质量校正曲线制作分别用流动相配制成01(质量浓度)的上述不同相对分子质量的肽标准品溶液，用孔径为02 pmo5,um聚四氟乙烯或尼龙过滤膜过滤后分别进样，得到系列标准品的色谱图。以相对分子质量的对数(19M，)对保留时间作图或作线性回归得到相对分子质量校正曲线及其方程。A6样品制备称取样品200 mg于10 mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，超声振荡10 min，使样品充分溶解混匀，用孔径为02 pmo5tm聚四氟乙烯或尼龙过滤膜过滤后，上机进样。A7相对分子质量的计算将第A6章制备的样品溶液在上述色谱条件下分析。然后用GPC数据处理软件，将样品的色谱数据代人校正曲线方程中进行计算，即可得到样品中肽的相对分子质量及其分布范围。用峰面积归一化法计算相对分子质量范围在1 000 U以下的蛋白质水解物的峰面积相对百分比之和。
