1、lCS 65150B 51 a亘中华人民共和国国家标准GBT 229 1 320082008-12-31发布石Stone flounder鲽200905-0 1实施宰瞀鹳鬻瓣警襻瞥鐾发布中国国家标准化管理委员会“刖 吾本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归口。本标准起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所。本标准主要起草人：张岩、刘曼红、肖永双、于函。GBT 229132008石 鲽GBT 229 1 320081 范围本标准规定了石鲽(Kareius bicoloratus)的主要形态特征、生长与繁殖、遗传学特性
2、，以及检测方法。本标准适用于石鲽的种质检测与鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 1865412养殖鱼类种质检验第12部分：染色体组型分析GBT 19782中国对虾GB 20556 2006三疣梭子蟹3名称与分类31 学名石鲽Kareius bicoloratus Basilewsky，1855。32分类位置鲽形目(Pleuronectiformes)
3、、鲽科(P1euronectidae)、鲽亚科(Pleuronectinae)、石鲽属(Kareius)。4主要形态特征41外部形态特征体长椭圆形，背腹缘凸度相似。尾柄长与高相近。头部背缘在上眼前缘上方有一凹刻。大鱼有粗骨质突起，前端延向两眼前缘。前鼻孔有管状皮突起；右鼻孔位眼间隔前端吻右侧；左鼻孔约位上眼前缘中央头左侧。两颌左侧略长，右上颌约达下眼瞳孔前缘下方。口闭时下颌微突出。有一下颏突起。两颌有扁牙一行，牙端截形。前鳃盖后缘外露而不游离。鳃孔上端略过胸鳍基。鳃峡后端距眼较距前鳃盖骨后缘近。小鱼皮内埋有退化的小鳞。成年鱼无鳞，在体右侧沿侧线及侧线与背、腹缘间各有一纵行粗骨板，下方两行骨板较
4、小；左侧除侧线前方头部有一纵行粗骨嵴外，常无粗骨板，仅少数在侧线与背缘间有一纵行分散的小骨板。左右侧线无明显的弧状弯曲部，颞上枝短，约达第6背鳍条附近；有眼下枝。背鳍鳍条不分枝，后端鳍条很细小。臀鳍形似背鳍。第一间脉棘突出。右胸鳍小刀状，第4鳍条最长，中央6鳍条-8鳍条分枝；左胸鳍圆形，中央无或有1鳍条3鳍条分枝，长约为左胸鳍4734。腹鳍基短，近似对称，鳍条不分枝，第3鳍条最长，约达臀鳍始点前后。尾鳍圆截形，中央11鳍条13鳍条分枝。头体右侧黄褐色，粗骨板微红，鳍橙黄色，尾鳍较暗。体侧及鳍上常有白斑。石鲽的外部形态见图1。GBT 229132008石鳞生长方程和体长体重关系参见附录A。石鳔的
5、体长与体重的实测值见表2表2石鳔体长与体重的实蒯值体长cm 体重h 体长cm 悼重托 体长em 体重g表2(续)体Kcm 体g 件Kcm 体镕地 体m幢149 90 28140 81 40152l轮1 b2 40153 7l 601 53 8857l 81 405 2繁殖5 2 1性成熟年龄科蝶雌鱼和雄氕的性成熟年龄均为二特5 2 2繁殖期fI鲽埘J1秋事降温利，卵煎类，繁殖期为1 0月底剜12月初秋季水温在13以F性腺开始发膏，lO以F可以哒到成熟排卵5 2 3繁殖力开鲽性成熟时，分批多狄，“卵，一尾体重1 kg的亲鱼一次产卵扒为2 810粒3210粘一个产卵期的产卵囔奇种Yd选0 7310
6、耗2 65105粒。6遍传学特性6 1细胞遗传学特性7I鲽的染包体数目为孙一18棱舞为2n=48 t，打的染色体核型地罔2。b t五 8t。1、7：。 w一 、一 Ir，一-Ol n l a II O - ? 一 圈2石鳞的染色体核型6 2生化遗传特性石缫肌肉乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳图谱见图3，表现为一条带国3石鳙肌肉LDH同工酶电泳图谱6 3分子遗传特性采用DNA序列分析技术，对石鲽的线粒体16S rRNA(棱糖体IgS rRNA)基因片段进行了PCR扩增和序列测定，1 6S rRNA摹因片段序列见图4。TTG。G M GT AT TC唧T6CC CmCT引 舯删TTTH cAM,G
7、GTA6cqT tG ,C CT6T fiTGA 120w6 qTMC rTM c研口 0嘶6TCAMM 丁c TCCcT6 lnBM wGGG GAT0H 眦洲 cG “0嗍TW甜 HAC c02CP, 6CTM6TC TMT L-6眦 nGAT G1wT 300tt6AC“T6666 MTfiC“M fH,Teg 6Af,c 嘲crG 0”cT wCC,“咖口删“MTw T6ACCcT 4206ATGTTM咄Tc从ccnccc Tc1“cGc T02 ccITT 4110删1嘲cM 666fT TA OCTT6 Tcc m。叶 540wcccGcT AIrh,GGTG C6TcT 6t0“
8、 AC6T 575图4 16S rRNA基因片段序列7检测方法7 1繁殖力的测定用天平或杆秤称产卵前、后雌亲鱼的重量，前后两次称重之差即为产卵的重量。用电半天平称刚产出的卵1 0 g左右，在解剖镜下计数，平行两次，平均值为卵密度(粒每克)。产卵量接式(1)计算。G=(【 2)(n1Zwa】+H22w_z) (1)式巾：G 产卵量，单位为粒；旷产卵前亲鱼重量单位为克(g)；产卵后亲鱼重量，单位为克(g)； r试样1的卵粒数，单位为粒；叫#， 试样1重量，单位为克(g)；n： 试样2的卵粒数，单位为粒；tw z 试样2重量单位为克(g)。7 2染色体殛核型染色体厦核型的测定按照GBT 18654
9、12的规定执行。7 3生化遗传学特征的谢定7 3 l样品制备活体或低温样品带回实验室。取肌肉密封放人超低温冰箱(一76)或浊氮罐巾贮存。将部分组织(约0 6 g)取出放人玻璃匀浆器中，加入等体积双蒸水或I：1(体积重量比)的O 1 molL磷酸缓冲GBT 229 1 32008液(pH 7o)(配制方法见GB 20556 2006附录A)，冰水浴中匀浆后，倒人15mL离心管内，在04冷冻离心机中，以15 000 rrain离心15 min，离心后取上清液作为电泳样品。732电泳分析采用淀粉凝胶电泳方法，凝胶浓度为12，电泳缓冲系统为TC，pH 70(配制方法见GB 205562006附录A)，
10、恒流(电压大小为8 Vcm)电泳5 h6 h。电泳过程在4冰箱中进行。凝胶厚度为6 mm，电泳后切成4片5片进行染色，染色过程在37恒温箱中进行，染色液的配制按GBT 19782的规定执行。74分子遗传学特征的测定741 DNA提取取肌肉组织，尽量剪碎，用DNA提取试剂盒或常规酚方法提取基因组DNA，TE溶解后一20保存备用，TE溶液的配制见GB 20556-一2006附录A。742 PCR扩增7421引物引物16sARBR序列为：16sAR：5GCCTGTTTATCAAAAACAT 3；16sBR：5CCGGTCTGAACTCAGATCACGT 3 7。7422 PeR反应体系25 pL P
11、CR扩增反应体系内含：20 mmolL氯化镁(MgCl。)，02 mmolL每种dNTPs，02 p-molL每种引物，30 ng DNA模板，1单位raq酶，及1缓冲液。74，23 PcR反应程序94预变性2 min，然后9445 S，501 min，721 rain，使用热盖，循环35次，最后72延伸5 min。7424结果的记录PCR产物14琼脂糖凝胶电泳，EB染色，凝胶成像系统观察、照相。743 PeR产物克隆PCR产物经回收纯化后，连接到PMDl8一T载体上。连接反应体积10 pL，其中载体l pL，连接酶I 5 pL，PCR产物4 pL，16连接1 h或4过夜，然后连接液转化感受态
12、大肠杆菌，涂平板，蓝白斑筛选阳性克隆，液体培养基培养，提纯质粒后用EcoRI和Hindm酶切检测有无插入片段。744序列测定对回收质粒进行测序反应，产物纯化后在DNA测序仪上测序；为保证测序的可靠性和准确性，采用双向测序，并进行人工核对、校正。8判定规则被检样品符合第4章、第6章要求的为合格样品。GBT 229132008附录A(资料性附录)石鲽生长方程和体长体重关系A1石鲽生长方程石鲽的生长可用VonBertalanffy生长方程表示，通过对黄海、渤海沿岸拖网调查取得的293个样品的回归分析，石鲽的生长方程式见式(A1)式(A4)。早：L。一49728舍：L。一36542早：w：一497280：W。一36542式中：L：体长，单位为毫米(ram)；w。体重，单位为克(g)；年龄，单位为龄；49728系数；36542一一系数。A2石鲽体长体重关系e o2B(。73) -e-o41(。o 73) -ro 26(。73318eo4“o 73)3“-通过对黄海、渤海沿岸拖网调查取得的293个样品的回归分析式(A6)。早：w=0006 1L 3。”舍：7U一0014 4L 3。“式中：w鱼体体重，单位为克(g)；L鱼体体长，单位为厘米(cm)；0006 1系数；0014 4一一系数。石鲽的体长、体重关系见式(A 5)、(A5)(A6)4AAAAl(
