1、ICS 67050X 04 缮亘中华人民共T-n国国家标准GBT 22956-2008河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮残留量的测定 液相色谱一串联质谱法Determination of praziquantel residue in fugu，eel and baked eel-LCMSMS method2008-12-31发布 2009-05-01实施丰瞀徽鬻瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会况111刖 吾GBT 22956-2008本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验
2、检疫局。本标准主要起草人：林峰、李志勇、吴映璇、欧阳少伦、林海丹、邵琳智、庞国芳。河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮残留量的测定液相色谱一串联质谱法GBT 22956-20081范围本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮残留量的液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中吡喹酮残留量的测定。本标准的方法检出限：河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中吡喹酮残留量的检出限为5 pgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件
3、的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 63791测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第l部分：总则与定义(GBT 63791-2004，IS0 5725一l：1994，IDT)GBT 63792测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GBT 63792 2004，Is0 57252：】994，IDT)GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBr 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD)3原理采用乙酸乙酯提取样品中的吡喹酮残留，提取液经碱性氧化铝小柱净化，样品溶液供液相色谱一串联质谱仪
4、检测，外标峰面积法定量。4试剂和材料除特别规定外，所用试剂均为分析纯，水为GBT 6682规定的一级水。4，1乙腈：色谱纯。42甲醇：色谱纯。43乙酸乙酯。44冰乙酸。45 01乙酸溶液：准确移取10 mL冰乙酸(44)至1 L容量瓶中，加水至刻度，摇匀备用。46碱性氧化铝柱或性能相当者：1 g，6 mL。47标准品：吡喹酮(praziquantel，CAS：55268741)，纯度98。48 100 mgL标准储备液：准确称取吡喹酮标准品100 mg(准确至001 mg)，用甲醇溶解并定容至100 mL。该标准储备液避光置于一18冰箱中保存。49标准工作液：根据需要，吸取一定量的100 mg
5、L吡喹酮标准储备液(48)用乙腈一水(2+3)溶液稀释成适当浓度的标准工作液，使用前配制。410基质混合标准工作溶液：根据需要，吸取不同体积的标准工作液(49)，用空白样品提取液配制成不同浓度的基质混合标准工作溶液，使用前配制。411滤膜：02 pm。】GBT 22956-20085仪器和设备51液相色谱一串联质谱联用仪：配有电喷雾(ESI)源。52离心机：转速大于或等于4 000 rmin。53组织捣碎机。54匀浆机：转速大于或等于8 000 rrain。55液体混合器。56超声波水浴。57固相萃取装置。58旋转蒸发仪。5。9天平；感量分别为001 mg和0。01 g。6样品制备与保存取样品
6、中有代表性的可食部分约500 g，用组织捣碎机粉碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于一18冰箱内保存。制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7测定步骤71提取准确称取2 g样品(准确至001 g)至50 mL离心管中，加入10 mL乙酸乙酯，匀浆机上8 000 rmin均质30 s，4 000 rmin离心5min，上清液转移至25mL比色管中；另取一50mL离心管加入10mL乙酸乙酯，洗涤匀浆刀头10 S，洗涤液移人前一离心管中，用玻棒捣碎离一fi,管中的沉淀，液体混合器上涡旋混合2min，4 000 rmin离心5min，上清液合并至25mL比色管，用乙酸乙酯定容
7、至250mL，摇匀备用。72净化准确移取250mL样品提取液至蒸发瓶中，在40下旋转蒸发至干，用2mL甲醇溶解，液体混匀器上混旋2 rain，置超声波水浴中超声5 min，该样液全部转移至碱性氧化铝净化柱(46)上，控制流速在1 mLmin2 mLmin，用2 mL甲醇淋洗净化柱，收集全部流出液并定量转移至浓缩瓶中，40下真空旋转蒸发至干，用100mL乙腈溶解残渣，并置超声波水浴中超声振荡1rain，加人100mL水，置超声波水浴中超声振荡1 min，02 pm滤膜(411)过滤，供液相色谱串联质谱测定。73测定条件731液相色谱参考条件a)色谱柱：Intersil C8，5 pm，150 m
8、mX21 mm(内径)或相当者；b)柱温：40；c) 流动相：乙腈一o1乙酸(4+6)；d)流速：030 mLmin；e)进样量：10 pL。732质谱参考条件a)离子源：电喷雾离子源；b)扫描方式：正离子扫描；c)检测方式：多反应监测模式(MRM)；d)监测离子对、定量离子对见表1；2表1 吡喹酮的监测离子对和定量离子对GBT 22956-2008监测离子对(mz) 定量离子对(，zz)313203，31383 313203e)雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度
9、，参考质谱参数见表2。表2参考质谱参数质谱参数 参数值雾化气kPa 4482气帘气kPa 1379辅助加热气kPa 5171碰撞气 中等辅助加热气温度 500喷雾电压V 5 000去集簇电压V 70碰撞能V 23(m如313203)，40(mz 31383)733液相色谱一串联质谱测定7331定性测定被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在士z5之内；且样品谱图中被测组分监测离子的相对离子丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的监测离子的相对离子丰度进行比较。偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表3定性确
10、证时相对离子丰度的最大允许偏差 以表示相对离子丰度K K50 20K50 10K20 K10允许的最大偏差 土20 士25 土30 土507332定量测定在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液(41 0)进样，以峰面积为纵坐标，基质昆合标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。吡喹酮标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图参见附录A中的图A1。吡喹酮的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见附录B中的表B1。74平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。75空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。8结果计算
11、河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮残留量的测定结果按式(1)计算xc暑舞3GBT 22956-2008式中：x试样中吡喹酮残留量，单位为微克每千克(pgkg)；c从标准工作曲线得到的吡喹酮溶液浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)y样品溶液最终定容体积，单位为毫升(mL)；m样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克(g)。计算结果应扣除空白值。9精密度91一般规定本标准的精密度数据是按照GBT 63791和GBT 63792的规定确定的，重复性和再现性的值以95的可信度来计算。92重复性在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，被测物的添加浓度范围及重复性方程见表4。表4 添加浓
12、度范围及重复性和再现性方程 单位为微克每千克样品基质 添加浓度范围 重复性限r 再现性限R河豚鱼肌肉 540 r一0100 m一0379 R一0282 m一0175鳗鱼肌肉 540 r-0046 5卅+0553 R一0218优一0 077烤鳗 540 r一0 127 rzt一0037 R一0149 m4-237注：m为两次测定结果的算术平均值。如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。93再现性在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，被测物的添加浓度范围及再现性方程见表4。4附录A(资料性附录)标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图吡喹酮标准溶液
13、的多反应监测(MRM)色谱图见图A1。GBT 22956-2008I f图A1 吡瞳酮标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图544444444444400000eeeeeeeeeeee2O8642086420OO0001轧二：卫z色iiiii8642导、趔趟誓GBT 22956-2008附录B(资料性附录)回收率吡喹酮的添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B1。表B1 吡瞳酮的添加浓度夏其平均回收率的试验数据样品基质 添加浓度(pgkg) 平均回收率5 83010 1018河豚鱼肌肉20 93 840 95 75 76210 798鳗鱼肌肉20 112140 10955 100010 99o烤鳗20 101o40 104o6
